年产2万吨谷氨酸发酵工厂的初步设计

第一章 总论 一、 设计 项目： （ 1） 设计课题： 年产 2万吨谷氨酸发酵工厂的初步设计 （ 2） 厂址 ：内蒙古通辽市 （ 3） 重点 工段：糖化 （ 4） 重点设备：糖化罐 二、 设计范围： （ 1） 厂址选择及全厂概况介绍（地貌、资源、建设规模、人员）； （ 2） 产品的生产方案、生产方法、工艺流程及技术条件的制定； （ 3） 重点车间详细工艺设计、工艺论证、 设备选型及计算； （ 4） 全厂的物料衡算； （ 5） 全厂的水、电、热、冷、气的衡算； （ 6） 车间的布置和说明； （ 7） 重点设备的设计计算； （ 8） 对锅炉、电站、空压站等提出要求及选型； （ 9） 对生产和环境措施提出可行方案。 三、 要完成的设计图纸 ： （ 1） 全厂工艺流程图一张； （ 2） 重点 车间工艺流程图一张； （ 3） 重点车间设备布置立面图一张 ； （ 4） 重点车间设备布置平面图一张； （ 5） 重点设备装配图一张 。 四、 设计依据： （ 1） 批准的设计任务书 和 附件可行性报告，以及可靠的设计基础资料。 （ 2） 我国现行的有关设计和安装的设计规范和标准 （ 3） 广东轻工职业技术学院食品系下达的毕业设计任务书 五、 设计原则： （ 1） 设计工作要围绕现代化建设这个中心，为这个中心服务。首先要有加速社会主义四个现代化早日实现的明确指导思想，做到精心设计，投资省，技术新，质量好，收效快，收回期短，使设计工作符合社会主义经济建设的总原则。 （ 2） 要学会查阅文献，收集设计必 要的技术基础资料，要善于从实际出发去分析研究问题，加强技术经济的分析工作。 （ 3） 要解放思想，积极采用技术，力求设计上具有现实性和先进性，在经济上具有合理性，尽可能做到能提高生产率，实现机械化和自动化，同时兼顾社会和环境的效益。 （ 4） 设计必须结合实际，因地制宜，体现设计的通用性和独特性相结合，工厂生产规模、产品品种的确定，要适应国民经济的需求，要考虑资金的来源，建厂的地点、时间、三废综合利用等条件，并适当留有余地。 - 1 - （ 5） 要注意到周围环境的清洁卫生，又要注意到工厂内车间之间的卫生、无菌、防火等条件的相互影响。要贯彻国家食品 卫生法有关规定，充分体现卫生、优美、流畅，并能让参观者放心的原则。 （ 6） 设计过程中必须加强计划性，各阶段工作都要明确的进度，使毕业设计工作能如期完成，通过毕业设计提高自身的分析解决的能力。 六、 厂址的选择要求： （ 1） 符合国家方针政策，厂址要求满足生产需要，尽量不占用良田，节约用地，又有发展余地。 （ 2） 工厂周围应清洁卫生，厂区应居民下风侧，河流上游，远离有毒工厂和有机废料、化学废料堆放地区及感染中心地点。 （ 3） 在厂址范围内不应有地下矿藏、流沙、淤泥和古墓。一般要求厂址的相对标高应该在最高洪水位的 时还应该注意当地 的气象资料和一些地震等自然灾害。 （ 4） 所选厂址应尽量接近原料产地，交通方便。保证异地原料的供应和减少成本。 必须有充足的电源和水源，满足生产和生活的用电用水的要求。如厂址远离热电源，则应自建锅炉房为最好，但要掌握燃料的来源，燃料的发热值及数量，以求降低气耗和燃耗。 七、 建厂的规模和产品方案： （ 1） 建厂规模：年产 2万吨，生产天数 330天， 3班连续生产 （ 2） 生产方案：以淀粉为主要原料； 产品为 80的谷氨酸； 质量指标及技术指标； 糖化率 109% 提取率 95% 糖酸转化率 60% 发酵周期 40h 糖化罐糖化周期 30h 产品含量 80% 八、 公用工程： （ 1） 供热：由电热厂供给蒸汽，自备锅炉 （ 2） 供电：由电厂供给，自备发电机 （ 3） 供水：由本厂附近水源和水厂共同供给 （ 4） 压缩空气和制冷：由本厂工务（动力）车间制备（空气压缩机和制冷设备） 九、 环保处理： （ 1） 废气的处理 烟尘排放主要通过加高烟囱高度和采用静电或喷淋碱液除尘器等干式机械除尘。 