（通用版）2020版高考生物一轮复习第2讲微生物的培养与应用学案（含解析）（选修1）.docx

第2讲 微生物的培养与应用一、微生物的实验室培养1培养基2无菌技术3大肠杆菌的纯化培养二、土壤中分解尿素的细菌的分离三、分解纤维素的微生物的分离1实验原理2实验流程基础微点全练1判断正误(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐()(2)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH、O2及微生物对特殊营养物质的需求()(3)培养基分装到培养皿后才能进行灭菌()(4)消毒的原则是既能杀死材料表面的微生物，又要减少消毒剂对细胞的伤害()(5)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌()(6)平板划线法中每一次划线后要将接种环灼烧()(7)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就可在培养基表面形成单个菌落()2下列有关微生物培养的叙述，错误的是()A测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数B在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌C酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析：选B在对微生物进行培养前，需要对培养基进行灭菌，不能对所培养的微生物进行灭菌。3下列关于统计菌落数目方法的叙述，错误的是()A采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的菌落数B当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落C为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D在某一浓度下涂布3个平板，若3个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果解析：选C当两个或多个活菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。一般选择菌落数在30300的平板计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。至少涂布3个平板，作为重复组，取其平均值计数能增强实验的说服力和准确性。4回答下列微生物培养的问题：(1)如表是某培养液的成分及含量，该培养液培养的微生物同化作用类型是_；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去的成分是_，应加入的物质是_。编号成分(NH4)HCO3KH2PO4CaSO4FeCl2维生素水含量0.5 g3.0 g0.5 g0.5 g少许1 000 mL(2)下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：成分牛肉膏蛋白胨NaClH2O含量0.5 g1 g0.5 g100 mL牛肉膏、蛋白胨在培养基中的作用是提供_、_、_等营养。要用表中所给材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是_。表中各成分含量确定的原则是_。培养基配制好后，分装前应进行的工作是_。从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法是_、_、_等。(3)微生物接种的方法很多，最常用的是_和_。解析：(1)培养基中不含有机碳源，可判断培养的生物同化作用类型为自养型；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去氮源(NH4)HCO3，但需加入有机物提供碳源。(2)根据所培养微生物对各营养成分的需要量配制培养基的成分，若要观察细菌菌落状况需用固体培养基，还需添加琼脂；微生物培养时需对培养基、接种工具进行灭菌处理，并进行严格的无菌操作。(3)常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。答案：(1)自养型(NH4)HCO3(或)有机物(2)碳源氮源维生素(或磷酸盐等)琼脂(凝固剂)所培养微生物对各营养成分的需要量调整pH高压蒸汽灭菌灼烧接种环酒精棉擦手(或棉塞塞试管口、在火焰旁接种)(3)平板划线法稀释涂布平板法5(2019汕头质检)中国家电研究院的洗衣机专家指出，洗衣机内部的环境非常潮湿，洗衣机使用时间越长，内部滋生微生物的机会就越大。看似干净的洗衣机，其内部隐藏着一个健康的隐形杀手。某生物兴趣小组的同学，利用内桶背面的污垢进行了相关实验。(1)培养洗衣机内部微生物的培养基中一般含有_。(2)该实验要制备固体培养基，在倒平板操作后，将平板倒置。这样做的目的是_。(3)以下各项中，需要消毒的是_，需要灭菌的是_。培养细菌用的培养基与培养皿；玻璃棒、试管、烧瓶和吸管；实验操作者的双手。(4)为了检测污垢中含有的微生物的情况，要将污垢制成水样稀释，然后将稀释水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，这种方法称为_。下图所示的四种菌落分布情况中，不可能由该方法得到的是_。用该方法统计菌落数时是否需要对照组？_。原因是_。解析：(1)微生物的培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐等。