环糊精衍生物安全性评价的一般方法.doc

环糊精衍生物安全性评价的一般方法环糊精衍生物安全性评价的一般方法撰稿：余书勤环糊精衍生物是主要为药用而研发的辅料，按我国药品管理法，辅料指生产药品和调配处方时所用的赋形剂和附加剂，即除了主要药物活性成分以外一切物料的总称，是药物制剂的重要组成成分。因此本文所及多数内容适合于药用辅料的安全性评价。2005年6月国家食品药品监督管理局药品注册司根据药品管理法第十一条规定：生产药品所需的原料、辅料，必须符合药用要求。结合有关规定制定了药用辅料注册申报资料要求，在药用辅料注册管理办法出台之前，药用辅料注册申请人按此要求申报资料。1安全性评价的基本内容药用辅料注册申报资料要求中所示要的内容有：药理毒理研究资料综述（编号16）、对拟应用药物的药效学影响试验资料及文献资料（编号17）、一般药理研究的试验资料及文献资料（编号18）、急性毒性试验资料及文献资料（编号19）、长期毒性试验资料及文献资料（编号20）、过敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、 皮肤、粘膜、肌肉等）刺激性等主要与局部、全身给药相关的特殊安全性试验研究和文献资料（编号21）、致突变试验资料及文献资料（编号22）、生殖毒性试验资料及文献资料（编号23）、致癌试验资料及文献资料（编号24）。另外，对于广泛吸收或可能生物转化的辅料需要提供药代动力学资料。2基本原则据辅料的定义，决定其可能与众多药物组合，且由各种途经进入体内，因此，从某种意义上来说, 辅料的安全性评价意义更大于某一药物原料的评价。本文参考了FDA、SFDA审评中心有关资料，主要对新辅料的安全性评价进行探讨。辅料可能是毒性物质，对药物中拟用的新辅料进行风险-效益评估，并对其建立容许性和安全性限度是十分重要的。新辅料的应用需要安全资料的支持，可通过合理计划，以相对高效的方式评价辅料的毒理学性质。如一些辅料已有的人体资料可以替代非临床安全性资料，因此，在已有相关途径人体暴露资料时，可能不需要按以下提出的完整组合的毒理学试验进行评价。如果现有资料不能完全支持拟用状况，将需要提供附加的安全性资料。如果可行的话，也可能需要提供药物辅料相互作用研究资料。新辅料的安全性评价应按 GLP规则进行。就环糊精衍生物的安全性评价而而言，目前已知的安全性问题，以静脉注射羟丙基环糊精为例，其不良反应主要为肾毒性和溶血性，在肾毒性方面，主要与该辅料的已知杂质环糊精有关， 此杂质首先引起肾小管远端空泡样病变，随后在表皮细胞内出现巨大的溶酶体和明显的针状结晶体，现推测该结晶体很有可能是环糊精与胆固醇或脂蛋白的复合物。进而出现细胞器的显著性变化，诸如线粒体肿胀变形、高尔基体和滑面内质网基底部的细胞出现细胞间紧密连接不可逆的断裂，这种结果直接导致肾功能的减退甚至丧失。所以对羟丙基环糊精应非常严格的限定环糊精的残留量。另一个不良反应就是溶血性。试验证明在静脉注射途径下，0.02mol/L即会出现轻微的溶血现象，在0.04mol/L时出现明显的溶血。3 . 新药用辅料非临床安全性研究的要求31一般药理学，或安全药理学药用辅料是不容许其本身有药理活性的，如果一个辅料具有药理学活性，可能会影响到其后续开发过程，因此在辅料的开发前期获得这些资料十分重要。一般药理学的研究内容包括对精神神经、心血管、呼吸、泌尿、消化等系统的影响，尽可能全面系统。基本要求包括受试品应提供受试药来源、配制方法、储存条件、含量。