生产中使用的和工艺流程中生产的 用液体石蜡与空气隔离等措施防止其溢出，对于泄露的少量废水通过机械排气和风筒高空排气等方式，做到不超标。 （ 2） 低浓度废水废液的处理 1）物理法：利用离心机、滤池、筛网等设备分离废液中的悬浮的物质，一般在废液预处理时采用，有时也可作为处理的主体。 2）化学法：主要通过添加化学物质使废液中的污染物质转化为无害物质， - 2 - 3）生物法：是我国普遍采用处理废液的方法，主要是利用微生物的生理生化作用，使废液中溶解性和胶体态的有机污染物质转化为简单稳定的物质， 将有害物质转化为无害物质。 随着社会的发展环保越来越重要，一个企业的生存与环保直接挂钩。所以我们现在设计工厂时一定要重点考虑。 十、 劳动保护 发酵工段要佩戴 耳塞 、安全帽；提取要佩戴防护眼镜和 耳塞 ；糖化车间要有防暑降温的设备和空调室以及防尘口罩；倒粉处要有防压皮鞋和防尘口罩；压力设备要注意定期检查，规范操作。对于事故隐患和严重职业危害应当建档查备，发放隐患通知，并跟踪督促企业整改。发动职工群众对事故隐患进行举报，设立举报箱，公布举报电话，为广大职工举报安全健康重大隐患提供便利。 十 一 、 工作制度及车间定员 根据谷氨酸发酵的特点，一般按照 2 3 个班次 /天来安排工人上班，一般糖化、发酵、提取都是安排 3个班 /天，即每人每天上 8小时，实行 4班 3倒制。包装车间可以视实际情况安排 1 2 个班 /天；机修车间基本安排日班，中夜班各安排 1 2名；电房要三班安排人员上班；行政人员安排全日班。 十 二 、生产方法 发酵采用中初糖流加高浓度糖液的生物素“超亚适量”工艺，发酵液采用带菌体真空浓缩，提取采用连续浓缩等电点工艺、，采用双酶法并糖化采用连续喷射液化器形式。 十 三 、能源循环考虑 液化降温和糖化终料升温的热量互 换；蒸发器水用于调粉浆；闪蒸罐排汽料用于清糖或发酵培养基料加热；发酵培养基灭菌生熟料热量互换；提取分离母液用于发酵罐出炉降温；发酵空消排水用于蒸发器入料升温或配料等；发酵过程取样回放于连消培养基。 - 3 - 第二章 工艺设计及工艺论证 一、谷氨酸生产方法选择及论证 谷氨酸的制造方法有发酵、水解和合成法，从生产设备运作及产品的安全和清洁生产的合理性比较来看，采用发酵法最优越。首先原料选择来源广阔、工艺比较 稳定 、设备腐蚀性低、容易实行工业化、综合效益好。其次，提取工艺本文选择连续浓缩三级等电点工艺，而未采用 传统的离子交换工艺。因为离子交换工艺不但要消耗大量的酸碱、更重要的是会产生大量的废水，环保治理非常困难，难于实现清洁生产。淀粉糖化采用目前比较先进的连续喷射液化器工艺，淀粉酶和糖化酶都应用进口诺维信酶，确保糖液质量。 - 4 - 二、谷氨酸总生产工艺流程图为： 淀粉 闪蒸罐 糖化罐 调浆罐 维持罐 糖化 喷射液化 灭酶 灭酶 高温维持 降温、调 降温、调 脱色过滤 葡萄糖液 配料罐 定容罐 定容罐 配料罐 液氨 二级种子罐 蒸汽混合器 实消 维持罐 降温 换热器 斜面 一级种子 培养 发酵罐 调酸 起晶 晶种 停酸育晶 上离子交换柱 缓慢调酸 盐酸或硫酸 水洗及疏松树脂 等电点 热水预热 搅拌育晶 碱液 洗脱 再生 母液 离心分离 后流分 高流分 前流分 湿谷氨酸 用酸调 上离子交换柱 图示：谷氨酸生产工艺流程示意图 活性剂 助滤剂 工艺循环水 淀粉酶 硫酸 氯化钙 消泡剂 高浓度糖液 液氨 消泡剂 水 无机盐 糖蜜 玉米浆 纯维生素 消泡剂 水 无机盐 糖蜜 玉米浆 纯维生素 硫酸 硫酸 - 5 - 三、生产过程的总物料衡算 物料衡算是根据质量守恒定律而建立起来的。