(2)为了防止皿盖上凝结的水珠落入培养基造成污染，还可避免培养基表面的水分过快地挥发，在平板冷凝后，应该将平板倒置。(3)在操作过程中，实验操作者的双手应当进行消毒；培养细菌用的培养基与培养皿应当进行高压蒸汽灭菌；玻璃棒、试管、烧瓶和吸管等玻璃器皿应当进行干热灭菌。(4)题干所述方法为稀释涂布平板法。据图分析，A、B、C三个培养皿的菌落均匀，属于稀释涂布平板法得到的，D属于平板划线法接种得到的。用稀释涂布平板法统计样本菌落数时需要设置对照组，因为需要判断培养基是否被杂菌污染(或者需要判断培养基的灭菌是否合格)。答案：(1)水、碳源、氮源和无机盐(2)防止皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染，还可避免培养皿表面的水分过快地挥发(3)(4)稀释涂布平板法D需要需要判断培养基是否被杂菌污染6(2019新余期末)日前微博传言手机细菌比马桶多。如图，央视和北京卫视通过实验展示调査结果。回答下列相关问题：(1)该实验需制备_(填“固体”或“液体”)培养基。在液体培养基中加入_可配制成固体培养基。(2)据图，两电视台均采用_法接种，接种前需要采用_法对培养基进行灭菌。(3)通过观察菌落的_可以初步鉴定手机屏幕和马桶按钮上的生物类群。两电台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为原因是：_。解析：(1)从图示可知，在培养基上形成了菌落，故为固体培养基，通常固体培养基配制是在液体培养基中加入一定量琼脂。(2)从图示内容看，微生物均匀分布而不呈线状，说明采用的接种方法是稀释涂布平板法，接种前需要采用高压蒸汽法对培养基进行灭菌，并且要对实验室及操作台进行消毒处理。(3)通过观察菌落的形状、颜色、大小、隆起程度等可以初步鉴定手机屏幕和马桶按钮上的生物类群，实验结果不同的原因可能是手机的取样和马桶的取样都不相同，也可能是手机或马桶的处理手段不同。答案：(1)固体琼脂(2)稀释涂布平板高压蒸汽灭菌(3)形状、大小、隆起程度和颜色等手机的取样和马桶的取样都不相同一、培养基及微生物的纯化培养技术试考题查欠缺1(2018全国卷)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_。在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_。解析：(1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在160170 条件下加热12 h。能耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可采用干热灭菌的方法。(2)巴氏消毒法是在7075 条件下煮30 min 或在80 条件下煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。(3)接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30 min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，从而杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。(4)自来水通常是用氯气进行消毒的。(5)在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是锅内原有的冷空气没有排尽。答案：(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽2(2017江苏高考)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据如图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_。(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_。(3)右图为连续划线法示意图，在图中_(填图中序号)区域更易获得单菌落。(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中15号比色管的苯酚浓度应分别为_。管号123456苯酚浓度(mg/L)1如果废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_(填序号：51020)倍后，再进行比色。解析：(1)富集培养基中蛋白胨、苯酚都是含碳的有机物，可作为碳源。(2)欲富集酚降解菌，随转接次数的增加，应逐渐增加培养基中苯酚的含量；若接种培养后平板上菌落过于密集，则应进一步稀释后再进行涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落计数与分离；平板培养基是固体培养基，除含有水、营养物质(碳源、氮源、无机盐等)外，还需添加琼脂作为凝固剂。(3)利用连续划线法接种时，最后的划线区域()中，菌体的密度较小，容易获得单菌落。(4)因系列浓度梯度中6号比色管中苯酚浓度为1 mg/L，故15号比色管中的苯酚浓度应分别为0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L；根据题意，废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，要使稀释后的苯酚残留液浓度介于01 mg/L，需将残留液稀释20倍左右。