动物：应说明动物来源、种属、品系、体重、性别、数量、合格证、饲养条件。给药途经尽可能与临床途径一致，剂量设置：应设置2-3 个剂量，剂量的设置应考虑新辅料在药用情况下的所用量。评价主要指标应侧重安全性方面的评价，应详细描述各种定性定量指标。32急性毒性试验动物和给药途径选择：应提供两种动物的急性毒性试验资料，一种为啮齿类动物，另一种为非啮齿类动物。溶于水的药用辅料，啮齿类动物应提供两种给药途径的毒性试验资料，一种静脉注射途径，一种临床途径，若临床用静脉注射途径时，可只做静脉注射的急性毒性试验。理论上讲，辅料是不会有毒性的，因此，常需进行的是最大耐受量试验，即在合理的浓度及合理的容量条件下，用最大的剂量给予实验动物，观察动物的反应。或单次口服固定剂量方法（Fixed-dose procedure），选择5、50、500和2000mg/kg 四个固定剂量。对于非啮齿类动物可进行近似致死剂量试验。应主要观察毒性症状的表现和提供的重要安全性参数如MTD、ALD等，包括动物毒性反应的出现时间和恢复时间、剂量-毒性反应曲线、致死剂量、可能提示的靶器官等。33长期毒性试验实验动物应品系确立、来源清楚、年轻健康，动物数原则上应满足统计学的要求。应详细说明给药方法，受试物的稳定性及说明动物食入受试药物的量的准确性和一致性等方面的资料，以确保获得可靠的试验结果。应尽量采用临床拟用剂型（如注射液），给药途径应尽量与临床给药途径一致，否则要说明理由，如临床为静脉者，因大鼠较长时间的给药困难，也可腹腔给药，但两种途径的相关性应有说明。给药周期应根据临床疗程来定，具体要求我国已基本参照ICH达成的一致。应设高、中、低三个剂量组和一个空白对照组。观察指标一般包括一般生理（如行为、体重、食量等）、血液学、血液生化、脏器肉眼及显微病理检查。实验数据、结果应经统计学处理，应认真分析结果与受试药的关系。应评述毒性症状的表现，如动物毒性反应的出现时间和恢复时间、死亡情况、毒性剂量-反应关系、无反应剂量和致死剂量和靶器官等。结论应能明确回答受试药长期服用时毒性反应的主要特点及安全剂量范围。34特殊毒理特殊毒理试验即三致试验，包括致突变试验、生殖毒性试验及致癌性试验。其中致突变试验也称遗传毒性试验，常规进行的为微生物回复突变试验、哺乳动物培养细胞染色体畸变试验、 啮齿类动物微核试验等。生殖毒性试验包括一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验及围产期毒性试验。致癌性试验包括短期致癌试验和长期致癌试验。35其它安全性评价试验根据辅料潜在的给药途经，尚需进行：若将作为注射用的辅料，需进行静脉或肌肉注射的刺激性试验、过敏试验和溶血试验。对于溶血试验，环糊精类更应注意。此外，还有可能要进行局部给药的安全性试验（皮肤或粘膜等）：皮肤过敏试验、光敏试验、刺激性（此项也可结合在长毒中评价），必要时（如对支持本品的有效性和安全性评价有重要意义时）应进行局部吸收试验。36药代动力学及毒代动力学试验新辅料是否要进行药代动力学？在现药用辅料注册申报资料要求中无此项资料的要求。目前我国新辅料的申报需同时报一个药品的制剂，往往需进行所报药物的动物药代动力学研究资料，而最多的是相对生物利用度试验。此处所分析的是如果新辅料在机体内是可代谢的，则需参考药物药代动力学研究要求进行此项试验了。内容包括药物吸收的速度和程度、全身分布状况、药物的血浆蛋白结合率；排泄的途径、速率和排泄量；阐明药物代谢转化途径及结构，并根据数学模型，得出药代动力学参数。