参麦注射液对肠缺血再灌注肺脂质过氧化损伤的影响.pdf

栽蚤葬灶躁蚤灶酝藻凿允熏Nov圆园10熏灾燥造38晕燥11肠缺血再灌注（ischemia/reperfus蚤燥灶，I/R）损伤是常见的组织器官损伤之一，在严重感染、休克、心肺功能不全等疾患的病理演变过程中起重要作用，不仅可引起消化道局部组织损害，而且可导致远隔器官的损伤，其中以肺损伤引起的呼吸窘迫综合征最为突出。肠I/R肺损伤机制较复杂，有研究认为氧*唐山市科技局基金资助项目（项目编号：园怨员猿园圆园圆粤原猿原苑）作者单位：063000唐山，华北煤炭医学院生理教研室参麦注射液对肠缺血再灌注肺脂质过氧化损伤的影响*王艳蕾崔国金蔡庆艳景友玲张一兵郑慧萍摘要目的：探讨参麦注射液对肠缺血/再灌注（I/R）肺脂质过氧化损伤的防护作用。方法：SD大鼠24只，随机均分为3组。对照组只分离出肠系膜上动脉；模型组、治疗组复制大鼠肠I/R损伤模型；治疗组于缺血前、再灌前、再灌后30min尾静脉注射参麦注射液0.9mL/100g体质量。观察各组外周血白细胞黏附聚集（LAA）、肺组织湿/干比（宰/D）、肺系数以及血浆和肺组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）的变化及参麦注射液对上述指标的影响；并进行肺组织病理学检测。结果：（1）模型组LAA、肺组织W/D、肺系数均高于对照组（孕约0.01），光镜下肺组织病理损害亦明显重于对照组；治疗组上述指标均明显小于模型组（孕约园援园员）。（圆）模型组血浆和肺组织杂韵阅活性低于对照组（孕约园援园员）；酝孕韵活性及酝阅粤含量高于对照组（孕约园援园员），治疗组上述各检测指标均较模型组明显改善（孕约园援园员）。结论：参麦注射液对肠陨/砸后肺损伤具有保护作用，其机制可能与抑制中性粒细胞的聚集，对抗脂质过氧化损伤有关。关键词肠再灌注损伤肺脂质过氧化作用中性白细胞过氧化物酶超氧化物歧化酶丙二醛疾病模型,动物参麦注射液EffectsofShenMaiInjectiononLungLipidPeroxidationinRatModelofIntestinalIschemia/ReperfusionWANGYanlei,CUIGuojin,CAIQingyan,JINGYouling,ZHANGYibing,ZHENGHuipingDepartmentofPhysiology,NorthChinaCoalMedicalCollege,Tangshan063000,ChinaAbstractObjective:Toexploretheeffectsofshenmaiinjection(SM)onlunglipidperoxidationinratmodelofintestinalischemia/reperfusion(I/R).Methods:Twenty-fourSDratswererandomlydividedintothreegroups袁shamgroup,I/Rgroupandtreatmentgroup.Thesuperiormesentericarterywasseparatedonlyinratsofshamgroup.ModelsofintestinalI/RinjurywereestablishedinI/Rgroupandtreatmentgroup.Intreatmentgroup,ratswasinjectedSM(0.9mL/100g)throughtailveinbeforeischemia,beforereperfusionand30minafterreperfusion,respectively.Thevaluesofleukocyteadhesiveness/aggrega鄄tion(LAA)weredetectedintheperipheralblood,lungwet/dryweightratio,lungcoefficient,superoxidedismutase(SOD),mal鄄ondialdehyde(MDA)andmyeloperoxidase(MPO)inserumandlungtissue,andtheeffectsofSMwereobservedaswell.Thechangesoflunghistopathologywereexaminedbylightmicroscope.Results:(1)ThevaluesofLAAinperipheralblood,lungwet/dryweightratioandlungcoefficientweresignificantlyincreasedinI/Rgroupthanthoseinshamgroup(孕约0.01).There鄄sultsoflightmicroscopeexaminationshowedthatmoreseriousdamageoflungtissueinI/Rgroupcomparedwiththoseofshamgroup.Theabove-mentionedindexeswereobviouslylowerintreatmentgroupcomparedwiththoseofI/Rgroup(孕约0.01).(2)TheactivityofSODinserumandlungtissuewassignificantlylowerinI/Rgroupthanthatinshamgroup(孕约0.01).Thecon鄄tentofMDAandtheactivityofMPOinserumandlungtissueweresignificantlyincreasedinI/Rgroupthanthoseinshamgroup(孕约0.01).Theabove-mentionedindexeswereobviouslyamelioratedintreatmentgroupincomparisonwithI/Rgroup(孕约0.01).Conclusion:Shenmaiinjectioncanprotectthelunginjuryinducedbyintestinalischemia/reperfusion,whichmaybemediatedbyinhibitinglipidperoxidationandaggregationofneutrophils.Keywordsintestinesreperfusioninjurylunglipidperoxidationneutrophilsperoxidasesuperoxidedismu鄄tasediseasemodels,animalshenmaiinjection986天津医药圆园10年11月第38卷第11期自由基的参与1和多形核白细胞（polymorphonuclearneutrophil，PMN）介导的组织损伤2是致病的重要因素。参麦注射液（泽澡藻灶皂葬蚤蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶，杂酝）在临床上主要用于改善缺血时的微循环障碍，但其对肠I/R肺损伤影响的研究报道尚少。本研究旨在探讨肠I/R时肺脂质过氧化损伤以及参麦注射液对其防护作用。1材料与方法1.1材料普通级SD大鼠24只，雌雄不拘，8周龄，平均体质量（276依14）g，购自北京华阜康生物科技有限公司（SCXK京2009-0004），常规喂养，术前禁食12h，自由饮水。参麦注射液购自河北神威药业有限公司，批号：Z13020888。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及髓过氧化物酶（MPO）测试盒购自南京建成生物工程研究所。1.2造模与分组将动物随机分为3组，每组8只，平均体质量分别为（277.00依14.18）、（277.75依15.70）、（272.25依11.63）g，差异无统计学意义（F=0.336,P0.05）。