答案：(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀释涂布凝固剂(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8强知能补欠缺1培养基的配制原则、成分确定及种类(1)培养基的配制原则目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需的pH不同。(2)培养基中营养物质的确定方法自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。异养型微生物所需的营养物质主要是有机物(即碳源)，必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。(3)培养基的分类按物理状态分类培养基种类特点用途液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂(如琼脂)观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基加凝固剂(如琼脂)微生物分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏按功能分类种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质的特殊需求或抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品产生特定的颜色或其他变化鉴别不同种类的微生物用伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌2.比较消毒和灭菌项目消毒灭菌条件温和的物理或化学方法强烈的理化因素结果仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂消毒法灼烧灭菌法干热灭菌法高压蒸汽灭菌法使用条件100 煮沸56 min80 煮15 min或在7075 煮30 min70%酒精、氯气等酒精灯火焰的外焰干热灭菌箱，160170 ，维持12 h高压蒸汽灭菌锅，恒温121 ，维持1530 min应用范围日常用品不耐高温的液体用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源接种工具玻璃器皿、金属工具培养基及容器练题点全过关1(2019肇庆统测)以下是制作酸奶的生物化学过程：将适宜的菌种接种到牛奶中，产生的乳酸使牛奶蛋白凝聚形成浓稠的酸奶。酸奶的发酵剂中含有基本等量的两种细菌(保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)。保加利亚乳杆菌在无氧条件下分解牛奶中的乳糖产生乳酸，还产生多肽酶，将牛奶蛋白分解成多肽和氨基酸；这些反应会刺激嗜热链球菌生长，产生二氧化碳和甲酸，使得发酵液的pH降低，这又会促进保加利亚乳杆菌的生长和代谢。(1)用于制作酸奶的牛奶原液首先必须进行高温处理，其目的是_，以保证接种后的正常发酵；操作者的双手需进行清洁和_；操作间内静止空气中的细菌可用物理方法_杀灭，也可以用化学试剂_(列出两种)进行消毒。(2)牛奶原料中不能含有抗生素，这是因为_。(3)发酵剂中的两种细菌之间的关系属于_。(4)包装的酸奶在24 下保存，这样可使细菌存活但无活性，食用酸奶前不需要杀死细菌这是因为用于酸奶发酵的两种微生物_，且能抑制人体中的某些有害菌群，因此不必灭菌即可食用。解析：(1)用于制作酸奶的牛奶原液首先必须进行高温处理，其目的是灭菌，保证接种后的正常发酵；操作者的双手也需进行清洁和消毒；操作间内静止空气中的细菌可用物理方法紫外线杀灭，也可以用化学试剂食醋、苯酚、甲醛等进行消毒。(2)牛奶原料中不能含有抗生素，这是因为抗生素会抑制接种细菌的生长，使发酵受到抑制。(3)发酵剂中的两种细菌之间的关系属于共生。(4)包装的酸奶在24 下保存，这样可使细菌存活但无活性，食用酸奶前不需要杀死细菌这是因为用于酸奶发酵的两种微生物对人体无害，且能抑制人体中的某些有害菌群，因此不必灭菌即可食用。答案：(1)灭菌消毒紫外线 食醋、苯酚、甲醛等(2)抗生素会抑制接种细菌的生长，使发酵受到抑制(3)共生(4)对人体无害2请根据所学微生物培养与计数的相关知识，回答下列问题：(1)实验室制备牛肉膏蛋白胨培养基时常需要加入_作为凝固剂，该培养基在制作过程中常采用_法进行灭菌，在灭菌前常需要调整培养基的_。(2)若要用此培养基对微生物进行计数统计，应采用_法接种；在接种前，随机取灭菌后的空平板在恒温箱中先行培养24 h，这样做的目的是_。(3)下表是某同学调查的市面上一种常见的面膜的部分成分，请回答下列问题。类型成分(部分)保湿剂水、甘油、丁二醇、丙二醇防腐剂羟苯甲酯、山梨酸钾、脱氢乙酸钠粘度调节剂卡波姆植物提取物海藻提取物、银耳提取物、马齿苋提取物舒缓成分尿囊素、甘草提取物pH调节成分氢氧化钠、氢氧化钾、氨基酸、乳酸其他香精、尿素、蚕丝胶蛋白注：羟苯甲酯：广谱抗菌物质，能抑制革兰氏阴性、阳性细菌，对酵母菌及霉菌有较强的抑制作用。网上流传“面膜等同于细菌培养基”。根据微生物培养的知识并结合该种面膜的组成成分来分析，你认为此说法_(填“合理”或“不合理”)，理由是_。(答一点即可)生活中许多人喜欢利用天然材料直接替代面膜产品，如黄瓜切片、芦荟切片、鸡蛋清等。结合所学知识对这一行为进行评价并给出你自己的建议：_。答案：(1)琼脂高压蒸汽灭菌pH(2)稀释涂布平板 检验培养基是否灭菌彻底(3)不合理面膜的成分中含有防腐剂，能抑制微生物的繁殖天然材料中不含防腐剂及各种添加剂，值得提倡，建议：敷面时间不要过长或者敷完后要及时清洗干净。或天然材料中可能引起过敏或细菌生长，不宜采用，建议：选用不易引起过敏或经使用报导安全的天然材料敷面，或建议敷面时间不要过长或者敷完后要及时清洗干净二、微生物的筛选与计数试考题查欠缺1(2018全国卷)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物，加入的显色剂是_，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。