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安徽农业科学,J o u r n a lo fA n h u iA g r i S c i 2 0 0 9 ,3 7 ( 1 4 ) :6 3 8 9 6 3 9 0 。6 4 4 7责任编辑熊章琴责任校对卢瑶 赤霉素对盐胁迫下水稻种子发芽及幼苗生长的影响 尹昌喜1 ,汪献芳2 ,金莉1 ,吴全荣1 ,邓林1 ,李荣伟1 ( 1 华中农业大学植物科学技术学院,湖北武汉4 3 0 0 7 0 ;2 华中农业大学理学院,湖北武汉4 3 0 0 7 0 ) 摘要 目的 研究赤霉素对盐胁迫下水稻种子发芽及幼苗生长的影响。 方法 采用6 0 2 1 0m m o L L 的N a C l 作为不同浓度的盐胁迫, 结合1 0t x m o l LG A ,处理,考察珍汕9 r 7 水稻种子发芽及幼苗生长状况。 结果 大于等于6 0m m o l L 的N a C l 胁迫显著抑制水稻种子发 芽及幼苗生长,而1 0 牡m o l LG A ,处理能显著缓解小于等于9 0m m o l L 的N a C l 胁迫对活力指数、第l 片真叶叶鞘生长、株高生长的影 响,显著缓解9 0 1 5 0m m o l L 的N a C l 胁迫对种子根生长的影响,显著缓解小于等于1 8 0m m o l L 的N a C l 胁迫对发芽势、发芽指数的影 响,并显著缓解1 2 0 2 1 0m m o l L 的N a C l 胁迫对发芽率的影响。 结论 1 0t x m o l LG A ,处理能显著缓解一定浓度范围内的盐胁迫对水 稻种子发芽及幼苗生长的抑制作用。 关键词赤霉素;盐胁迫;水稻;种子发芽;幼苗生长 中圈分类号$ 5 1 1文献标识码A 文章编号0 5 1 7 6 6 1 1 ( 2 0 0 9 ) 1 4 0 6 3 8 9 0 2 E 骶c t so fG Ao nS e e dG e r m i n a t i o na n dS e e d l i n gG r o w t ho fR i c eu n d e rS a l tS t r e s s Y 斟C h a n g - x ie ta l ( C o l l e g eo fP l a n tS c i e n c ea n dt e c h n o l o g y ,H u a z h o n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,W u h a n ,H u b e i4 3 0 0 7 0 ) A b s t r a c t 0 b e c t i v eT h er e s e a r c ha i m e dt os t u d yt h ee f f e c t so fG Ao ns e e dg e r m i n a t i o na n ds e e d l i n gg r o w t ho fr i c eu n d e rs a l ts t r e s s M e t h o d 6 0 2 1 0m m o l LN a C lw e r es e l e c t e df o rd i f f e r e n ts a l ts t r e s st r e a t m e n t s ,a n dp l U S1 0i x m o l LG A lt r e a t m e n t t h er e s u l t so fs e e dg e r m i n a t i o na n ds e e d l i n gg r o w t ho fr i c eZ h e n s h a n9 7w e r ee x a m i n e d IR e s u l tN o tl e s st h a n6 0m m o l LN a C ls t r e s sr e m a r k a b l yi n h i b i t e ds e e dg e r m i n a t i o na n ds e e d l i n gg r o w t ho ff l e e ,w h i l eG A ,t r e a t m e n tr e m a r k a b l ya l l e v i a t e dt l l ei n h i b i t i o ne f f e