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文档简介

学校代码: 10114分 类 号:硕 士 学 位 论 文Cr i g l e r - Na j j a r 综合 征 综合 征 综合 征 综合 征 型 型 型 型 U G T 1 A 1 基因 基因 基因 基因突变 分析 突变 分析 突变 分析 突变 分析研 究 生 : 潘 丽 丽指 导 教 师 : 阴 怀 清 教 授专 业 名 称 : 儿 科 学研 究 方 向 : 小 儿 遗 传 学学 位 类 型 : 科 学 学 位所 在 学 院 : 第 一 临 床 医 学 院中国 山西二零 一三年三 月十五日分类号: 单位代码: 10114密 级 : 学 号 : 201010197Cr i g l e r - Na j j a r 综合 征 综合 征 综合 征 综合 征 型 型 型 型 U G T 1 A 1 基因 突变 分析 基因 突变 分析 基因 突变 分析 基因 突变 分析研 究 生 : 潘丽 丽指 导 教 师 : 阴怀 清 教授申 请 学 位 门 类 级 别 : 医学 硕士专 业 名 称 : 儿科 学研 究 方 向 : 小儿 遗传学所 在 学 院 : 第一 临床医 学院二 O 一三 年三 月 十五 日学位论文独创性声明本人声明 ,所呈交的学位论 文系在导师指导 下本文独立完成的 研究成果。文中任何引用他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本文如违反上述声明,愿意承担以下责任和后果:1 、 交回学校授予的学位证书;2 、 学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报;3 、本文按照学校规定的方式,对因不当取得学位给学校造成的名誉损害 ,进行公开道歉。4 、本人负责因论文成果不实产生的法律纠纷。论文作者签名 : 日期 : 年 月 日学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保留 、 使用学位论文的规定 , 同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版 , 允许论文被查阅和借阅 ;本人授 权山西医科 大学可以将 本学位论文 的全部或部 分内容编入 有关数据库 进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时 ,署名单位仍然为山西医科大学。( 保密论文在解密后应遵守此规定 )论文作者签名 : 日期 : 年 月 日指导教师签名 : 日期 : 年 月 日(本声明的版权归山西医科大学所有 , 未经许可 , 任何单位及任何个人不得擅自使用)目录中 文 摘 要 1英 文 摘 要 4缩 略 词 表 7正 文 8前言 8实 验对 象、 试剂 及仪 器 11试验方法 14实 验结果 1 8讨 论 22小 结 27参 考文献 28综 述 3 1正 文 31参 考文献 37个人 简历 41致 谢 42山西医科大学硕士学位论文1C r i g l e r - N a j j a r 综 合 征综 合 征综 合 征综 合 征 型 型 型 型 U G T 1 A 1 基 因 突 变 分 析基 因 突 变 分 析基 因 突 变 分 析基 因 突 变 分 析中文 摘要 中文 摘要 中文 摘要 中文 摘要背景 背景 背景 背景C r i gle r - N a j j a r 综合 征 ( C N S ) 为罕 见的胆红 素代谢障 碍性疾病 ,分为 和 两型 , 由尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 1A1 基因 ( UGT 1A1)突变使其酶活性完全或部分缺陷所致。 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 ( U D P G T ) 是一组主要分布于 肝细 胞 的 同 工 酶 家 族 , 其 中 UGT 1A1 是 唯 一 作 用 于 胆 红 素 代 谢 的 同 工 酶 13。UGT1A1 基因突变 可引起酶结构及功 能异常,使胆红 素代谢不足而导致 高非结合胆红素血症。与 UGT1A1 突变有关的遗传性非溶血性高非结合胆红素血症 有3 种 4,根据临床严重程 度分为 C r i gle r - N a j j a r 综合征 型 ( C N - ) :血清胆红素值波动于 340 850 m ol / L 之间 , 常死于胆红素脑病 ; C r i gle r - N a j j a r 综合征 型( C N - ) : 胆红素血症较 型轻 , 胆红素波动于 85 340 m o l / L 之间 , 新生儿期之后, 胆红素血症 很少危害到 患儿健康 5 ; G i l b e r t 综合征 ( G S ) :胆红 素血症最轻,胆红素介于正常值 85 m ol/ L 之间,一般不会威胁到患儿健康。 C N - 为UGT1A1 酶部分缺 陷所致,典型症状 为高非胆红素血 症,血清总胆红素 浓度波动于 85 340 m ol / L 之间,但无溶血和 肝脏疾患,苯巴比妥治疗有效,及 时正规治疗一 般无胆红素脑病 发生 2,但是当 没有早期发现此 病和缺乏强化治疗 ,将不仅仅对新生儿期患者对成人期患者都是致命的。胆红素对神经细胞敏感,毒性强,特别是对新生儿脑组织尤为敏感,导致胆红素脑病发生,且青春期和成人期也可发生。 C N S 发病率为百万分之一,常染色体隐性遗传报道较多 , 常染色体显性遗传也有报道,且外显率不完全,表现型有差异。分子遗传学诊断简易 、 快速 , 患者易于接受 , 且诊断 C N S 首选方法为基因突变分析 。 