解析：(1)链霉素是抗生素，可抑制细菌生长，故在M培养基中加入链霉素作为选择培养基，可筛选出真菌。(2)培养基中的营养成分一般包括碳源、氮源、水和无机盐等。细胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白质、核酸等，故加入的氮源可参与以上物质的合成。(3)能产生淀粉酶的微生物可将淀粉水解成麦芽糖，淀粉遇碘液变蓝，向加有淀粉的培养基中加入碘液后培养基呈现蓝色，产淀粉酶的菌落周围的淀粉被水解，形成透明圈，可根据透明圈的大小判断产生淀粉酶的多少。(4)统计菌落数时，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，甲同学统计的3个平板中的菌落数在正常范围内且差距不大，比较准确；乙同学统计的3个平板中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差。答案：(1)细菌选择(2)碳源、无机盐蛋白质、核酸(3)碘液淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差2(2014全国卷)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。(3)示意图A和B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。解析：(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0.1 mL稀释液中平均有38个活菌，可推测每升水样中的活菌数38101001 0003.8107(个)。(2)接种环、接种针或其他金属用具直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(3)比较两图可以看出，A是用平板划线法接种培养后得到的结果，B是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)由于振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格3.8107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质强知能补欠缺1微生物的筛选与鉴别方法(1)微生物的筛选方法单菌落挑取法利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物选择培养法利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物鉴定培养法利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物(2)微生物的鉴别方法菌落特征鉴别法根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红，说明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物2.平板划线法和稀释涂布平板法的比较比较项目平板划线法稀释涂布平板法关键操作接种环在固体平板培养基表面连续划线一系列的梯度稀释涂布平板法操作注意事项每次划线前后均需灼烧接种环稀释度要足够高，为确保实验成功可以增加稀释度的范围菌体获取在具有显著的菌落特征的区域菌落中挑取菌体从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体适用范围适用于好氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌优点可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落，又能对微生物计数缺点不能对微生物计数操作复杂，需要涂布多个平板3.统计菌落数目的两种方法间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微计数法)原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量公式每克样品中的菌落数(CV)MC：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数每毫升原液所含细菌数：每小格平均细菌数400104稀释倍数缺点当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落不能区分细胞死活结果比实际值偏小比实际值偏大练题点全过关1(2019上饶一模)塑料制品作为一种新型材料，具有质轻、防水、耐用、成本低等优点，在全世界被广泛应用且呈逐年增长趋势。特别是塑料袋，成为了人们生活中不可或缺的“生活必备品”，但是由于环境中能分解塑料袋的微生物数量很少，塑料袋不易被降解，也常被人们称为“白色污染”。生物兴趣小组欲寻找土壤中可以降解塑料袋的微生物。(已知塑料袋的主要成分为聚乙烯CH2CH2)(1)要寻找土壤中能降解塑料袋的微生物，需要在_的环境中采集土样。(2)选择培养过程应制备_的培养基，从物理性质分，其为_培养基。(3)若需要对所得菌种进行分离计数，应采用_进行接种。(4)为避免污染，需将培养皿呈_状态放置。(5)在对所得菌种进行大规模工业化培养之前，需要先_。(6)该实验如需对照，对照应设置_。解析：(1)要寻找土壤中能降解塑料袋的微生物，需要在富含聚乙烯的环境中采集土样。(2)选择培养过程应制备以聚乙烯为唯一碳源的培养基，从物理性质分，其为固体培养基。