c t sf r o mn o tm o r et h a n9 0m m o f LN a C ls t r e s s o na c t i v i t yi n d e x f i s tt r u el e a fs h e a t hg r o w t ha n dp l a n th e i g h tg r o w t h :r e m a r k a b l ya l l e v i a t e dt h ei n h i b i t i o ne f f e c t sf r o mN a C ls t r e s sw i t hc o n c e n t r a t i o n sf r o m9 0m m o l Lt o1 5 0m m o l Lo ns e m i n a lr o o tg r o w t h :r e m a r k a b l ya l l e v i a t e dt h ei n h i b i t i o ne f f e c t sf r o mn o tm o r et h a n1 8 0m m 0 1 L N a C ls t r e s so ng e r m i n a t i o np o t e n t i a la n dg e r m i n a t i o ni n d e x :a n dr e m a r k a b l ya l l e v i a t e dt h ei n h i b i t i o ne f f e c t sf r o mN a C ls t r e s sw i t hc o n c e n t r a t i o n sf r o m1 2 0m m 0 1 Lt o2 1 0m m o l Lo ng e r m i n a t i o nr a t e C o n c l u s i o nT h et r e a t m e n tw i t h1 0I x m 0 1 LG A ,c o u l dr e m a r k a b l ya l l e v i a t et h e i n h i b i t i o ne f f e c t so fs a l ts t r e s sw i t hac e r t a i nc o n c e n t r a t i o nr a n g eo ns e e dg e r m i n a t i o na n ds e e d l i n gg r o w t lo fr i c e K e yw o r d sG A ;S a l ts t r e s s ;R i c e ;S e e dg e r m i n a t i o n ;S e e d l i n gg r o w t h 目前全世界盐渍土面积约1 0 亿h m 2 ,其中我国盐渍 土面积约26 0 0 万h m 2 拉o ,而且土壤盐渍化面积正以惊人的 速度增加,次生盐渍化问题也日趋严重。土壤盐渍化给农业 生产带来严重威胁,并已成为一个世界性的问题。因此,开 发和利用盐渍土是未来发展农业的重要课题之一旧J 。水稻 是我国第一大粮食作物,水稻生产在我国农业生产和粮食安 全方面举足轻重。目前,我国是世界上最大的稻米生产国和 消费国,水稻种植面积约占世界水稻种植总面积的2 0 ,产 量占世界稻谷总产量的3 0 以上,居世界第一H 1 。然而,水 稻属于不耐盐的甜土作物,近年来淡水资源严重短缺,加剧 了一些地区土壤的盐渍化,在一定程度上限制着水稻生产。 近年来,通过对农作物盐害和耐盐机理的研究发现,利 用化学调控手段是提高作物耐盐性的有效措施之一。该试 验利用赤霉素来缓解N a C l 胁迫对水稻种子发芽及幼苗生长 的抑制作用,试图为生产上缓解盐害提供理论指导。 1 材料与方法 1 1 试验材料供试的水稻品种为珍汕9 7 ,由南京农业大 学沈又佳老师提供;供试的分析纯N a C l 购自上海试剂一厂; 供试的G A ,由上海溶剂厂出品,并由上海化学试剂采购供应 站经销。 1 2 试验方法 1 2 1 发芽试验。选取饱满、均匀一致的珍汕9 7 水稻种 子,用5 的次氯酸钠消毒2 0m i n ,并用蒸馏水冲洗6 次,浸 基金项目国家自然科学基金项目( 3 0 8 0 0 6 6 9 ) ;教育部博士点新教师 基金项目( 2 0 0 8 0 5 0 4 1 0 1 5 ) ;华中农业大学人才启动基金项 目( 5 2 2 0 4 _ 0 7 1 1 4 ) 。 