对照组只分离出肠系膜上动脉（superiormesentericartery,SMA），不行夹闭；模型组于腹腔注射乌拉坦（1g/kg）麻醉，行腹部手术，分离出肠系膜上动脉,在其根部用无创伤血管夹夹闭，阻断该动脉血运1h后松夹，恢复血流后观察1h，造成肠I/R损伤模型；治疗组同样造成肠I/R损伤模型，并于缺血前、再灌前、再灌后30min每个时间点对每只大鼠行尾静脉推注参麦注射液（0.9mL/100g）。各组连续监测平均动脉压，并选取缺血前、再灌前、再灌后1h3个时间点进行比较；于松夹后1h自腹主动脉取血，同时取肺组织，一部分-70益保存，待测相应指标；一部分冰盐水漂净，滤纸吸干，待测肺湿/干比值及肺系数；一部分经10%福尔马林固定，染色，光学显微镜观察肺组织的损伤程度。1.3检测指标及方法（1）平均动脉压（meanarterialpressure,MAP）：手术过程中各组动物均分离左颈总动脉，全身肝素化后，颈总动脉插管经三通连接压力传感器，通过BL-420生物功能实验系统（成都泰盟科技有限公司）连续监测MAP。（2）肺组织湿/干比值及肺系数：取左肺组织，吸干表面水分后称质量，为湿重（W）。计算肺系数肺湿重（早）/体质量（早）伊100%，然后将肺组织置于80益恒温烤箱,干燥48h至恒重后再称质量,为干重（阅）。计算肺组织湿重与干重比值（wet/dryweightratio，W/D），表示肺组织水肿形成情况。（3）外周血白细胞黏附聚集（LAA）试验：于再灌后1h经内眦取血，用3.8%柠檬酸钠抗凝，血与柠檬酸钠溶液体积比为3颐1。取数滴血滴于载玻片上，置于45益温箱23s，同时将玻片竖起，使血液自然留下，使之铺涂薄层，然后自然风干，放于-20益冰箱10min，4%甲醛固定，苏木素染色。记数300个细胞，记录其中聚集白细胞所占细胞数的百分比（3个以上细胞间距离少于1个细胞直径视为聚集）。（4）按照试剂盒要求测定SOD、MDA、MPO。1.4统计学方法采用SPSS13.0软件包进行统计学分析，计量资料以均数依标准差（曾依泽）表示，组间比较采用重复测量资料方差分析或单因素方差分析，进一步组间比较采用q检验，组内不同时间点比较采用Bonfferonit检验，以P0.05）；治疗组再灌后1h血压较缺血前、再灌前有所下降，但较同时间点模型组明显升高，差异均有统计学意义（孕约0.01），见表1。2.2I/R时肺组织W/D、肺系数及外周血LAA的变化模型组肺组织W/D、肺系数及外周血LAA均高于对照组（孕约0.01）；治疗组肺组织W/D、肺系数及外周血LAA低于模型组，但均未达到对照组水平，差异有统计学意义（孕约0.05或孕约0.01），见表2。2.3I/R时血浆SOD、MPO活性及MDA含量的变化模型组较对照组血浆SOD活性降低，MDA含量及MPO活性升高，差异有统计学意义（孕约0.01）；觹孕约园援园5，觹觹孕约园援园1，表24同表13组缺血前、再灌前、再灌后1hMAP的比较（n=8，曾依泽）对照组（员）模型组（圆）治疗组（猿）择（员）颐（圆）（员）颐（猿）（圆）颐（猿）缺血前淤16.91依1.0316.39依1.0616.59依0.761.530.940.59再灌前于16.83依1.0716.38依1.1116.52依0.611.971.360.61再灌后1h盂16.84依1.045.81依1.2610.39依1.6922.99*13.45*9.55*淤颐于1.5582.1891.597淤颐盂1.04722.155*10.144*于颐盂0.29221.202*9.361*酝粤孕（噪孕葬）组内各时间点比较（t）组别（n=8，曾依泽）表23组肺组织W/D、肺系数、LAA的比较组别对照组（员）模型组（圆）治疗组（猿）云择（员）颐（圆）（员）颐（猿）（圆）颐（猿）肺组织W/D1.75依0.193.23依0.332.44依0.1773.687*17.09*7.97*9.12*肺系数（豫）0.616依0.1891.065依0.1630.751依0.06441.320*12.51*3.76*8.747*蕴粤粤（豫）5.70依1.6826.39依1.3517.39依2.07287.754*33.84*19.12*14.72*987栽蚤葬灶躁蚤灶酝藻凿允熏Nov圆园10熏灾燥造38晕燥11治疗组较模型组血浆SOD活性升高，MDA含量及MPO活性降低，但均未达到对照组水平，差异均有统计学意义（孕约0.01或孕约0.05），见表3。