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临床常用免疫学检查,华中科技大学同济医学院 同济医院诊断学教研室 钟 强,临床常用免疫学检查,血清免疫球蛋白（immunglobulin，Ig）测定 血清补体测定 细胞免疫检测 感染免疫检测 自身免疫检查 肝炎病毒标志物检测 肿瘤标志物检测,血清免疫球蛋白分类,Ig通常是指具有抗体活性和（或）抗体样结构的球蛋白。 应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分5类： IgG、IgA、IgM、 IgD、 IgE。 IgG：含量最多或最主要的Ig（75%），唯一能够通过胎盘的Ig。主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成与分泌。 IgA：约占10%，SIgA在局部免疫中起重要作用。主要由肠系淋巴组织中的浆细胞产生。,血清免疫球蛋白,IgM：分子量最大，由5个IgM单体通过J链连接。是最早出现的Ig，是抗原刺激后最早出现的抗体，其杀菌、溶菌、溶血、促吞噬以及凝集作用比IgG高5001000倍。 测定方法：单向免疫扩散法（RID）或免疫比浊法。,血清免疫球蛋白 测定参考值,参考值： IgG：7.616.6g/L （RID法） IgA：7103350mg/L IgM ：0.482.12 g/L,.,临床意义 免疫球蛋白增高 多克隆增高:常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝硬化、淋巴瘤和某些自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等。 单克隆增高:主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨隋瘤、原发性巨球蛋白血症等。,免疫球蛋白降低：常见于各类先天性免疫缺陷病、获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病及长期使用免疫抑制剂的病人。 血清IgD测定 免疫扩散法：062mg/L 已发现有些抗核抗体、抗基底膜抗体、抗甲状腺抗体和抗“O”抗体等均属IgD，但活性甚低。,血清IgE：主要由鼻咽部、支气管、胃肠道等粘膜固有层的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，能与肥大细胞、嗜碱性粒细胞膜上的FceR结合，产生I型变态反应。 ELASA：0.10.9mg/L 临床意义： 1. I型变态反应 2. IgE型骨髓瘤、寄生虫感染等 3. 慢性肝炎、SLE、类风湿性关节炎等。,是一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的IgG分子或片段，一般不具有抗体活性。 参考值：蛋白电泳法，免疫电泳法：阴性 意义：1.多发性骨髓瘤（MM），占35%65%，其中IgG型占60%左右； IgA型占20%左右； 轻链型占15%左右； IgD、 IgE型罕见。2.巨球蛋白血症。3.重链病（HCDs）。4.半分子病。5.恶性淋巴瘤。6.良性M蛋白血症。,血清M蛋白测定 （M protein，monoclonal immunoglobulins）,血清补体测定,补体是具有酶活性的一种不耐热球蛋白，分3组：9种补体成分（C1C9）；B、D、P、H、I 因子；补体调节蛋白，如C1抑制物、C4结合蛋白、促衰变因子等。 总补体溶血活性（CH50）测定 参考值 试管法：50000100000U/L 意义：增高 见于急性炎症、急性组织损伤、恶性肿瘤及妊娠。降低 见于急性肾小球肾炎、自身免疫性疾病、亚急性感染性心内膜炎、慢性肝病、肝硬化、AIDS、严重烧伤等。,血清补体测定,血清C3：主要由巨噬细胞和肝脏合成，在经典激活途径与旁路激活途径中发挥重要作用。 参考值：免疫比浊法0.851.70g/L 增高 作为急性时相蛋白，在急性炎症、传染病早期、急性组织损伤、恶性肿瘤、抑制物排斥反应时增高。降低 补体合成能力降低；合成原料不足；消耗或丢失太多；先天性补体缺乏。