作者简介尹昌喜( 1 9 7 8 一) ,男,江西玉山人,博士,讲师,从事植物激 素调控作物生长发育方面的研究。 收稿日期2 0 0 9 - 0 2 - 2 7 种2 4h 后进行发芽试验。先在直径为1 5c m 的培养皿中放2 层滤纸并加入6 0r n l 的处理液,其中处理液分别是:蒸馏水 ( 对照C K ) ;6 0m m o l LN a C l 溶液;9 0m m o l LN a C l 溶 液; 1 2 0m m o l LN a C l 溶液;1 5 0m m o l LN a C l 溶液;1 8 0 m m o l LN a C l 溶液;2 1 0m m o l LN a C l 溶液;6 0m m o l L N a C l + 1 0 “m o l LG A ,溶液; 9 0m m o l LN a C l + 1 0t x m o L G A 3 溶液;1 2 0m m o U LN a C l + 1 0t x m o l LG A 3 溶液;1 5 0 m m o l LN a C l + 1 0p 。m o l f LG A ,溶液;18 0m m o l LN a C l + 1 0 I x m o l LG A ,溶液; 2 1 0m m o l f LN a C l + 1 0 肛m o l LG A ,溶 液。在每个培养皿中摆放1 0 0 粒浸种2 4h 后的水稻种子,每 个处理设3 个重复,然后把所有处理都放在2 6 恒温培养 箱中发芽,2d 换1 次培养液。以芽长超过1 2 种子长度且 根长超过种子长度为发芽标准,每天统计发芽数,连续统 计7d 。 1 2 2 幼苗生长试验。先浸种2 4h ( 方法与发芽试验相 同) ,然后催芽2 4h ,催芽后进行幼苗生长试验。先用泡沫把 塑料网格漂浮在不同处理液( 与发芽试验处理液相同) 上,然 后选取催芽后种子根长等于半粒种子长的水稻种子播种在 塑料网格上,每个处理设3 个重复。最后把试验材料放在培 养箱中培养,培养条件为2 8 光照1 2h ,2 6o C 黑暗1 2h ,第 3 天换1 次培养液。第5 天统计幼苗的种子根长、第1 片真 叶叶鞘长、株高。 1 2 3 测定项目与方法。发芽势( ) = 规定时间内发芽达 到高峰期的种子发芽总数供试种子数1 0 0 ;发芽率( ) = 规定时间内种子发芽总数供试种子数x1 0 0 ;发芽指数G I = ( G i D i ) ,其中a 为第i 天发芽数,眈为发芽天数;活力指 数V I = G I J s ,其中s 为幼苗的株高。该试验用3d 内发芽总 数计算发芽势,用7d 内发芽总数计算发芽率,用直尺测量幼 万方数据 6 3 9 0 安徽农业科学 2 0 0 9 生 苗的种子根长、第1 片真叶叶鞘长、株高。利用E X C E L 和 S P S S 软件进行数据分析。 2 结果与分析 2 1 G A ,对N a C I 胁迫下珍汕9 7 种子发芽势的影响发芽 势能反映出种子活力高低。由表l 可知,6 种浓度的N a C l 胁 迫都显著降低了珍汕9 7 种子发芽势;而且随着N a C l 浓度的 升高,珍汕9 7 种子发芽势急剧降低。当N a C l 胁迫浓度大于 等于1 8 0m m o l L 时,种子发芽势为0 ,而对照的发芽势却高 达9 8 0 0 ;G A ,( 1 0 斗m o l L ) 处理能显著缓解小于等于1 8 0 m m o l L 的N a C l 胁迫对珍汕9 7 种子发芽势的影响。可见, 当N a C l 胁迫高于一定浓度时,能显著降低水稻种子发芽势, N a C l 胁迫浓度越高,发芽势降低越严重。G A ,处理能显著缓 解一定浓度范围内的N a C l 胁迫对水稻种子发芽势的影响。 2 2 G A 3 对N a C I 胁迫下珍汕9 r 7 种子发芽率的影响发芽 率能近似地反映出苗率,是判断出苗率的重要标志。由表1 可知,虽然6 种浓度的N a C l 胁迫都降低了珍汕9 7 种子的发 芽率,但是在P o 0 5 水平,小于等于9 0m m o l L 的N a C l 胁 迫对珍汕9 7 种子发芽率的降低作用没有达到显著水平;然 而,当N a C l 胁迫浓度大于等于1 2 0m m o l L 时,N a C I 胁迫显 著降低了珍汕9 7 种子的发芽率。