物料衡算是进入系统的全部物料衡算重量等于离开该系统的全部物料重量，即 F= D W 式中： F进入系统的物料重量（ D离开系统物料重量（ W损失的物料重量（ 见 和不 可 预 见（一） 生产能力 生产规模： 2 万吨 /年（产品含量以 80%计） 生产天数： 330 天 生产能力： 20000330=d 1、 淀粉水解为葡萄糖的总反应式： （ n + C 662 180 淀粉水解为葡萄糖理论糖化率为： 180 162 100% = 111% 2、 葡萄糖转化成 谷氨酸的的总反应式： 3/2 C 5180 147 葡萄糖转化成谷氨酸的理论转化率为： 147 180 100%= 3、 生产过程的总物料衡算 物料衡算是根据质量守恒定律而建立起来的。物料衡算是进入系统的全部物料衡算重量等于离开该系统的全部物料重量，即 F= D W 式中： F： 进入系统的物料重量（ D： 离开系统物料重量（ W： 损失的物料重量（ - 6 - （二） 总物料平衡计算 各工序收率指标 淀粉含量 85 糖酸转化率 糖化收率 109 清糖液含量 300g/L 产酸率 110g/L 发酵液的相对密度 取收率 95 分离 后 氨酸含量 80 理论糖化率 111% 理论糖酸转化率 1、 一份纯淀粉（ 1000论上可以制得 100%谷氨酸量： 1000 111%（理论糖化率） 理论糖转化率） =、一份纯淀粉实际上可以制得 100谷氨酸量： 1000 109%（糖化率 ） (糖酸转化率 ) 95% =、 一份工业淀粉（含量 85）实际上可以制得 100谷氨酸量： 85%=、 淀粉单耗（计算生产 1t 谷氨酸量需要的淀粉量） 生产 1t 纯 谷氨 酸实际消耗工业淀粉量 1t 100% 谷氨酸 1t 工业 淀粉实际产 100%谷氨酸量 1000 生产 1t 谷氨 酸消耗纯淀粉量 1t 100% 谷氨酸 1t 纯 淀粉实际产 100%谷氨酸量 1000 1氨酸理论消耗工业淀粉 1t 100%谷氨酸 1t 纯淀粉理论产 100%谷氨酸 量 1000 1氨酸理论消耗纯淀粉 1t 100%谷氨酸 淀粉含量 85%=、 总收率（淀粉到谷氨酸的总率） 1t 纯淀粉实际产 100谷氨酸量 1t 纯淀粉理论上产 100%谷氨酸量： 100% = - 7 - 6、生产过程损失率 淀粉的利用率： 1t 谷氨酸理论上消耗工业淀粉量 1t 谷氨酸实际消耗工业淀粉量 00%=淀粉的损失率： 100%=7、 原料及中间品计算（按每天量计算） 日产谷氨酸 纯 产品量： 20000330=算成含量为 80的谷氨酸量： 0%=t/d 发酵车间日产谷氨酸量： 5%=投 工业淀粉（含量 85%）量： 5%60%109%85%98%=交给提取的发酵液体积： 06110=05L 日交给提取的发酵液的量： 0509000发酵液的量： 609000（ =天需 纯糖 量： 5%60%=加纯糖量： 0%=加 450g/L 糖液量： 03450耗氨量： 50=15950耗消泡剂量： 化液产量（ 300g/L）： 1000 85% 109% 300 、 提取谷氨酸量（按每天量计算）： 100%谷氨酸量： 95%=0%谷氨酸量： 85%=、 母液中残留谷氨酸量：（ 63800 离母液数量： 三 )总物料衡算结果以表格形式表示 项目 数量 工业淀粉 t 糖液 300g/L 氨酸 80 离母液量 - 8 - 各工序相关参数指标： 1、 葡萄糖液浓度为 300 g/L，其密度为 萄糖液浓度为 450 g/L，其密度为 粉酶用量为 糖化酶用量为 氯化钙用量为 硫酸用量为 助滤剂和活性炭用量为 滤渣含水 70%。 