,血清补体测定,血清C4测定：由肝脏、吞噬细胞合成，参与补体的经典激活途径。 参考值：单向免疫扩散法：0.197+/-0.109/L。 临床意义基本与C3相似，降低还见于多发性骨髓瘤、IgA肾病、遗传性C4缺乏症等。,血清补体测定,补体C1q测定 参考值：0.1790.04g/L 临床意义：与C3相似，降低还见于活动性混合性结缔组织病、重度营养不良、肾病综合征、重度联合免疫缺陷病等。 B因子测定-C3激活剂前体,细胞免疫检查,淋巴细胞表面标志物检测 T淋巴细胞表面标志物检测：E玫瑰花形成试验、免疫荧光法（IFA）、荧光激活细胞分类法（FACS）、免疫金银法以及免疫酶染色法等。 E玫瑰花形成试验 SRBC+CD2 参考值 Et 64.4%6.7% 免疫荧光法,T淋巴细胞表面标志物检测,意义 可用于T淋巴细胞计数， T淋巴细胞亚群的分类以及判断T淋巴细胞的活化程度。 CD3 分子表达于所有成熟T淋巴细胞的表面，是总T淋巴细胞的重要标志，CD3+ 常见于甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、重症肌无力以及器官移植后排斥反应。 CD3+ 主要见于免疫缺陷病，如AIDS、先天性胸腺发育不全综合征以及联合免疫缺陷病等。亦可见于恶性肿瘤、SLE、免疫抑制剂治疗等。,T细胞分化抗原测定,白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD） CD3代表总T淋巴细胞，CD4是辅助、诱导T细胞的标志，CD8是抑制、杀伤性T细胞的标志。应用单抗和荧光标记二抗反应在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD的百分率。 参考值 ：免疫荧光法（IFA）： CD3为63.1%10.8%； CD4 为42.8%9.5%；CD8 19.6%5.9%；CD4 /CD8为（2.20.7）/1。流式细胞术：CD3 61%85%；CD4 28%58%；CD8 19%48%；CD4 /CD80.92.0/1。,T细胞分化抗原测定,临床意义 CD3 CD4+T细胞下降 常见于某些病毒感染性疾病，如AIDS、MCV、严重创伤、全身麻醉、大手术、应用免疫抑制剂等； 升高见于类风湿性关节炎活动期。 CD8+ T细胞下降 常见于类风湿性关节炎、Sjogren综合征、重症肌无力、DM（II型）以及膜型肾小球肾炎等； 升高见于传染性单核细胞增多症急性期、MCV以及慢性乙肝。 CD4 +/CD8+比值下降，常见于AIDS、瘤型麻风病、恶性肿瘤进行期和复发时。也见于部分感染性疾病如传染性单核细胞增多症、MCV、血吸虫病等；增高见于类风湿性关节炎活动期、SLE、Sjogren综合征、重症肌无力、膜型肾小球肾炎以及器官移植后排斥反应等。,淋巴细胞功能检测,T细胞转化试验 形态学法： T细胞转化率60.1%7.6% 3H-TdR掺入法：培养淋巴细胞用液体闪乐烁仪测量，记录每分钟脉冲数（cpm）。 SI（刺激指数）=PHA刺激管cpm均值/对照管cpm均值 SI2为有意义，2为淋巴细胞转化率降低。,T细胞转化试验,临床意义 判断机体细胞免疫功能水平，降低常见于细胞免疫缺陷或细胞免疫功能低下者，如恶性肿瘤、淋巴瘤、重症结核、肝硬化等。增高常见于Down综合征。 估计疾病的疗效与预后,B淋巴细胞表面标志物检测,表面抗原：CD19、CD20、CD21、CD22和CD40等 表面受体：B细胞抗原受体（BCR）、细胞因子受体（CKR）、补体受体（CR）与Fc受体等。 B细胞表面免疫球蛋白（BCR，SmIg）是B细胞的特征性表面标志。将荧光标记的抗不同类型Ig的单克隆抗体进行检测，可将B细胞分为SmIgG、SmIgM、 SmIgA、 SmIgD、 SmIgE。,B淋巴细胞表面标志物检测,参考值：免疫荧光法（羊抗人）（以携带该标志的细胞百分数表示） SmIg+细胞总数：均值21%（16%28%） SmIgG+ 细胞：均值7.1%（4%13%） SmIgM+细胞：均值8.9%（7%13%） SmIgA+细胞： 均值2.2%（1%4%） SmIgD+细胞： 均值6.2%（5%8%） SmIgE+细胞： 均值0.9%（0%1.5%）,B淋巴细胞表面标志物检测,临床意义 SmIg+细胞增高 ：常与B细胞恶性增殖有关，主要见于慢淋、毛细胞白血病以及巨球蛋白血症等。 