C N - 患者 UGT1A1 基因突变于第 1-5外显子编码区均可见,有纯合错义突变、复合杂合突变、 框移突变、无义 突变或是在错义突 变中 T A 插入启动 子区,其中以纯合错义突变及复合杂合突变多见 6-9 , 主要基因型之一为 G 71R和 Y 486D突变 ,山西医科大学硕士学位论文2以东亚地区报道最多,而这种突变在白种人及非洲人中罕见。目的 目的 目的 目的确定一例 C r i gle r - N a j j a r 综合征 型患儿的 UGT 1A1 基因突变 , 有助于此病的诊 断及 早期 治疗 提供 依据 ;初 步分析 C N - 基因 型和 表型 之间 的关 系, 为C N - 分子病 因学研究提 供数据,并 为 C N - 患者的 基因诊断和 遗传咨询提 供资料。方法 方法 方法 方法采集先证者及其家系成员和 50 名无血缘关系健康对照者外周血 , 采用经 典Mi l l e r 蛋白酶 K - 氯化钠高盐析法提取外周血白细胞基因组 D N A, 应用聚合酶链式反 应 ( P C R) 和 D N A 直接 测序技术 对先证者 进行 UGT 1A1 基因 突变位点 检测。参阅国内外已有研究及报道,初步分析 C N - 基因型和表型之间的关系。结果 结果 结果 结果1. 先证者 UGT1A1 基因检测出复合杂合突变 ( G 71R/ Y 486D) ;2. 先证者第 1 外显子检测出 211位 G A 杂合突变 , 导致所编码的第 71 位甘氨酸变为精氨酸 , ( G l y A r g,G71R) ,母亲及父亲均检出这一杂合突变;3. 先证者第 5 外显子检测出 1456位 T G 杂合突变 , 导致所编码的第 486位酪氨酸变为天门冬氨酸 ( T yr A s p,Y486D) , 父亲检测出这一杂合突变 , 母亲未检测出该突变;4. 本研究所检测出的基因变异均为热点突变。结论 结论 结论 结论山西医科大学硕士学位论文31.临床上高度怀疑 C r i gle r - N a j j a r 综合征时 , 使用分子遗传学方法快速明确诊断,可以为本患儿家庭提供遗传咨询及产前诊断;2.本研究先证者 UGT 1A1 突变存在 G 71R/ Y 486D突变 , 与亚洲报道的热点突变一致,说明 G 71R/ Y 486D也是这个家系的热点突变;3.G 71R/ Y 486D突变在 C N - 患者呈常染色体显性遗传 , 而外显率不完全 ,表现型有差异;4.对 UGT1A1 基因相同突变导致不同的临床表型,有待进一步研究。关键词 关键词 关键词 关键词 : C r i gle r - N a j j a r 综合征;尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶;基因突变山西医科大学硕士学位论文4Ab s t r a c tCo nt e x tC r i gle r - N a j j a r s y ndrom e i s a r a r e dis or der of bil i r ub i n m e t a boli s m w i t h t w odis t i nct f orm s : t ype a nd . U r i dine diphosphat e glucuronosylt r a nsf e r a s e 1A1 gene( UGT 1A1) m uta t i on i n i t s e n z ym a t i c a c t i vit y c om ple t e l y or i n par t c a u s e d by def e c t s .U r i d i ne 5 - diphosphat e - g l uc uronosylt r a nsf e r a s e ( U D P G T ) i s oenzym e f a m i l y i s ag r oup of m a i nly dis t r i bute d i n t he l i ver c e l l s , w hic h U G T 1A1 i s t he only r ole i nbil i r ubin i s ozym e . UGT 1A1 gene m uta t i ons w i l l c a use a bnor m a l e n z ym e s t r uct urea nd f unct i o n, m a ke bil i r ubin m e t a boli s m a n d l e a d t o h i g h unconjugat e dh yper bil i r ub i nem i a .T hre e t ypes o f n onhem olyt i c u nc onjugat e d hyper bil i r ub i nem i ah a ve bee n c l a s s i f i e d a c c ording t o t hei r c l i nic a l s e ver i t y: C r i gle r - N a j j a r s yndrom et ype 1(C N - I ) : s e ver e , s e r um bil i r ubin 340-850 m ol / L , known a s t his s y ndrom e i s i ndanger o f ker nic t e r us ; C r i gle r - N a j j a r s y ndrom e t ype2(C N - ) : i s l e s s s e ver e t hanC N - I , s e r um bil i r ubin 85-340 m ol / L , t he s e r um bil i r ubin c once ntr a t i o n of C N - i ss e l dom h a r m f ul a f t e r t he neonat a l per i od, a c c ura t e dia gnosi s of t he 2 s yndrom e s i sn e c e s s a r y f or a ppropri a t e ; a nd G i l b e r t s s yndrom e : m i l d ,s e r um bil i r ubin n or m a l t o85 m ol / L . C N - of U G T 1A1 e nzym e par t c a u s e d by def e c t s , t he t ypic a l s ym ptom sof high non hyper bil i r ub i nem i a , s e r um t o t a l bil i r ub i n c once ntr a t i o n f l uct uat i o nsbet w e e n 85340 m ol/ L , but no h e m o l ysi s a nd l i ver dis e a s e , t he t r e a t m e nt ofphe nobar bit a l - e f f e c t i ve, t i m e l y a n d r e gula r t r e a t m e nt g e ner a l l y bil i r ubin e nce phal o pa- t h y , no ker nic t e r us, n or m a l growt h a nd m e nta l devel opme nt.O b j e c t i veO O OT o i denti f y UGT 1A1 m uta t i on i n a c a s e w i t h C r i gle r - N a j j a r s yndrom e T y p e , t o c onf i r m t he dia gnosi s , a nd t o give e a r l y i nte r venti o n f or t hes e c a s e s . A ndpre l i m i na r y- a nal ysi s of t he r e l a t i onship bet w e e n genotype a nd phenotype of t heC N - pat i e nt s provide dat a , f or C N - m ole c ula r e t i olo gy s t udie s t o h e l p C N S山西医科大学硕士学位论文5pat i e nts w i t h genet i c dia gnosi s a n d g e ne t i c c ounse l i ng.Me t hodsU s i ng t he c l a s s i c Mi l l e r prote i na s e K - s odium c h l o r i d e s a l t i ng out , t o t a lg e nomi c D N A w a s e x t r a c t e d f r om t he per i pher a l blood l e ukocyt e s f r om t he probandh i s par e nts a nd 50 u nre l a t e d hea l t hy c ont r ols . P olym e r a s e c hai n r e a c t i on ( P C R ) a n ddir e c t D N A s e que nci ng w e r e use d t o det e c t UGT 1A1 m uta t i ons. R e f e r t o t he e xis t i ngdome s t i c a nd i nte r nat i o nal s t udie s a nd r e port s , t he r e l a t i onship bet w e e n t heC N - genotype a nd phenotype w i l l be pre l i m i na r y a nal yze d.Re s ul t1.A c om pound het e r ozygous m uta t i ons ( G 71R/ Y 486D) w e r e det e c t e d i n t heUGT1A1 g e ne i n proband;2.G A t r a nsi t i o n a t nucl e ot i de 211in e x on 1 w a s det e c t e d i n t he proband,w hic h l e d t o G l y A r g a t posi t i on 71(G 71R) a nd i t w a s a l s o det e c t e d i n his m othera nd f a t her ;3. T G t r a nsi t i o n a t n ucl e oti d e 1456i n e xon 5 w a s det e c t e d i n t he proband,w hic h l e d t o T yr A s p a t posi t i on 486(Y 486D) a nd i t w a s a l s o det e c t e d i n h i s f a t her ;4.This s t udy de

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