2、 初始发酵液的纯糖量占 60%， 补加的纯糖量占 40%， 配制的种子培养基密度为 种子液密度为 发酵的接种量为 10%， 配制的发酵培养基密度为 酵液的密度为 、 耗氨量： 1吨谷氨酸耗氨量为 250 其中：种子培养阶段的耗氨量为 25 酵阶段的耗氨量为 225 4、 消泡剂量： 1吨谷氨酸加消泡剂量为 6 其中：种子培养阶段用量为 酵阶段的耗氨量为 5、 种子培养基 初糖浓度为 50 g/L， 糖蜜用量为 15 g/L， 玉米浆用量为 25 g/L， 硫酸镁用量为 g/L， 磷酸二氢钾用量为 1.5 g/L， 空气带走水分量占种子液的 取样、残留等损失量占种子液的 6、 发酵基础培养基 糖蜜用量为 2 g/L， 玉米浆用量为 5 g/L， 硫酸镁用量为 1.4 g/L， 氯化钾用量为 2 g/L， 磷酸用量为 1.2 g/L 蒸汽冷凝水量为培养基的 12% 空气带走水分量占发酵液的 取样、残留等损失量占发酵液的 - 9 - 第三章 糖化车间 1、 糖化工艺的选择 一般选择双酶法，双酶法糖化工艺，是以作用专一的（耐高温 淀粉酶和糖化酶作为催化剂，反应条件温和，复合分解反应较少，因此采用双酶法生产葡萄糖，提高了淀粉或大米等原料的转化率及糖液浓度，改善了糖液质量，是目前最为理想的制糖方法。 酸法和酶法优缺点： 特点方法 优点 缺点 酶法 反应条件温和，不需耐高温或耐高压及耐腐朽的设备；副反应少，水解糖液纯度高，淀粉转化率高；制得糖液质量好，有利于糖液的充分利用。 反应时间长，设备要求较高，且酶是蛋白质，易引起糖液过滤困难。 酸法 适合原料广泛，得到糖化液过滤性好。 发生葡萄糖复分解反应，生成的有色物及复合糖类，降低了淀粉的转化率及糖液质量。 对设备要求高，对环境影响大 2、工艺流程 淀粉 灭酶 过滤 脱色 调浆罐 降温、调 清糖液 喷射液化 糖化罐 去发酵 高温维持 糖化 闪蒸罐 灭酶 维持罐 降温、调 活性剂 助滤剂 工艺循环水 淀粉酶 硫酸 氯化钙 糖化酶 - 10 - 3、 设备流程 （液化部分） 1、调浆罐 2、泵 3、喷射器 4、维持罐 5、闪蒸罐 6、泵 7、卧式隔板层流管 4、工艺参数 a、 调浆水使用工艺循环水： 50 b、 调浆： 30c、液化： 度： 105c，高温维持时间： 3 7化维持罐时间60d、灭液化酶： 115，从 到 4.4 e、糖化：糖化酶量： 糖化 度： 58间： 16f、灭糖化酶：温度： 850c 左右，时间： 5g、脱色： 度： 55间： h 工艺流程简述：在配料罐内，用工艺循环水（温度 50 55 ）把淀粉调到 12 18 ，并加入 氯化钙，作为淀粉酶的保护剂和激活剂，加入耐高温 液搅拌均匀后用泵把粉浆打入 液化喷射器，在喷射器中粉浆和蒸汽瞬间接触，温度自动控制 105，从喷射器中出来的液料，经过 3 5高温维持后进入闪蒸罐，温度降到95 100 ，然后进入层流罐保温 60 120达到 12 18后，与糖化终了料液进行热交换进入糖化罐温度降低至 58 62 ，并用酸调节 入糖化酶保温 30h，用无水酒精检测无糊精存在时，将料液 至 时将料液加热或与液化料进行热交换至 80 ，然后降温至淀 粉 + 水 + 酶12347蒸汽二次蒸汽56去糖化 +硫酸 +氯化钙 - 11 - 60 ，添加 滤剂，视料液情况添加活性炭，搅拌 1 小时开始过滤 。 