(3)若需要对所得菌种进行分离计数，应采用稀释涂布平板法进行接种。(4)为避免污染，需将培养皿呈倒置状态放置。(5)在对所得菌种进行大规模工业化培养之前，需要先测定菌种分解聚乙烯的能力。(6)该实验如需对照，对照应设置配制以聚乙烯为唯一碳源的固体培养基，不接种任何菌种或接种等量的无菌水。答案：(1)富含聚乙烯(2)以聚乙烯为唯一碳源固体(3)稀释涂布平板法(4)倒置(5)测定菌种分解聚乙烯的能力(6)配制以聚乙烯为唯一碳源的固体培养基，不接种任何菌种或接种等量的无菌水2(2019泉州质检)土壤中的产脲酶细菌在污水处理中具有巨大的应用前景，请回答下列问题：(1)从土壤分离产脲酶细菌的过程中，培养基中高浓度尿素的作用是杀死_的微生物，并为产脲酶细菌提供_；除了营养物质外，培养基的配制还应控制_等条件(答出两点即可)。(2)采用稀释涂布平板法接种时，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个_。与分离真菌相比，分离产脲酶细菌的样品稀释度不同，原因是_。(3)初步筛选出的产脲酶细菌，在培养基中加入酚红指示剂，能对分离的菌种做进一步鉴定，其原理是_。解析：(1)由于绝大多数微生物不能利用尿素，所以高浓度尿素会杀死这些微生物。从土壤分离产脲酶细菌的过程中，培养基中高浓度尿素的作用是为了杀死不能耐受高浓度尿素的微生物，并为脲酶细菌提供氮源。除了有碳源、氮源、水分和无机盐外，配制培养基还应控制培养基的pH、溶氧量等且要无菌。(2)采用稀释涂布平板法接种时，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。分离不同的微生物时对样品的稀释度不同，主要是因为土壤中不同微生物的密度不同。(3)初步筛选出的产脲酶细菌，在培养基中加入酚红指示剂原理是：产脲酶细菌可以分解尿素，使培养基pH升高，指示剂变红色，从而达到鉴定目的。答案：(1)不能耐受高浓度尿素(不能利用尿素)氮源pH、无菌(2)菌落土壤中不同微生物的密度不同(3)产脲酶细菌可以分解尿素，使培养基pH升高，指示剂变红色3(2019厦门一模)下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题：(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，选用适宜的方法接种样品：如图是利用_法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上应注意_。(3)适宜温度下培养。结果分析：甲同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为524个，那么每毫升样品中的细菌数是(接种时所用稀释液的体积为0.1 mL)_个。用这种方法所得的数量比实际活菌数量要_，因为_。(4)乙、丙同学测定同一样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：乙同学在该浓度下涂布了1个平板，统计的菌落数为47；丙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为43、54、326，然后取其平均值141作为统计结果。请评价这两位同学实验结果的有效性。乙同学的结果_，原因是_。丙同学的结果_，原因是_。(5)丁同学采用血细胞计数板计数(规格为1625，0.1mm3)，统计4个中格中的细菌数，计算出每个小格所含细菌的平均数为2个，则每毫升样品中的细菌数是(稀释倍数为103)_个。解析：(2)由图可知，此接种方法为平板划线法，为达到稀释的目的，从第二次划线开始，接种环均要灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划，首尾不能重叠。(3)根据公式每毫升样品中的细菌数524/0.11055.24108，用这种方法所得的数量比实际活菌数量要少，因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的是一个菌落。(4)乙同学在该浓度下涂布了1个平板没设重复实验，所以结果无效；丙同学涂布的3个平板计数结果差距太大，应该存在操作失误，结果无效。(5)每毫升样品中的细菌数是(22516)/0.11031038109。答案：(2)平板划线第二次及以后每次划线前接种环要灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划，首尾区不重叠以便于分散菌种(3)5.24108少当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的是一个菌落(4)无效没有设置重复实验，结果不具有说服力无效一个平板上的菌落计数结果与另外两个相差太大(5)8109 1做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()A高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析：选D在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的指针指到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。