在6 种浓度N a C l 胁迫下, G A ,处理都能提高珍汕9 7 种子的发芽率,而且在小于等于 1 8 0m m o l L 的N a C l 胁迫下,G A ,处理能使珍汕9 7 种子发芽 率提高到9 6 或以上。 表1G A ,对N a C I 胁迫下珍汕9 7 水稻种子发芽的影响 T a b l e1E 船e c t so fG A 3o ns e e dg e r m i n a t i o no f c eZ h e n s h a n9 7t m d e r N a C ls t r e $ T r e a t G e r m i n a t i o nG e r m i n a t i o nG e r m i n a t i o n A c t i v i t y m e n t sp o t e n t i a l r a t ei n d e xi n d e x ( 1 ) C K9 8 0 0a9 9 6 7b c h i3 7 5 0a l2 9 9 0 2e 7 4 0 0b9 8 0 0b c h i3 0 9 2b1 2 6 5 5b 6 7 6 7c9 5 6 7h i2 9 6 3b7 8 5 0c 2 1 6 7d9 0 3 3d2 2 4 9d9 0 7d ( D6 3 3e3 6 0 0e7 7 9e2 7 6d 0 f3 2 3 3f5 3 2f j1 4 5d 0 f4 0 0g 0 6 2 西0 1 3d 9 2 3 3h1 0 0 0 0b c i3 6 1 7a h i2 9 2 1 3e 8 4 0 0i9 9 3 3b c h i3 4 7 5h i1 6 4 3 5a 5 2 6 7j9 8 3 3b c h i2 9 9 2b1 9 0 8d 4 0 0 0g9 7 6 7b h i j2 5 8 4k1 3 4 9d 433e9 6 o ob h j1 8 5 4c7 4 9d 0 f1 8 0 0a 3 0 4 蝤0 9 6d 注:同列数据后不同字母表示在0 0 5 水平差异显著。下表同。 N o t e :D i f i e r e n tl e t t e r 8i nt h es a m ec o l u m nm e a ns i g n i f i c a n td i f f e f e n c ea t 0 0 5l e v e l T h es a m ea sf o l l o w s 2 3 G A 3 对N a C l 胁迫下珍汕9 7 种子发芽指数和活力指数 的影响发芽指数和活力指数都能作为种子发芽状况的重 要指标,活力指数还能反映幼苗早期的生长状况。由表1 可 知,6 0 2 1 0m m o l L 的N a C l 胁迫显著降低了珍汕9 7 种子发 芽指数和活力指数,而且N a C l 胁迫浓度越高,发芽指数和活 力指数降低越严重,当N a C l 的胁迫浓度高达2 1 0m m o l L 时,发芽指数和活力指数分别降至对照的1 6 0 和1 23 0 0 。 在小于等于1 8 0m m o l L 的N a C l 胁迫下,G A ,处理显著缓解 了N a C I 胁迫对珍汕9 7 种子发芽指数的影响,但是,N a C l 胁 迫浓度只有小于等于9 0m m o l L 时,G A ,处理才能显著缓解 N a C l 胁迫对珍汕9 7 种子活力指数的影响。G A ,处理能显著 缓解一定浓度范围内的N a C l 胁迫对水稻种子发芽指数和活 力指数的影响,在不同浓度的N a C l 胁迫下,G A ,处理对发芽 指数和活力指数的缓解作用存在差异,G A ,对发芽指数的缓 解作用大于对活力指数的缓解作用。 2 4G A ,对N a C I 胁迫下珍汕9 7 幼苗生长的影响由表2 可知,6 种浓度的N a C l 胁迫都能抑制珍汕9 7 幼苗生长,而且 N a C l 的胁迫浓度越高,对幼苗生长的抑制作用越明显。在大 于等于6 0m m o l LN a C l 胁迫下,N a C l 胁迫对幼苗的种子根、 第1 片真叶叶鞘和株高的生长产生了显著的抑制作用,其长 度都明显小于相应对照的长度。虽然G A ,处理能够不同程 度缓解N a C l 胁迫对幼苗生长的抑制作用,但是在P 0 0 5 水平,G A ,处理只能显著缓解9 0 i 5 0m m o l LN a C l 胁追对 种子根生长的抑制作用,并且只能显著缓解小于等于9 0 m m o l LN a C l 胁迫对第1 片真叶叶鞘和株高生长的抑制作 用;其他浓度的N a C l 胁迫对幼苗种子根、第1 片真叶叶鞘和 株高生长的影响,G A ,处理不具备显著的缓解作用。 