论文资料：微生物细胞外酵素之作用.doc

實驗22 微生物細胞外酵素之作用（Extracellular enzymatic activities of microorganisms）結果1. 澱粉水解：(1)將革蘭氏碘液覆於澱粉瓊脂平板上，靜置三十秒，使碘液與培養基充份接觸。(2)檢視於生長周圍是否呈藍黑色，並將結果記錄於表格中。(3)依觀察結果，決定何菌具有水解澱粉之能力。2. 脂肪水解：(1)檢視三酪脂瓊脂平板，觀察菌落周圍是否出現透明區或環狀之脂肪分解，並將結果記錄於表格中。(2)依觀察結果，決定何菌具有水解脂肪之能力。3. 酪蛋白水解：(1)檢視酪蛋白瓊脂平板，觀察菌落周圍是否出現透明區或蛋白水解環，並將結果記錄於表格中。(2)依觀察結果，決定何菌具有水解蛋白之能力。4. 明膠水解：(1)將所有明膠深層試管，移至4冰箱中30分鐘。(2)檢視培養基是否硬化或呈液狀，並將結果記錄於表格中。(3)依2天及7天培養後的觀察結果，決定何菌具有水解明膠之能力及其水解速率。 Bacterial 澱粉水解 脂肪水解species培養基外觀結果(+)or(-)培養基外觀結果(+)or(-)E. coliB. cereusP. aeruginosaBacterial 酪蛋白水解 明膠水解species培養基外觀結果(+)or(-)培養基液化(+)or(-)水解速率慢或快2天7天E. coliB. cereusP. aeruginosa實驗23 糖類醱酵（Carbohydrate fermentation）結果：1. 檢視所有糖類培養基，觀察是否有顏色變化或氣泡產生，並將結果記錄於表格中。2. 依觀察結果決定各菌能否醱酵糖類產酸或產酸並產氣。Bacterial speciesLactose observation （培養基顏色及是否產氣）Result （A），（A/G），或（-）Dextrose observation （培養基顏色及是否產氣）Result （A），（A/G），或（-）Sucrose observation （培養基顏色及是否產氣）Result （A），（A/G），或（-）E. coliP. aeruginosaS. typhimurium註：A=acid ，G=gas回答課本問題：1、2、4實驗24 三糖鐵瓊脂試驗（Triple Sugar-Iron Agar Test）結果：1. 檢視所有培養基之斜面及底部之顏色變化，依觀察結果判定酸、鹼或無變化，以及糖類之醱酵情形，並將結果記錄於表格中。2. 檢視所有培養基，觀察是否變黑色，依觀察結果判斷各菌是否具有產生硫化氫之能力，並將結果記錄於表格中。Bacterial speciesCarbohydrate fermentationH2S production底部顏色及酸鹼反應斜面顏色及酸鹼反應醱酵何種糖類或不醱酵糖類變黑與否 H2S（+）或（-）E. coliP. aeruginosaS. typhimurium回答課本問題：1、2、3、4、5實驗25 IMViC Test結果1. Indole production test：a：培養24小時後，滴加10滴柯瓦氏試劑（Kovacs reagent）。b：觀察試劑層之顏色變化，並記錄結果。c：依觀察結果判斷菌體水解色氨酸（tryptophan）之能力。Bacterial species試劑層顏色變化結果（+）或（-）E. coli E. aerogenesS. typhimurium2. Methyl red test：a：培養24小時後，滴加5滴甲基紅（methyl red indicator）。b：依觀察結果判斷菌體醱酵葡萄糖產生高濃度酸性物質之能力。Bacterial species培養基顏色變化結果（+）或（-）E. coli E. aerogenesS. typhimurium3. Voges Proskauer test：a：培養24小時後，滴加10滴Barritts reagent A，搖勻，再滴加10滴Barritts reagent B，搖勻，之後每隔3-4分鐘再度搖勻，15分鐘後觀察結果。b：依觀察結果判斷菌體醱酵葡萄糖產生acetylmethylcarbinol之能力。Bacterial species培養基顏色變化結果（+）或（-）E. coli E. aerogenesS. typhimurium4. Citrate utilization test：a：培養24小時後，觀察菌有無生長與培養基的顏色變化。