2(2019柳州模拟)微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是()煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢接种操作要在酒精灯火焰附近进行无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌培养基要进行高压蒸汽灭菌加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌ABCD解析：选D无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中杂菌污染，接种操作要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。故操作错误。3(2016全国卷)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；制作无菌平板；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；将各组平板置于37 恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：(1)该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤，该培养基中的成分X通常是_。(2)步骤中，实验组的操作是_。(3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_现象。若将30(即366)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_(填“正确”或“不正确”)。解析：(1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，因此微生物所需的氮来源于牛肉膏和蛋白胨。若要完成步骤，需要进行倒平板操作，用到的是固体培养基，所以培养基中要有琼脂。(2)该实验的空白对照组为不进行处理的无菌平板，实验组的操作为将各无菌平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露相同时间。(3)若空白对照组的平板上出现了菌落，说明实验过程中出现了污染现象。空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，导致实验变量不唯一，不能确定实验组平板上的菌落是否仅由教室内不同高度空气中的微生物形成，因此不能求出实验组的菌落平均值。答案：(1)牛肉膏、蛋白胨琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间(3)污染不正确4(2019佛山一模)某课题组拟从牛瘤胃中分离出纤维素分解菌，实验流程如下：从屠宰场获取新鲜瘤胃液，短暂离心后过滤。将滤液接种到含有羧甲基纤维素钠和染色剂A的培养基上进行培养。将从步骤获取的目标菌落接种到以滤纸条为唯一碳源的培养基中，摇床悬浮培养5天，观察滤纸的崩解效果。取崩解效果最好的几片滤纸，将上面的菌种接种到固体培养基上，观察菌落生长情况。请回答下列问题：(1)染色剂A为_。步骤的培养目的是_。(2)步骤中，应选择步骤中_的菌落进行接种，适宜的培养温度应该接近于_。从基质状态上划分，步骤所使用的培养基是_。(3)根据步骤的实验结果，课题组得出牛瘤胃中有多种纤维素分解菌的结论，支持他们结论的实验结果应该是_。(4)步骤得到多种纤维素分解菌后，如何进一步分离纯化？请写出简要的实验思路_。解析：(1)鉴别纤维素分解菌，使用刚果红染色剂。(2)步骤中，应选择步骤中透明圈最大的菌落进行接种，适宜的培养温度应该接近于 37 (或牛的体温)。从基质状态上划分，步骤所使用的培养基是液体培养基。(3)可以根据实验结果出现了多种不同特征(形状、大小、颜色等)的菌落，得出牛瘤胃中有多种纤维素分解菌的结论。(4)步骤得到多种纤维素分解菌后，分别挑取步骤中不同特征的菌落，用平板划线法(或稀释涂布平板法)分别接种到固体培养基上培养，得到单菌落，即可达到进一步分离纯化的目的。答案：(1)刚果红鉴别纤维素分解菌(2)透明圈最大37 (或牛的体温)液体培养基(3)出现了多种不同特征(形状、大小、颜色等)的菌落(4)分别挑取步骤中不同特征的菌落，用平板划线法(或稀释涂布平板法)分别接种到固体培养基上培养，得到单菌落5(2019广州调研)国家生活饮用水卫生标准规定：接种1 mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，经37 、24 h培养后，所生长出的菌落总数不得大于100。某兴趣小组对某蓄水池进行细菌总数测定，以了解池水是否符合饮用水卫生标准。回答下列问题：(1)用无菌三角瓶取水样前，水龙头需使用酒精棉擦拭消毒后，再通过_灭菌。取水前的无菌操作的目的是_。(2)该小组通过滤膜法测定细菌总数，将10 mL的水样进行过滤后，将滤膜放在牛肉膏蛋白胨培养基上培养，培养时应将平板倒置，其原因是_。所用培养基中的牛肉膏除为微生物提供碳源和氮源外，还能提供磷酸盐和_。在培养过程中，不同时间所观察到的平板上菌落特征的差异有_(至少写出两点)。(3)经过24 h培养，结果如下表：平板1平板2平板3菌落数(个)413538据上表结果判断，所取水样测定结果_(填“符合”或“不符合”)饮用水的标准。(4)该小组若想检测水样中大肠杆菌的数目，可将滤膜放在_培养基上，计算培养基上_(颜色)菌落的数目。解析：(1)灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)，常用的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。取水样前，水龙头需使用酒精棉擦拭消毒后，再通过灼烧灭菌；为防止杂菌污染自来水，所以取水前要进行无菌操作。(2)培养基通常采用高压蒸汽灭菌法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是防止培养皿内