表2G A 。对N a C I 胁迫下珍汕9 7 水稻幼苗生长的影响 T a b l e2E f f e c t so fG A 3o ns e e d l i n gg r o w t ho fr i 。eZ h e n s h a n9 7u n d e r N a C Is t r e s s T r e a t S e m i n a lF i r s tt r u el e a fP l a n t ! 堕! 塑翌! ! ! ! ! 照! ! ! 型! ! ! ! 鲢! 受出! c K 1 6 8 0a3 0 0a9 9 8a 1 1 0 0b2 1 0b5 1 0b 9 7 3c1 8 5b3 3 0c 4 5 0d i0 3 9d e g0 5 0d f 2 0 7e f0 3 1d e g0 4 4d f 1 5 5e l l0 2 0d e0 3 5d f 080g h 0 1 4d e0 2 6d 1 1 2 0b 6 1 0f 1 0 0 8a 1 1 1 0b3 9 0c5 9 0e 8 0 0 j 0 5 4d g0 8 0d f 4 8 5d i0 4 0d e g0 6 5d f 1 7 5e f h0 3 3d e g0 5 0d f 1 2 5 鼬0 2 2d e 0 4 0d f 3 讨论 水稻属于不耐盐的甜土作物,盐的胁迫浓度高于一定数 值时,就会对水稻种子发芽产生显著的抑制作用。该试验结 果证明,水稻种子发芽率对盐胁迫的忍耐程度较高,N a C I 胁 迫浓度大于等于1 2 0m r n o l L 时,水稻种子发芽率才开始显 著降低。但是水稻种子发芽势、发芽指数和活力指数对盐胁 迫比较敏感,N a C l 胁迫浓度大于等于6 0m m o l L 时,就开始 显著降低,而这3 个指标的显著降低,将会导致出苗不整齐 并产生弱苗。另外,大于等于6 0m m o l L 的N a C I 胁迫显著 抑制水稻幼苗生长,导致水稻种子根、第l 片真叶叶鞘和株 高的长度显著降低。可见,当盐的胁迫浓度大于等于6 0 m m o l L 时,就会对水稻种子发芽及幼苗生长产生显著抑制 作用,给水稻生产带来危害。 ( 下转第6 4 4 7 页) 万方数据 3 7 卷1 4 期 李正丰等口蹄疫病毒抗原保护剂的研究 F M D 疫苗中有效病毒抗原含量应为1 5 9 2 斗g 剂量( 2 I n l ) p 1 。低于1 5 剂量,不能诱导良好免疫应答。高于 9 2 斗g 剂量时,中和抗体滴度并不因抗原量的增加而提高。 国际上一般将疫苗中的抗原含量定为1 l O 斗g 剂量。0 型 比c 、A 及A s i a I 型所需要的抗原量大。P a y 等报道,要达到 5 0 的保护率,0 型1 4 6 s 颗粒需要量是2 2 0n g j 。0 型F M D 免疫原性最弱,需要的1 4 6 s 颗粒量高。 3 结论与讨论 ( 1 ) 在筛选保护剂配方时,大分子和小分子物质配合使 用十分重要。大分子物质构成制品多孔构架,小分子物质主 要作用是防止蛋白质变性。大分子物质与小分子物质配合 使用,能有效地增强小分子的保护作用。选择合适的试剂组 成保护剂配方,是试验的关键环节盯。0 1 。对于单一保护剂, 试验表明,海藻糖保护效果最佳,其次是山梨醇和P V P ( 聚乙 烯吡咯烷酮) ;对于复合保护剂,经过复合保护剂配比试验, 得到了保护效果最佳的复合保护剂1 ( 4 4 ) 方案。而且复合保 护剂的保护效果优于单一保护剂。由于细胞产毒都不太稳 定,因而该结论仍需进一步核实。为此进行了病毒1 4 6 s 抗 原含量的测定,通过病毒1 4 6 s 抗原含量的测定结果看出,在 F N D V 抗原中加入复合保护剂确实提高了产毒量,尤其是病 毒保护剂对提高F M D V 的冷冻保存时间和耐热效能作用明 显。加速热稳定性试验是筛选耐热保护剂有效的方法,保护 剂保存的F 1 V I D V 抗原3 7 热稳定性与2 8 保存期呈正 相关,3 7 保存4 0h 相当于2 8 保存1 年。复合配方保 护剂I 保存的F M D V 抗原,在3 7 病毒效价下降幅度最小, 保护效果达到国内先进水平,可用于F M D V 抗原的保护剂 配方。 。