结果汇总 如下 表 液 化 工 艺 调浆浓度 30耐高温淀粉酶量 度 1051100C 时间 60酶温度 1151200C 灭酶时间 510化 218% 糖 化 工 艺 糖化酶量 度 58620C 时间 25h 灭酶温度 850C 左右 时间 510化 6%98% 脱 色 脱色 色时间 h 脱色温度 55600C - 12 - 糖化车间物料衡算（以 1000业淀粉计算） 本车间物料平衡图为： 淀 粉水液 化 液液 化 酶 氯 化 钙 硫 酸糖 化 液 （ 糖 化 酶 烧 碱 ）蒸 汽清 糖 液 糖 滤 渣1、 淀粉及加水量：淀粉 ： 水 =1： 0001000（ 1+=2800水量为 1000 800、粉浆浓度： 1000 85% 2800 100%=3、糖化液产量（ 300g/L）： 1000 85%（工业淀粉） 109%（糖化率） 300 、液化酶量： 2800 7、氯化钙量： 2800 7、硫酸用量： 2800 7、糖化酶量： 2800 7、添加活性炭和珍珠岩助滤剂量 ： =、滤渣产量（含水按照 70计算）： （ 1 =0、生产过程中进入系统的蒸汽： 1、洗水量： - 13 - 衡算结果用表格表示： 进入系统量 离开系统量 项目 物料比例 产 量 目 物料比例 产 量 业淀粉 1000 117100 糖液 料水 1800 210780 滤渣 化酶 7 硫酸用量 7 氯化钙量 7 糖化酶 7 珍珠岩量 洗水量 蒸汽量 累计 计 - 14 - 糖化车间热量衡算 （一） 喷射液化器加热耗 蒸 汽量 加热蒸汽消耗量 （ D）可 按 下 式 计算 ： D= （ 式中 ： 淀粉浆量（ kg/h) ： 淀粉浆比热容 K) 浆料初温（ 50+273=323K） 液化温度（ 105+273=378K） I： 加热蒸汽焓， 2738KJ/压 ) ： 加热蒸汽结水的焓，在 37842KJ/1、 淀粉浆量 G（ 根据物料衡算，日投工业淀粉 d， 连续液化 ）： 24 2800 = h, 2、 粉浆干物质浓度： 24 10008 5% 00%= 3、 粉浆比热 C= 100 + C 水 （ 100 100 式中 淀粉质比热容，取 K) X： 粉浆干物质含量， C 水 ： 水的 比热容 K) 得 : 粉浆比热 C= 100+ (100 100= K) 4、 每小时蒸汽用量：由公式： D= （） 得 D=3 （ 105 （ 2738 - 442） = kg/h 5、 灭酶时将液化液由 105加热至 115，在 115时，为 485KJ/ 由公式 D= （）， 得： D 灭 = 3. 62 （ 115 （ 2738=h 要求在 10 液化液由 105加热至 115，则蒸汽高峰量为： 60 10=kg/h 6、以上两项合计，平均量为： h 高峰用量： h 每日用量： 24=h （糖化液灭酶通过板式换热器在液化液降温时实现，无需蒸汽） - 15 - 7、 实际工业化生产中可以充分考虑 循环经济而用不同料液的热交换达到不用蒸汽的目的。 交换器流程设计为： 液 化 料糖 化 终 了 液降 温 后液 化 料灭 酶 后糖 化 料1 # 2 #降 温 后糖 化 料糖 化 罐中 和 脱色 罐冷 却 水 进冷 却水 出冷 却 塔图中 1#、 2#为螺旋式热交换器 上图中 的工艺 可以实现 如下结果 ：经过闪蒸后的液化料液温度为 95 100 ，糖化终了料液温度为 55 60 。