正常家兔磺胺嘧啶钠药动学参数的测定.ppt

1,正常家兔磺胺嘧啶钠药动学参数的测定,中国医科大学药学院 药理教研室 孙也之,掌握家兔动脉插管的手术过程； 2. 熟悉磺胺嘧啶钠血药浓度测定原理与 测定方法； 3. 了解药动学参数的计算方法。,.实验目的,.实验药品: 20%磺胺嘧啶钠 30mg%磺胺嘧啶钠（标准液） 5%三氯醋酸 0.5%麝香草酚（用20%NaOH溶液配制） 0.5%亚硝酸钠 6. 2N盐酸 7. 1%肝素（1ml/kg） 8. 20%乌拉坦（5ml/kg）,. 实验动物 家兔，2.02.5kg.,.实验设备 家兔操作台 手术器械,手术刀 大镊子 止血钳 弯头小镊子 眼科剪刀 玻璃钩,.实验设备： 3. 动脉插管 4. 722型可见光分光光度计,.实验设备： 5. 离心机,. 实验步骤： 1. 取家兔，称重，通过耳缘静脉给20%乌拉坦(5ml/kg).,耳缘静脉注射,如何确定家兔已经被完全麻醉呢? 家兔同时出现以下三种体征: 1. 肌张力减弱； 2. 呼吸速率逐渐减慢； 3. 角膜反射消失。,2. 颈动脉剖开 固定家兔头部、绑四肢； 用弯剪清理颈部毛发； 沿家兔解剖学正中线摸到颈部甲状软骨，用手术刀沿甲状软骨向下切开颈部皮肤5-7cm，血管钳钝性分离，暴露气管； 游离气管一侧的颈总动脉，与周围组织及迷走、交感神经分离； 为了防止凝血，由耳缘静脉注射1%肝素（1ml/kg）； 颈总动脉下穿过两根手术线，一根线头端结扎，另一根线备用，心端用动脉夹夹住。 眼科小剪刀近头侧结扎处下剪小口，插动脉插管，结扎，固定。,3. 空白血样品收集： 从动脉插管放空白血0.5ml，用离心管收集，并摇匀。 4. 给药： 向一侧耳缘静脉内注入20%的磺胺嘧啶钠（1ml/kg） 5. 血样品收集： 在给药后每个时间点收集0.5ml血样。 时间点：1、3、5、15、30、60、90、120min。 每次取血前，要先放2滴血再取，以免不同时间点的血样间产生污染。,注意事项,动脉插管后，由耳缘静脉注射肝素（1ml/kg）。 采血试管取血前一定要用肝素浸润；每次取血之前要先将残血放掉。 每吸取一个血样时，必须更换枪头；加样时枪头不要碰到三氯醋酸液面。 将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。 加亚硝酸钠和麝香草酚的顺序不要混乱。 注意各比色杯要清洗干净、擦干并匹配、取药液要准确。 离心时要注意离心管的配平。 注意严格按照722型分光光度计操作方法进行操作。,. 试管实验 本实验测定磺胺嘧啶钠的原理： 显色原理：磺胺类药物在酸性溶液中，可使苯环上的氨基（-NH2）离子化生成铵类化合物（-NH3+），进而与亚硝酸钠起重氮反应，产生重氮盐（-N=N+-）。此重氮盐在碱性溶液中与酚类化合物如麝香草酚起偶联反应，生成橙红色的偶氮化合物。 偶氮染料的显色深浅与磺胺的浓度有关。可用光度计测出其吸光度，通过与标准品吸光度的比较及运算，即可推算出磺胺的浓度。计算公式如下：,脱蛋白 取空白血样与各时间点血样0.2ml，放入各离心管中并标记，每个离心管分别加水1.8ml(标准管加水1.6ml)； 另取30mg%磺胺嘧啶钠标准液0.2ml加入到标准管中，以配置标准血样品； 各试管分别加入5%三氯醋酸4ml，并摇匀，然后1000rpm离心5min。,2. 重氮化及偶联呈色 从各离心管提取上清2.0ml并转移至玻璃试管中 试剂按照如下顺序添加： 0.5ml 2N HCl 0.5ml 0.5% NaNO2 1.0 ml 0.5%麝香草酚，然后摇匀。 注意：加亚硝酸钠和加麝香草酚的顺序不要颠倒！,3.分光光度计分析： 每个样品的吸光度值由722型分光光度计测定，最大吸收波长设定于480nm. 以空白血样品作为空白对照进行分光光度计调零。, 计算血药浓度 偶氮染料的显色深浅与磺胺的浓度有关。可用光度计测出其吸光度值，通过与标准品吸光度值的比较及运算，即可推算出磺胺的浓度。计算公式如下：, 实验结果,Table 1. 结果记录表, 实验结果 1. 以时间为横坐标，浓度的对数为纵坐标，在半对数图上绘制磺胺嘧啶钠的药时曲线，以lgC对t做直线回归，得方程: lgC=a+bt。按lgC-t图判断房室数，