b：依觀察結果判斷菌體利用檸檬酸作為唯一碳源之能力。Bacterial species生長與否（+）或（-）培養基顏色變化結果（+）或（-）E. coli E. aerogenesS. typhimurium回答課本問題：1、2、3、4、5實驗26 硫化氫試驗（Hydrogen Sulfide Test）結果：1. 檢視所有SIM培養基，觀察接種線有無黑色產生，將結果記錄於表格中。2. 依觀察所見，判斷各菌是否具有產生硫化氫之能力。3. 觀察微生物是否沿接種線向四周擴散，並判斷其是否具運動性。Bacterial specise培養基顏色是否產生硫化氫（+）或（-）運動性（+）或（-）E. coliE. aerogenesS. typhimurium回答課本問題：1、2、3實驗27 尿素酵素試驗（Urease Test）結果：1. 檢視所有培養基之顏色，並將結果記錄於表格中。2. 依觀察所見，判斷各菌分解尿素之能力。Bacterial species培養基顏色尿素水解與否（+）或（-）第2天第4天E. coliK. pneumoniaeP. vulgaris回答課本問題：1、2、3實驗28 石蕊乳反應（Litmus Milk Reactions）結果：1. 檢視所有培養，觀察培養基顏色之變化、是否有凝乳生成及培養基上層是否變質，並將結果記錄於表中。2. 依觀察結果，判斷各菌之反應型別並記錄之。Bacterial species培養基外觀石蕊乳反應第2天第4天E. coliA. faecalisP. aeruginosa回答課本問題：1、2、3、4實驗29 硝酸鹽還原試驗（Nitrate Reduction Test）結果：1. 先加入溶液A（sulfanilic acid ）5滴，再加入溶液B（a-naphthylamine）5滴於各培養中，觀察是否有紅色生成，並將結果記錄於表格中。2. 未出現紅色之培養，則再加入微量鋅粉，觀察有無形成紅色，並將結果記錄於表格中。3. 依觀察結果，判定各菌還原硝酸鹽之能力，並判斷終產物（NO2-或NH3/N2）。Bacterial species加入AB溶液是否生成紅色（+）或（-）加入鋅粉是否生成紅色（+）或（-）硝酸鹽還原（+）或（-）終產物E. coliA. faecalis P. aeruginosa回答課本問題：1、2、3、4實驗30 觸脢試驗（Catalase test）結果：1. 滴加34滴3H2O2於斜面培養上。2. 觀察各培養是否有氣泡產生，並將結果記錄於表格中。3. 依觀察所見，判斷各菌產生觸脢之能力，並記錄之。Bacterial species是否有氣泡產生是否具有觸脢（+）或（-）E. coliA. faecalisS. pyogenes回答課本問題：1、2、3實驗31 氧化酵素試驗（Oxidase Test）結果：1. 滴加2-3滴試劑（tetramethyl-p-phenylenediamine）於測試菌之菌落表面。2. 觀察菌落表面是否在30秒內轉變為深藍紫色，並將結果記錄於表格中。3. 依觀察所見，判斷各菌產生氧化酵素之能力，並將結果記錄於表格中。Bacterial species菌落顏色變化是否具有氧化酵素（+）或（-）E. coliA. faecalisP. aeruginosa 回答課本問題：1、2、3、4實驗32 氨基酸的利用（Utilization of Amino Acid）結果：PART A1. 檢視培養試管出現的顏色變化。2. 依觀察所見，判斷各菌是否具有lysine decarboxylation之能力，並將結果記錄於表格中。Bacterial species培養基顏色是否具有lysine decarboxylase（+）或（-）LDLDE. coliP. vulgarisPART B1. 滴加5-10滴氯化鐵試劑於培養基斜面，氯化鐵為螯合劑，可與phenylpyruvic acid鍵結產生綠色。2. 依觀察所見，判斷各菌是否具有氨基酸脫氨之能力，並將結果記錄於表格中。3. 結果應馬上判讀（1-5分鐘內），因為綠色會很快消失。