一方面液化料进入糖化罐需要降温（从 95 100降到 55 60 ）。另一方面糖化 终了料液需要升温灭酶（温度从 55 60 升到 80 85 ）。所以可以用一台交换器实现热的交换，而不需要外加能源。 （二）水平衡计算 1、配料用水量：日投淀粉 水比 1:、液化液冷却用水（使用二次水） 液化液灭酶后，温度达 115，用糖化液降至 85（糖化液灭酶），然后用水降温，有85降至 60。冷却水进水温度为 20，出水温度为 58，需冷却水量： W=（ （ 85 （ 58 =h=d 3、 糖化工序热量衡算 日产 300g/L 糖液 0h，其中糖化时间为 25h，糖化罐 100装填系数为 75%，需糖化罐： 100 75%）（ 30 24） = 7台 使用板式换热器，使糖化液（经灭酶后）由 85降至 60。使用二次水，冷却水进水温度为 20，出水温度为 50，平均用水量： （ 85（ 50 =h 要求 2h 把 75 0，高峰用水量： - 16 - 75000 2=h 每日糖化罐同时运转： 25 30= 每日冷却水用量： 2 d=d - 17 - 第五章 发酵车间 1、 工艺流程： 葡萄糖液 配料罐 定容罐 定容罐 配料罐 液氨 二级种子罐 蒸汽混合器 实消 维持罐 降温 换热器 斜面 一级种子 培养 发酵罐 2. 工艺简述 1）糖化车间制备的糖化液和其他营养成分 ：工业淀粉、 生物素等按要求配制成培养基，定容。经连消系统灭菌，降温至接种温度后进行接种。 2）接种：菌种先经过一级种子扩大培养，再经过二级种子扩大培养后菌种量达到要求后再进入发酵罐进行接种，发酵。 3）发酵时间为 32h，辅助时间为 8h，发酵过程中通过流加液氨控制 过冷却系统（冷却 塔和冷机）控制温度，流加糖液控制残糖量，通过无菌空气控制通气量 。 4）发酵结束后，经泵进入发酵液贮罐，供提取车间用。残糖量控制在 。 3. 空气制备：空气进入压缩机压缩，温度升高，压缩机的润滑油进入压缩空气中形成油雾，需进行冷却，大部分的水，油结成颗粒较大，浓度较高的雾粒，冷却后又会析出大量的冷却水，先用棉花过滤除油雾和冷凝水， 再 用膜过滤器进行除菌，提高空气的无菌程度，制备的压缩空气供发酵和培养种子， 分别进入发酵罐和种子罐。 一般采用以下流程制备无菌空气： 1234567891 采用黄色短杆菌 于该菌株较其他菌株的性能粗放，并能在较高的温度下正常发酵， 全国 各厂普遍用于生产，是目前生产上使用较广的一 种 优良菌株。 1） 形态： 消泡剂 高浓度糖液 液氨 消泡剂 水 无机盐 糖蜜 玉米浆 纯维生素 消泡剂 水 无机盐 糖蜜 玉米浆 纯维生素 - 18 - 株细胞典型的短，两端钝圆，大小为（ x（ 米，属革兰氏阳性菌，不形成芽孢而且不运动。 普通肉汁琼脂斜面：划线培养 24小时，呈中度生 长，菌苔线状隆起，没黄色，随培养时间而颜色加深，表面湿润光滑，有光泽，不透明，不产生色素扩散。 肉汁琼脂斜面：菌落圆形，黄色，表面光滑，边缘整齐。 温度： 26 37生长良好，发酵时能耐较高温度，发酵前期温度达 32 34，发酵后期达 36 40，产酸理想。 8，生长良好， 较弱， 或 1均可能生长。 对氧要求：好氧或兼性厌氧。 其他特征：脲酶活力强，需生物素作为生长因子但不需促进因子，对于氯化铵，硫酸铵，磷酸铵，尿素 均能利用，在 5%含 2%尿素的普通肉汁琼脂培养基上生长良好，淀粉可水解。过氧化氢酶属于阳性，可产生硫化氢和吲哚， 验呈阳性反应。脲酶反应呈强阳性，液氨浓度 能强烈利用醋酸产 率在 5%以上，对醋酸转化率为 50%以上。 c. 菌种选择、分纯，保存 （ 1）选菌： 通过诱变剂进行育种，筛选优良菌种。 （ 2）分离纯化： 分两步操作：第一步进行平板划线分离：第 2步挑选菌落，移接于试管斜面培养基上，分别用三角瓶进行摇瓶发酵试验（初筛，复筛），比较产酸，选择产酸高的菌 株供生产使用。 （ 3）保藏： 菌种移接于斜面后，于 31 下培养 2024h，待长满黑褐色孢子后，放在 24冰箱中保藏，此法可保藏 12 个月。如果要长期保藏则必须定期进行移种或采用沙土罐等载体吸附法进行菌种长期保藏。 扩培流程：斜面菌种 一级种子摇床培养 二级种子培养 发酵大罐 菌种室 发酵车间 1） 斜面菌种的培养： 斜面培养基必须有利于菌种生长 ,以多含有机氮而不含或少含糖为原则 。 斜面菌种要求绝对纯 ,不得混有任何杂菌和噬菌种 ,培养条件应有利于菌种繁殖 。 (1)斜面培养基组成 葡萄糖 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 琼脂 代和保藏斜面不加葡萄糖） (2)培养条件 谷氨酸斜面菌种一般在 3032 培养 18 仔细观察菌苔生长情况、菌苔颜色和边缘等特征，确认正常后存入冰箱备用。 2） 一级种子培养 ： 一级种子接着的目的在于大量繁殖活力强的菌体，培养基组成应以少含糖分、多含有机氮为主，培养条件从有利于菌体生长考虑。 (1)培养基组成 葡萄糖 尿素 硫酸镁 磷酸氢二钾 玉米浆 按质增减） 硫酸亚铁，硫酸锰各 2培养基成分可因菌种不同酌情增减） (2)培养条件 00 - 19 - 右、频率 100次 /233010h。 (3)一级种子质量要求 种龄 910h； 糖左右；无噬菌体污染；镜检要求菌体生长均匀、粗壮，排列整齐，革兰氏阳性反应。 (4)通常将每批培养好的一级种子液取样倒双层平板进行染菌检查，以便生产跟踪分析，为下批一级种子培养的预防染菌工作提供参考。 3） 二级种子培养 (1)培养基组成 玉米浆 水解糖 磷酸氢二钾 尿素 硫酸镁 二价铁离子 2mg/l (2)培养条件 接种量： 培养温度： 31330C 搅拌转速：搅拌转速 150r/风量为 m3/ 培养时间：培养时间长短根据生产中采用的培养工艺与培养基营养成分及浓度而定。采用流加液氨作为氮源的工艺，只要生物素的浓度和残留的葡萄 糖 浓度足够，可适当延长培养时间，以争取更大菌体浓度，有利于提高二级种子量，目前生产上通常在 1014小时。 培养 一般控制 始 培养过程中通过流加液氨来维持 时供给菌体生长所需的氮源，通常在培养基 残糖降低至 结束培养。 (3)二级种子的质量要求 种龄：视培养工艺而定，一般在 10 培养工艺而定 上，一般净增 残糖： ； 噬菌体检查：无； 镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐，革兰氏阳性反应。 1） 培养基： （ 1） 碳源：采用淀粉水解糖液作为碳源，根据发酵初糖要求配制成为适当葡萄糖含量的培养基。由于灭菌过程中蒸汽冷凝水和接种后成熟种子液的加入，会使培养基的各成分浓度降低，所以，在培养基配制时，应充分 使培养基在定容后的葡萄糖含量适当并能满足发酵初糖浓度的要求。根据流加糖液是高浓度的糖液，为了避免淀粉水浓缩出来的糖液不再特意灭菌，对发酵无影响，且可明显减少葡萄糖液的加热损失。 （ 2） 氮源：氮源是合成菌体蛋白质、核酸等含氮物质和合成谷氨酸氨基的来源。谷氨酸的碳氮比为 100：（ 1330）， 当碳氮比在 100： 11 以上才开始累积谷氨酸。