2.4I/R时肺组织SOD、MPO活性及MDA含量的变化模型组较对照组肺组织SOD活性降低，MDA含量及MPO活性升高（孕约0.01）；治疗组较模型组肺组织SOD活性升高，MDA含量及MPO活性降低，差异均有统计学意义（均孕约0.01），见表4。2.5肺组织形态学变化对照组肺组织结构正常；模型组肺组织损伤明显，有大量中性粒细胞浸润，肺泡壁增厚，血管充血、水肿、出血；参麦注射液治疗后，肺血管充血和中性粒细胞浸润减轻。3讨论肠是体内代谢活跃、具有独特免疫功能的器官，是体内最大的致病菌库。目前研究认为，肠是多系统器官功能不全综合征（multipleorgandysfunc鄄tionsyndrome袁MODS）的启动器官3。I/R损伤可导致肠黏膜屏障损伤、肠内细菌毒素移位及炎症介质激活，从而诱发全身炎症反应综合征及MODS4，其中肺损伤在I/R后远隔器官损伤中出现较早。肺组织W/D比值和肺系数是目前常用的评价肺含水量和反映微血管损伤的指标。本实验发现I/R损伤后，肺组织W/D比值和肺系数均明显升高，肺组织损伤明显，血管明显充血水肿、出血及中性粒细胞浸润，表明肠I/R可导致严重肺损伤。同时实验还发现小肠缺血后血压并没有明显下降，但再灌后血压下降明显，表明血液再灌注后损伤重于缺血性损伤。MPO是中性粒细胞特有的还原酶，其在组织中的活性升高一方面表明组织中的多形核白细胞（PMN）数量增多，另一方面预示可能引起组织的损伤。因此，组织中MPO活性的高低可以反映PMN在组织中的扣押程度，并提示存在PMN的活化。而大量中性粒细胞的聚集和激活，不仅加重无复流（灶燥原则藻枣造燥憎）现象，更重要的是释放大量氧自由基、蛋白酶等毒性物质，进一步加重组织损伤5。本研究结果显示，模型组大鼠血浆和肺组织酝孕韵活性和酝阅粤含量增加，而SOD活性显著降低，同时外周血LAA增加，而有研究认为LAA的增加与肺内白细胞的黏附/聚集呈正相关，比外周血白细胞数量更能代表肺脏炎症反应状况6，提示中性粒细胞在肺组织中的聚集、活化，氧自由基的脂质过氧化是肠I/R肺损伤的重要病理学机制。参麦注射液主要成分是人参和麦冬，具有益气固脱、养阴生津、补心及复脉作用。人参可保护毛细血管内皮细胞，促进内皮细胞释放血管舒张因子一氧化氮（NO），扩张血管，增加血流，对缺血缺氧时代谢活动和微循环有保护作用。中药麦冬含多种抗氧化物质，如黄酮、VA、Cu、Zn、Fe等（悦怎、在灶、云藻是构成杂韵阅的主要成份）有不同程度清除自由基作用。以往研究曾证实参麦注射液对肢体缺血再灌注损伤具有保护作用7。本研究显示在缺血前、再灌前、再灌后30min给予参麦注射液后，血浆和肺组织MPO活性和MDA含量降低，血浆和肺组织SOD活性升高，同时肺组织W/D比值、肺系数及LAA明显降低，肺组织病理损害亦减轻，提示参麦注射液对肠I/R引起的肺损伤有保护作用，其作用机制可能是通过保护肠道屏障，抑制中性粒细胞的聚集与活化，抑制氧自由基生成，防止脂质过氧化而实现的。参考文献1GaoC,SunX,ZhangG,etal.Hyperoxygenatedsolutionprecondi鄄tioningattenuateslunginjuryinducedbyintestinalischemiareper鄄fusioninrabbitsJ.JSurgRes,2008,146渊1冤:24-31.2XuDZ,ZaetsSB,ChenR,etal.EliminationofC5aRpreventsin鄄testinalmucosaldamageandattenuatesneutrophilinfiltrationinlo鄄calandremoteorgansJ.Shock,2009,31渊5冤:493-499.