SmIg+细胞减低：主要与体液免疫缺陷有关，常见于性联丙种球蛋白缺乏症、严重联合免疫缺陷病等。,B淋巴细胞表面标志物检测,B细胞分化抗原CD19、CD20、CD21、CD22测定 参考值：FACS：CD19+细胞 11.74%3.73% 临床意义 CD19为全部B细胞共有的表面标志，增高见于B细胞系统的恶性种瘤，减低见于体液免疫缺陷病。,NK细胞活性测定,NK细胞能直接杀伤效应细胞，具有抗肿瘤、抗感染和和免疫调节等功能，亦参与移植物排斥反应、自身免疫病和超敏反应的发生。 LDH释放法 参考值 细胞毒指数：27.5%52.5% 51Cr释放法 参考值 NK细胞活性（自然杀伤率）：47.6%76.8%,2019/8/23,25,可编辑,NK细胞活性测定,临床意义 活性升高 常见于病毒感染的早期，Down综合征，接受器官移植、骨髓移植的患者等及免疫增强剂治疗患者。 活性降低 常见于恶性肿瘤、重症联合免疫缺陷病，AIDS和免疫抑制剂治疗者等。 肿瘤疗效观察及预后评价 免疫调节功能 NK细胞可释放INF-、INF-和GM-CSF等细胞因子。,乙型肝炎病毒血清标记物检测,HBeAg，Anti-HBe或抗Hbe HBeAg，Anti-HBc或抗Hbc 测定方法：ELASA，RIA,HBsAg，Anti-HBs或抗HBs,乙型肝炎病毒血清标记物检测,HBsAg（+）表示肝中有HBV 见于：乙型肝炎潜伏期和急性期。 慢性迁延性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬化，肝癌。 慢性HBsAg携带者。 Anti-HBs或抗HBs：中和抗体,乙型肝炎病毒血清标记物检测,HBeAg：有乙型肝炎，是病毒复制活跃，传染性强的指标；持续阳性易转变为慢性肝炎； HBeAg+和 HBsAg+可垂直传播。 Anti-HBe或抗Hbe：出现于急性感染的恢复期，持续时间较长。意味着HBV部分被清除或抑制，复制减少，传染性降低。,乙型肝炎病毒血清标记物,Anti-HBc或抗HBc：反映肝细胞受到HBV侵害的一种指标，主要包括IgM、IgG、IgA。 抗HBc IgM阳性是最早出现的特异性抗体，是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示病人的血液有强传染性。也见于慢性活动性肝炎。 抗HBc IgG 其阳性滴度高，表明患有乙型肝炎，指正在感染；低滴度为既往感染指标，体内时间长。,乙型肝炎病毒血清标记物,HBV-DNA定性和定量测定：目前定量测定范围为102 108 拷贝/ml。 与血清免疫学结果的综合评价 HBsAg和Anti-HBs HBeAg，Anti-HBe ，Anti-HBc 5项标志物的变化和联合检测的临床意义,丙型肝炎病毒标志物检测,抗-HCV（ELISA） 抗-HCV IgM阳性 常见于急性HCV感染，是诊断丙肝的早期敏感指标；是HCV活动的指标，是判断HCV传染性的指标。 抗-HCV IgG HCV-RNA测定 测定方法 逆转录巢式PCR法，荧光定量PCR法 （第三代试剂抗原包括C、NS3、NS4、NS5；丙肝病毒易发生变异，抗-HCV阳转时间差异较大）,血清抗链球菌溶血素“O”测定,参考值： 乳胶凝集法（LAT）：500U 意义：增高 常见于A组溶血链球菌感染相关疾病，如扁桃腺炎、感染性心内膜炎、风湿热、链球菌感染后肾小球肾炎等。 ASO 在A组溶血链球菌感染后1周开始升高，46周达高峰，可持续几个月或几年。 假阳性与假阴性,伤寒、副伤寒沙门菌免疫测定,肥达（Widal）反应 参考值 O凝集价1：80 伤寒H凝集价1：160 副伤寒A、B、C凝集价1：80 伤寒、副伤寒沙门菌抗体IgM测定 参考值 ELASA法：阴性或滴度1：20。,伤寒、副伤寒沙门菌免疫测定,临床意义 O升高，H正常 H正常，O升高 O升高，H升高 O升高，A、B、C任何一项升高,血清C-反应蛋白（CRP）测定,C-反应蛋白是一种由肝脏合成的，能与肺炎双球菌C多糖体起反应的急性时相反应蛋白，具有激活补体，促进吞噬和免疫调理作用。 