碳氮比对谷氨酸发酵的影响很大，一般情况下，发酵工序生产 1t 谷氨酸耗用液氨量是 260300玉米浆 、 生物素和液氨是本设计的主要氮源 . （ 3） 无机盐 ： 磷酸盐：磷是某些蛋白 质和核酸的组成成分，参与一系列的代谢反应， 重要的能量传递者。微生物对于磷的需要量一般为 硫酸镁：镁是某些细菌和叶绿素的组成成分，它的离子状态是许多重要的酶的激活剂。 - 20 - 如果镁离子含量太少，就会影响基质的氧化。一般革兰氏阳性菌对 最低要求量是 25。 钾盐 ： 它是许多酶的激活剂。菌体生长需 K+约为 ，谷氨酸生成需 K+。 微量元素 ： 锰是某些酶的激活剂， 羧化反应必需酶。 （ 4） 生长因子 ： 凡是微生物生长 不可缺少的微量的有机物质，如氨基酸、嘌呤、嘧啶、 维生素等均称为生长因子。本设计采用纯生物素、玉米浆、糖蜜三者作为谷氨酸发酵用生物素，具体比列要视情况而调整。 为了保证连续灭菌时每批发酵液定容体积准确，将配料水与培养基料液分别单独进行灭菌再混合。 灭菌采用生熟料用交换器互换流程， 可以大大降低蒸汽和冷却水用量。具体料液循环见下： 定 容 罐维 持 罐1 交换 器2 交换 器蒸 汽冷 却 水 箱冷 却 水 塔去 发 酵 发酵罐发酵条件控制： 1）温度控制：在谷氨酸发酵前期是 长菌期阶段 ， 应满足菌体生长所需的最适温度 。 若长菌期温度偏高 ,菌体在短时间内生长可能会快 ,但容易衰老 ,表现为发酵前期短时间内耗糖快 ,且耗糖速度很快就会下降 ,发酵周期要延长 ,谷氨酸生成少 。 在发酵中期 ,即菌体转型阶段 ,应将温度提高到最适产酸温度 ， 即发酵前期温度控制在 3334 ，中后期控制在 3638。 2） 制：在正常情况下 ,为了保证足够的氮源 ,满足菌体生长和谷氨酸合成的需要 ,通常将发酵 故前期 8h 后 20过流加液氨进行调节发酵 设计提取谷氨酸采用等电点法 ,为了提取工序节 省酸的用量 ,放罐时 制在 3）通风与 在菌体生长期 ,希望糖的消耗最大限度的用于合成菌体 ,谷氨酸生成期 ,希望糖的消耗最大限度地用于合成谷氨酸 。 供氧必须满足菌体的需要量 。 一般根据净增 控制通风。发酵前期， 的快，耗糖越快，风量提得越高。发酵开始 34h，净增 发酵 67h，净增 次风；发酵 68增 后控制净增 右，保持最大风量十几小时，发酵 1820h， %时，第一次降风； 发酵 2223h， %以下，第 2 次降风； 发酵2526h， 到 1%以下时，第三次降风 ， 到发酵零小时通风量接近，至发酵结束。 4）流加糖的控制 ： 双酶法糖经浓缩后含糖 50%，总糖量为 4045%作为流加糖量。 种，流加液氨与 一次流加： 高峰后下跌至 流加量为 第二次流加： 高峰后下跌至 流加量为 - 21 - 发酵主期液氨流加：要求 制在 下，流加量视残糖量和 而定，约每 1%残糖流加 ， 后期流加每次不超过 5） 泡沫的控制 ： 发酵过程中，采用化学消泡为主，机械消泡为辅的消泡方法。化学消泡剂用 离子表面活性剂，消泡能力强，用量少毒性低且使用方便。使用时先用水进行勾兑，比例为 1： 3。 6）残糖的控制 ： 由于移种需要一定的时间，为了预防培养基营养缺乏导致菌体衰老，自溶，培养结束时应保证有一定浓度的残糖，通常，培养结束时的残糖控制在 1020g/L. 7）种龄与种量：种龄： 913h，过长，种子活力减低，代谢产物多。 种量：指培养好的种子液量占接入发酵培养基数量的百分比。取 10%为好。 1）污染菌的检查： 产菌球散开、菌丝变形、产酸不正常甚至不产酸或“倒酸”、而糖却大量消耗等。 2）防、治染菌措施：解决发酵工业的染菌问题，不言而喻，应以防为主。只有防得严才能消除或降低染菌因素。疏于防而重于治则必事倍而功半。 防