Bacterial species滴加氯化鐵後之顏色是否具有脫氨酵素（+）或（-）E. coliP. vulgaris回答課本問題：1、2、3實驗63 喉與皮膚之正常菌叢（Normal Microbial Flora of the Throat and Skin）結果：1. 觀察血液瓊脂平板上之溶血環。2. 滴加p-aminodimethylaniline oxalate於深褐色瓊脂平板上之生長菌表面，觀察菌落表面有無出現深藍紫色變化。3. 觀察Sabouraud 瓊脂平板有無黴狀物生長。4. 觀察甘露醇瓊脂平板有無葡萄球菌生長並注意菌落周圍之培養基顏色。5. 將觀察所見結果記錄於下表並指出各檢體可能出現之菌型。CultureThroat specimenSkin specimenBlood agarType of hemolysisChocolate agar()or() purple coloniesSabouraud agar()or() fungal coloniesMannito salt agar()or()growthColor of mediumTypes of organisms present6. 每一血液瓊脂培養，選擇生長外觀與溶血型作用互異之獨立菌落，製備兩個革蘭氏染色抹片，以顯微鏡觀察革蘭氏反應，細胞大小、形態及排列，並選一代表視野將細菌形態描繪於下圖中。Skin SpecimenIsolate 1Isolate 2Gram reactionMorphologyOrganismThroat SpecimenIsolate 1Isolate 2Gram reactionMorphologyOrganism回答課本問題：1實驗64 致病性葡萄球菌之鑑定（Identification of Human Staphylococcal Pathogens）結果：1. 觀察甘露醇鹽瓊脂平板（Mannitol salt agar），並將結果記錄於表格中。（1）每一測試菌以+或-表示生長之有無。（2）記錄測試菌菌落周圍之培養基顏色。（3）判斷測試菌為甘露醇醱酵菌（+）或非醱酵菌（-）。2. DNA瓊脂平板(DNase test agar)（1） 將DNA瓊脂平板滴上0.1toluidine blue，觀察菌落周圍有無玫瑰粉紅色出現，記錄培養基顏色。（2） 將所見結果以（+）或（-）表示DNase之活性。3. Mueller-Hinton agar plate （Novobiocin sensitivity test）（1） 以尺量取Novobiocin濾紙片周圍抑制環之直徑，單位為mm。（2） 如抑制環直徑等於或小於17mm，表示此菌對Novobiocin具抗性，以（R）表示，如大於17mm，表示此菌對Novobiocin為感受性，記錄為（S）。4. 血液平板（Blood agar plate）（1） 觀察菌落周圍之培養基的溶血情形。（2）判斷測試菌的溶血性。5. 凝固酵素試驗（coagulase test）（1） 將細菌血漿懸浮液於5分鐘、20分鐘、1小時、4小時、24小時，分別傾斜試管，觀察有無凝固現象。（2） 根據觀察結果，判斷測試菌是否具有凝固酵素。表一：ProcedureS. aureusS. epidermidisS. saprophyticusMannitol salt agar Growth Color of medium Fermentation DNA agar Color of medium DNase activity Novobiocin sensitivity Growth inhibition in mm Susceptibility-(R)or(S) Blood agar Appearance of medium Hemolytic activity 表二：Staphylococcal SpeciesAppearance of PlasmaClotted（+）or Unclotted（-）Coagulase（+）or（-）5min20min1hr.4hr.24hr.S. aureusS. epidermidisS. saprophyticus實驗67 腸道細菌之鑑定：多重試驗微系統與電腦配合應用（Identification of Enteric Microorganisms Using Computer-Assisted Multitest Microsystem