GBT14931.1-1994畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法(高效液相色谱法).pdf

中华人民共和国国家标准中华人民共和国国家标准 畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量测定方法 GB/T 14931.1-94 (高效液相色谱法高效液相色谱法) Method for determination of oxytetracyline tetracyline and chlortetracycline residues in meat (HPLC) 1 主题内容与适用范围 主题内容与适用范围 本标准规定了畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的检测方法。 本标准规定了畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的检测方法。 本标准适用于各种食用畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定。最低检出浓 本标准适用于各种食用畜禽肉中土霉素、四环素、金霉素残留量的测定。最低检出浓 度为：度为：0.15，0.20, 0.65mg/kg。 2 原理 原理 样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准 样品经提取，微孔滤膜过滤后直接进样，用反相色谱分离，紫外检测器检测，与标准 比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加法定量。比较定量，出峰顺序为土霉素、四环素、金霉素。标准加法定量。 3 试剂 试剂 3.1 乙腈 乙腈(分析纯分析纯)。 3.2 0.01 mol/L 磷酸二氢钠溶液：称取磷酸二氢钠溶液：称取 1.56 g(0.01g)磷酸二氢钠磷酸二氢钠(NaH2PH4.2H2O)溶于溶于 蒸馏水中，定容到蒸馏水中，定容到 100 mL，经微孔滤膜，经微孔滤膜(0.45 m)过滤，备用。过滤，备用。 3.3 土霉素 土霉素(OTC)标准溶液：称取土霉素标准溶液：称取土霉素 0.0100g(0.0001g)，用，用 0.1mol/L 盐酸溶液每毫盐酸溶液每毫 升含土霉素升含土霉素 1mg。 3.4 四环素 四环素(TC)标准溶液：称取四环素标准溶液：称取四环素 0.0100g(0.001g)，用，用 0.01 mol/L 盐酸溶液溶解盐酸溶液溶解 并定容并定容 10.00 mL，此溶液每毫升含四环素，此溶液每毫升含四环素 1mg。 3.5 金霉素 金霉素(CTC)标准溶液：称取金霉素标准溶液：称取金霉素 0.0100g(0.0001g),溶于蒸馏水并定容成溶于蒸馏水并定容成 10.00 mL，此溶液每毫升含金霉素，此溶液每毫升含金霉素 1mg。 以上标准品均按 以上标准品均按 1000 单位单位/mg 折算。折算。3.33.5 溶液应于溶液应于 4以下保存，可使用以下保存，可使用 1 周。周。 3.6 混合标准溶液： 取 混合标准溶液： 取 3.3、3.4 标准溶液各标准溶液各 1.00 mL，取，取 3.5 标准溶液标准溶液 2.00 mL，置于，置于 10mL 容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四环素各容量瓶中，加蒸馏水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四环素各 0.1mg，金霉素，金霉素 0.2mg，临，临 时现配。时现配。 3.7 5高氯酸溶液。高氯酸溶液。 4 仪器 仪器 4.1 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪(HPLC)：具紫外检测器。：具紫外检测器。 5 色谱条件 色谱条件 5.1 柱： 柱：ODS-C18 (5 m) 6.2mm15 cm。 5.2 检测波长： 检测波长：355 nm。 5.3 灵敏度： 灵敏度：0.002 AUFS。 5.4 柱温：室温。 柱温：室温。 5.5 流速： 流速：1.0mL/min。 5.6 进样量： 进样量：10 L。 5.7 流动相：乙腈 流动相：乙腈/0.01 mol/L 磷酸二氢钠溶液磷酸二氢钠溶液(用用 30(V/V)硝酸溶液调节硝酸溶液调节 pH2.5),35:65 (V/V)，使用前用超声波脱气，使用前用超声波脱气 10 min。 6 操作方法 操作方法 6.1 样品测定：称取 样品测定：称取 5.00 g(0.01 g)切碎的肉样切碎的肉样(5 mm)，置于，置于 50 mL 锥形烧瓶中，加锥形烧瓶中，加 入入 5高氯酸高氯酸 25.0mL，于振荡器上振荡提取，于振荡器上振荡提取 10 min，移入到离心管中，以，移入到离心管中，以 2000 r/min 离心离心 3min,取上清液经取上清液经0.45m滤膜过滤滤膜过滤,取溶液取溶液10L进样进样, 记录峰高， 从工作曲线上查得含量。记录峰高， 从工作曲线上查得含量。 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 6.2 工作曲线，分别称取 工作曲线，分别称取 7 份切碎的肉样，每份份切碎的肉样，每份 5.00 g(0.01 g)，分别加入混合标准溶，分别加入混合标准溶 液液 0、25、50、100、150、200、250 L(含土霉素、四环素各为含土霉素、四环素各为 0、2.5、5.0、10.0、15.0 、20.0、25.0 g, 含金霉素含金霉素 0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 g), 按按 6.1 方法操方法操 作、以峰高为纵坐标作、以峰高为纵坐标, 以抗生素含量为横坐标以抗生素含量为横坐标, 绘制工作曲线。绘制工作曲线。 6.3 计算计算 A1000 X = m1000 式中式中: X样品中抗生素含量样品中抗生素含量, mg/kg; A样品溶液测得抗生素质量样品溶液测得抗生素质量, g; m样品质量样品质量, g。 附加说明附加说明: 本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部卫生监督司提出。 本标准由辽宁省食品卫生监督检验所、大连卫生检疫所、沈阳市卫生防疫站、辽宁本标准由辽宁省食品卫生监督检验所、大连卫生检疫所、沈阳市卫生防疫站、辽宁 省卫生职工医学院负责起草。省卫生职工医学院负责起草。 本标准主要起草人翟永信、阎勇、卫锋、吴伯禄、马勇。本标准主要起草人翟永信、阎勇、卫锋、吴伯禄、马勇。 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生食品部食品卫生监督检验所负责解释。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生食品部食品卫生监督检验所负责解释。 中华人民共