动物，常用动物有小鼠，大鼠，兔，豚鼠、狗或猴。尽量在清醒状态下试验。口服给药不宜用兔等食草类动物 ）。分析方法（灵敏度、专一性、精密度、 回收率、 标准曲线）。药物标记的情况和稳定性（用放射性同位素标记物，在用前应进行纯度检查，非定位标记的药物浓度测定前应进行适当的分离处理，以保证检测浓度的可靠性）。给药途径和方法、剂量和周期等（给药途径与临床用药途径一致，应设置三个剂量，其中一个剂量应相当于药效剂量或临床有效剂量，高剂量应接近MTD）。提供以下试验结果：药时曲线和药代参数： 根据血药浓度时间数据，通过数学模型，计算药代动力学参数。静脉注射给药：至少应提供t1/2 ,Vd，AUC；血管外给药：至少应提供 Cmax，Tmax ，t1/2 ,Vd，AUC。吸收：吸收的特点。分布：组织分布的情况，尤其注意靶器官的分布。代谢：主要代谢产物及其与药效或毒性的关系；排泄：尿、粪及胆汁中的排泄。血浆蛋白结合率。毒代动力学评价可在长期毒性试验中进行。4FDA对新型药用辅料的要求本节内容可参见国家食品药品监督管理局药品审评中心FDA新药用辅料非临床研究考虑要点。首先要考虑的是最大临床使用周期，其不同使用周期，其安全性评价的试验组合会有差别。对任何新辅料而言，均需进行一般药理研究。对于最大临床使用周期为连续用药不超过14天的辅料，建议所进行的试验应至少包括：应在一种啮齿类动物和一种非啮齿类哺乳动物中按临床拟用途径进行急性毒性试验。按临床相关途径给药，进行吸收、分布、代谢和排泄研究。该项资料可通过单独的研究获得，也从作为与毒理学研究相关的毒代分析中获得。按临床拟用途径，在一种啮齿类动物和一种非啮齿类哺乳动物中进行周期为1个月的重复给药的毒性研究。该研究应根据当前最新的技术水平设计，应包括完整的临床病理学、组织病理学学和毒代动力学分析。评价辅料的生殖毒性对于最大临床使用周期为连续用药多于14天并少于或等于90天的辅料，建议除进行1个月的毒性研究外的所有研究，按临床拟用途径，在一种啮齿类动物和一种非啮齿类哺乳动物中进行周期为3个月的重复给药的毒性研究，该研究应根据当前最新的技术水平设计，应包括完整的临床病理学、组织病理学和毒代动力学分析。对于最大临床使用周期大于90天的辅料，建议除进行1个月及3个月的毒性研究外的所有研究。并采用一种啮齿类动物和合理的途径进行周期为6个月的重复给药毒性研究。该研究应根据当前最新的技术水平设计，应包括完整的临床病理学、组织病理学和毒代动力学分析。通常，在毒性较低的辅料的研究中，试验以MFD作为剂量上限。必要时可能需提供9个月或1年期的长期毒性试验。可能需提供致癌性试验。对于用于局部用制剂的辅料，如皮肤用药、鼻内用药、口内用药、眼科用药、直肠以及阴道用药或肺部用药中的辅料，除进行一些上述安全性研究外，尚要进行局部安全性评价。5日本对新型药用辅料的要求日本药局方（日本药典）制剂总则的制剂通则（3）项中有如下规定：制剂时除特别规定的物质外，为确保制剂保存过程中的性状、品质及提高制剂使用的顺应性，还可根据需要适当添加赋形剂、稳定剂、防腐剂、缓冲剂、矫味剂、助悬剂、乳化剂、芳香剂、助溶剂、着色剂、粘稠剂等辅料。但这些辅料不得影响制剂的剂量，或影响制剂的疗效及检验。此规定就是要求添加辅料制得的制剂即使稳定性和溶解性良好，但若有导致药效不能充分发挥、或影响其安全性，以及影响药品的质量判断时，仍不得使用。所以