参考值：8.2mg/L（免疫比浊法） 意义 组织损伤，如大手术，严重创伤，烧伤，心肌梗死等，发病后数小时迅速增高，病情好转后又迅速下降。又复升高提示继发感染或深部静脉血栓形成。 风湿热活动期，可达200mg/L以上。 细菌性感染常明显升高，病毒性感染升高不明显或轻度升高。 恶性肿瘤，器官移植后排斥反应，妊娠等可见明显升高可在发病后数小时迅速增高，病情好转后又迅速下降至正常。,肾综合征出血热病毒抗体检测,参考值 IFA，ELASA：阴性 特异性IgM-感染后23天检出，710天达高峰。特异性IgG感染后两周出现，可持续多年。,艾滋病血清学检查,检测抗HIV（I型或II型）是AIDS诊断的一个主要指标。抗原为HIV感染的T细胞株的病毒抗原（HLA-DR抗原污染可出现假阳性） 。 方法：初筛试验ELASA ，乳胶凝集法，免疫印迹法，斑点免疫渗透法。 确认试验 可选用蛋白印迹试验（WB）， PCR法检查HIV病毒DNA。 HIV抗原检测 P24抗原（病毒衣壳蛋白，具群特异性）。 HIV核酸检测 DNA-PCR；RNA-PCR,梅毒血清学检查,是由梅毒螺旋体梅毒亚种所致的一种性传播疾病。 梅毒螺旋体抗体检测：非密螺旋体抗原试验和密螺旋体抗原试验，前者为筛选试验和治疗效果监测，后者为确诊诊断。 暗视野显微镜检查 梅毒螺旋体PCR检测,甲胎蛋白（AFP）测定,参考值 CLIA，RIA，ELASA：血清25g/L 临床意义 原发性肝癌明显升高，AFP300 g/L 病毒性肝炎、肝硬化患者不同程度AFP升高但常 300 g/L。 生殖腺胚胎性肿瘤血清AFP升高 妊娠小扁豆凝集素（LCA）结合型AFP25%提示原发性肝癌。,自身抗体检查,自身免疫性疾病（AID） AID-器官特异性和非器官特异性（抗原为细胞核或胞浆成分）及中间型。 抗核抗体（ANA）：是以细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称。间接免疫荧光检查有四种荧光图谱：均质型（抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体）；周边型（抗dsDNA抗体）；斑点型或颗粒型（抗U1-RNP、抗Sm、抗Scl-70、抗SS-B/La、抗SS-A/Ro等）；核仁型（核糖体、U3-RNP、RNA聚合酶）。,自身抗体检查,抗核抗体（ANA）检查：抗各种细胞核成分（脱氧核糖核蛋白-DNP、DNA、可提取的核抗原-ENA和RNA等）。 参考值：IFA法阴性，血清滴度1：40为阳性 见于SLE（80%100%）、MCTD（100%）、原发性胆汁性肝硬化95%100%）、DM （30%50%）、RA等。,自身抗体检查,抗DNA抗体分为：抗ds-DNA、抗ss-DNA、抗z-DNA 抗z-DNA 对SLE有特异性，检出率在90%以上。 抗dsDNA抗体测定的临床意义 见于SLE活动期，阳性率70%90%。特异性教高（95%）敏感性较低-诊断与治疗监控。另外参与SLE发病机制。 抗Sm抗体测定：为SLE所特有，疾病特异度达99%，且能反应疾病活动的程度，灵敏度较低，平均为20%。与CNS、肾病、肺纤维化及心膜炎有一定关系。,自身抗体检查,抗组蛋白抗体（AHA）测定 临床意义：50%70%的SLE及95%以上的药物诱导性狼疮可出现，主要靶抗原为H2A-H2B DNA复合物，与SLE活动有关。 抗核糖核蛋白（RNP）抗体测定 临床意义：抗U1-RNP抗体主要与MCTD相关，在30%40%的SLE病人中可检测到，并常与Sm抗体相伴出现。常与下列临床表现有关，肾脏较少累及、雷诺现象、手肿胀、食管运动不良等。,自身抗体检查,抗SS-A/Ro抗体测定 干燥综合征有三种不同的自身抗体：SSA、SSB、SSC（RANA），前两者仅见于原发性干燥综合征，后者见于伴类风湿性关节炎的继发性干燥综合征。 SS-A/Ro抗体见于干燥综合征（SjS）（灵敏度88%96%），RA（3%10%），SLE（24%60%）。其他疾病：亚急性皮肤性狼疮（70%90%），新生儿狼疮（90%），补体C2/