( 2 ) 口蹄疫病毒抗原保护剂具有保护病毒和营养细胞的 功能,其作用机制目前还不清楚,但可达到以下效果:延缓细 胞老化,减少营养液中病毒的失活,提高疫苗效价,使完整病 ( 上接第6 3 9 0 页) 很多试验表明,赤霉素能够诱导种子发芽口“J ,并促进 植株伸长生长“ “o 。为了缓解盐胁迫对水稻种子发芽及幼 苗生长的抑制作用,该试验设计了6 种不同浓度的N a C l 胁 迫并结合G A ,处理,结果表明,1 0 肛m o l LG A ,处理能显著 缓解小于等于9 0m m o l L 的N a C l 胁迫对种子活力指数、幼 苗第1 片真叶叶鞘和株高生长的影响,显著缓解9 0 1 5 0 m m o l L 的N a C l 胁迫对种子根生长的影响,显著缓解小于等 于1 8 0m m o l L 的N a C l 胁迫对种子发芽势、发芽指数的影 响,并显著缓解1 2 0 2 1 0m m o l L 的N a C I 胁迫对种子发芽率 的影响。可见,外源赤霉素处理能显著缓解一定浓度范围内 的N a C l 胁迫对水稻种子发芽及幼苗生长的抑制作用,赤霉 素的合理应用对开发利用盐渍土壤具有重要的意义。 毒粒子数提高,缺陷粒子数减少,减小病毒对温度的敏感性, 并能延长冷冻保存,减少疫苗冻干过程中病毒的失活,疫苗 稀释使用后有效保存时间延长,增强疫苗的免疫原性。提高 动物的抗体水平,使其离散度减小,免疫持续期延长。随着 生物技术的飞速发展,保护剂已经越来越多地应用于各种生 物制品中,如动物细胞、微生物和蛋白质的保存。但在使用 该项技术时仍需要采取一些有效的辅助手段,利用蛋白质分 析手段,为蛋白质保护剂的研究提供了方便。计算机技术在 冻干过程中的应用使得研究者能够通过建立相应的数学模 型对冻干过程中物料的真实状态进行模拟解析,从而使冻干 技术得以完善与提高,但是我国对常温疫苗保护剂的研究方 面尚未见到报道,为此兽医工作者还应该进一步了解蛋白质 的保护机理,开发出具有潜能的常温疫苗保护剂,来提高动 物疫苗的质量,这是现今生物技术研究的热点之一。 参考文献 1 1 王文成兽用生物制品耐热冻干保护剂的研究进展 J 畜牧兽医 科技信息,呓,1 8 ( 1 2 ) :7 1 0 ,1 5 2 王栋,张秀文,刘业兵,等鸡新城疫耐热冻干保护剂活疫苗中试生产 及区域i 式验 J 中国兽医,2 0 0 2 ,3 6 ( 1 ) :1 0 1 2 3 王栋,刘业兵,张万林,等鸡马力克氏病火鸡疱疹病毒耐热保护剂活 疫苗的研究 J 中国兽药杂志,2 0 0 2 ,3 6 ( 7 ) :刀一2 9 4 】殷震,刘景华动物病毒学 M 2 版北京:科学出版社,1 9 9 7 :4 7 9 4 9 9 + 5 I t W E Y E N A N UMM ,B L A C KL ,B O G EA ,e ta 1 T h er e l a t i o n s h i pk t w t h e1 4 0 Sa n t i g e nd o s ei na q U e O l l 8f o o t a n d - m o u t hd i s e 峨v a c c i n e sa n dt h e s e n l n la n t i b o d yr e s l ) 0 m eo fc a t t l e J JB i dS t a n d ,1 9 8 4 ,1 2 ( 1 ) :1 1 1 1 2 0 6 谢庆阁口蹄疫 M 北京:中国农业出版社,2 0 0 4 7 马闻天兽医生物制品 M 北京:中国畜牧兽医学会生物制品研究会, 1 9 8 7 :1 3 7 2 8 8 8 王明俊兽医生物制品学 M 北京:中国农业出版社,1 9 9 5 :3 4 5 3 4 6 9 刘宝全兽医生物制品 M 北京:中国农业出版社,1 9 9 5 :8 9 9 2 1 0 王仁耕冻干疫茁耐热保护剂研究( 第一报) J 中国兽药杂志,1 9 8 9 ( 2 ) :5 6 参考文献 1 王遵亲中国盐渍土 M 北京:科学出版社,1 9 9 3 :3 2 5 3 4 4 2 吕贻忠,李保国土壤学 M 北京:中国农业出版社,2 I D 0 6 :3 5 6 3 5 7 3 朱俊义,杨光宇,赵风娟,等野生大豆抗盐解剖结构研究 J 东北师 范大学学报,2 1 1 0 3 ,3 5 ( 4 ) :1 0 5 1 0 8 4 焦险峰,杨邦杰,

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