表33组血浆SOD、MPO活性及MDA含量的比较（n=8，曾依泽）组别对照组（员）模型组（圆）治疗组（猿）云择（员）颐（圆）（员）颐（猿）（圆）颐（猿）杂韵阅（伊员园猿哉/蕴）275.72依9.15177.37依10.84226.82依15.53131.196*22.91*11.39*11.52*M阅粤（滋皂燥造/蕴）1.14依0.584.61依1.182.02依0.4740.238*12.18*3.11*9.09*酝孕韵（伊员园猿哉/蕴）0.122依0.0150.327依0.0400.230依0.03191.081*18.34*9.66*8.68*表43组肺组织SOD、MPO活性及MDA含量的比较（n=8，曾依泽）组别对照组（员）模型组（圆）治疗组（猿）云择（员）颐（圆）（员）颐（猿）（圆）颐（猿）SOD(伊103U/g)55.75依6.2422.47依2.4437.64依2.93124.705*22.31*12.14*10.17*MDA(mmol/g)1.65依0.086.26依1.443.15依0.6553.326*14.32*4.66*9.66*MPO(U/g，湿片)0.373依0.0392.961依0.3141.948依0.249250.318*31.49*19.17*12.33*988天津医药圆园10年11月第38卷第11期3QuC,GuoS,GuoH,etal.IncreasedserumendotoxinandelevatedCD14andIL-1betaexpressioninaratmodelofcerebrogenicmulti鄄pleorgandysfunctionsyndromeJ.MedChem,2009,5渊5冤:462-467.4王蕾,席丰,李兰梅,等.大鼠失血性休克肠黏膜形态学变化及与肠道菌移位的关系J.天津医药,2009,37（9）:765-767.5王锋,王佳祥,崔识远,等.腺苷对肺再灌注损伤时中性粒细胞CD11b/CD18的影响J.天津医药,2005,33（5）:287-289.6FriedM,Ben-HurN,BerlinerS,etal.Thestateofleucocyteadhe鄄siveness/aggregation渊LAA冤intheperipheralbloodofburnedmice:anearlyandsensitiveinflammatoryindicatorandamarkerofpul鄄monaryleukostasisJ.Burns,1991,17渊6冤:458-461.7王艳蕾,景友玲,赵景霞,等.参麦注射液对肢体缺血/再灌注时肺脂质过氧化损伤的防护作用J.中国应用生理学杂志,2006,22（1）:13-15.（2010-02-27收稿2010-06-13修回）（本文编辑陆荣展）白塞病是一种原因不明的以血管炎为病理基础的慢性、进行性、复发性及多系统损害的疾病，以口腔、外阴溃疡、眼炎及皮肤损害为临床特征。目前该病没有很好的标准治疗方案。笔者应用沙利度胺、泼尼松联合小剂量环磷酰胺治疗白塞病6例，病情控制满意，报告如下。1临床资料1.1一般资料选择圆园园园年怨月圆园园怨年员月我院风湿门诊确诊白塞病患者远例，均符合白塞病员怨愿怨年国际诊断标准；均为女性，年龄猿园耀源缘岁，均有低热，体温猿苑援园益耀猿愿援缘益；均有复发性口腔溃疡、双小腿结节性红斑，针刺反应阳性，源例有复发性外阴溃疡。员例患者曾出现左眼睑周围红斑。员例出现双侧股骨头坏死，曾在某医院治疗并自行停激素怨个月后出现双侧股骨头坏死，考虑为白塞病血管炎所致。1.2治疗方法6例患者给予沙利度胺25mg每日2次、泼尼松30mg每日1次,每3周静脉滴注环磷酰胺0.4g，同时辅以补钙药物以防止骨质疏松等不良反应。治疗过程中复查血常规、血沉（ESR）、肝肾功能，每3周复查1次。ESR正常后泼尼松渐减量至10mg每日1次维持，以后根据病情可4周甚至8周或12周应用1次环磷酰胺，沙利度胺剂量可减至25mg每日1次。定期门诊随访至少1年。1.3结果6例患者发热1耀2d消失，口腔溃疡4耀6d消失，结节性红斑3耀7d消失，外阴溃疡5耀7d消失，ESR3耀6周恢复正常，其中1例双侧股骨头坏死患者双髋疼痛3个月后明显减轻，后续维持治疗中，病情一直控制良好,无复发。2讨论白塞病目前尚无公认的有效根治办法，多种药物均有效，但停药后大多复发。治疗的目的在于