银蒿解热合剂的质量标准研究

银蒿解热合剂的质量标准研究摘要：目的对银蒿解热合剂的质量标准进行研究，并提高银蒿解热合剂的质量标准，增强该合剂的可控性。方法参考中国药典2010版一部、广东省中药材标准（第一册）及相关文献方法，对银蒿解热合剂中的岗梅，柴胡，绵马贯众，连翘，桑叶，金银花6味药进行薄层色谱鉴别研究，并作展开剂的选择和点样量的控制研究，同时对其进行不同温湿度等的方法学考察，以建立处方中岗梅，柴胡，绵马贯众，连翘，桑叶，金银花6味药的薄层鉴别方法，为质量标准再提高提供实验依据，进一步完善质量标准。结果银蒿解热合剂中的岗梅，金银花，连翘，桑叶，柴胡，绵马贯众和对照药材、对照品薄层色谱主斑点位置一致，且定性鉴别荧光点显色完整、分离情况良好、容易区别。结论所建立的方法简便、易行、专属性比较强，可作为银蒿解热合剂质量控制方法之一。关键词：银蒿解热合剂；TLC；薄层色谱鉴别；质量标准IStudyonthequalitystandardofyinhaojierehejiAbstract：ObjectiveToestablishaTLCidentificationmethodforyinzuojiereheji，sothattoenhanceitsquality，andtomeetthedemandsofmoderntraditionalChinesemedicineagentmarkt.MethodsRadixetCaulisIlicisAsprellae，ChineseThorowaxRoot，RhizomaDryopterisCrassirhizomatis，Forsythiasuspensa，MulberryLeafandhoneysucklewereidentifiedbyTLCinChinaPharmacopoeia，GuangdongtraditionalChinesemedicinestandard(volume1)orotherrelatedliteratureinformation.Andthechoiceofanagentandsomesampleamountcontrolresearch，atthesametimefordifferenttemperatureandhumidity，etc.toestablishreliablemethodsofTLCidentificationforyinhaojierehejiandprovidetheexperimentalbasisforitsquality.ResultsRadixetCaulisIlicisAsprellae，honeysuckle，forsythia，mulberryleaf，ChineseThorowaxRoot，RhizomaDryopterisCrassirhizomatisandcontrastmedicinalmaterials，referencesubstanceTLCspotspositionisconsistent，Lordandqualitativedifferentiatespotsroundness，separatingdegreegood，easytodistinguish.ConclusionThismethodwaseasy，sensitive，characteristic，anditcouldbeusedtocontrolthequalityofyinhaojiereheji.Keyword：yinhaojiereheji，TLC，identifiedbyTLC，qualitystandard2目录摘要III1前言32材料与仪器42.1实验材料42.2实验仪器43实验方法与结果53.1处方与工艺53.2薄层鉴别54检查324.1相对密度的检测324.2PH值的测定324.3最低装量测定335讨论34参考文献36综述37致谢4601前言银蒿解热合剂是由岗梅，柴胡，绵马贯众，连翘，桑叶，金银花，青蒿等十味中药在荆防败毒散的基础上结合岭南地区外感风热的临床表现特征加减而制成的复方制剂，是中山市中医院的一个常用的院内复方制剂，具有辛凉解表，清热，主治上呼吸道感染引起的咽喉肿痛，发热，鼻塞，咳嗽1。方中主药岗梅具有清热解毒，散瘀止痛，利咽消肿，生津止渴。用于咽喉肿痛，肺热咳嗽，感冒发热，跌打淤痛，热病津伤口渴2，同时岗梅含有生物碱，有抗炎、镇痛等作用。柴胡具有疏散退热，疏肝解郁，升举阳气的作用3，且柴胡含有柴胡皂苷可以抑制Na+、K+-ATP酶的活性，有抗过敏作用。绵马贯众的清热功效较强，止血，杀虫。用于温毒发斑，时疫感冒，崩漏下血，疮疡肿毒，风热头痛，虫积腹痛3。连翘具有清热解毒，消肿散结，疏散风热的作用3，而主要化学成分为木脂素类的连翘苷具有清热，解毒，散结排脓12。桑叶具清肺润燥，疏散风热，清肝明目之功效，含有黄酮类，生物碱以及桑叶多糖，其中据文献报道桑叶多糖具有不错的降血糖和抑制血脂升高的作用3。金银花疏散风热，清热解毒，用于风热感冒，喉痹，痈肿疔疮，丹毒，热毒血痢3。金银花主要含有黄酮类化合物木犀草素、绿原酸以及一些挥发油成分，其中绿原酸和异绿原酸是它的抗菌有效成分4，而黄酮类化合物可能是金银花抗流感病毒的主要物质基础11。该合剂组方合理，制备工艺比较成熟，具有辛凉解表，清热之功效，是治疗上呼吸道感染引起的咽喉肿痛，发热，鼻塞，咳嗽的良药。多年来在院内使用疗效确切、无不良反应，有很高的经济效益和良好的应用前景。由于原质量标准不高，只有三个薄层色谱鉴别，为提高该制剂质量标准，进一步保证该合剂临床用药的安全性和有效性，对处方中岗梅，柴胡，绵马贯众，连翘，桑叶，金银花6味药建立薄层色谱鉴别。在鉴别中药复方制剂，应该依据该制剂特点，设计简易、可行且具有专属性的方法，以达到控制其质量的目的。本课题在实验过程中，主要采用中国药典一部附录VIB中薄层色谱法、广东省中药材标准（第一册），以及分析和改进文献资料相同或相近中药材薄层色谱中提取方法及展开剂的选择和点样量的控制，从而选择最佳的方法，并根据最终选定的方法对其进行不同温湿度等的方法学考察，其方法简便易行，1层析分离明显，斑点清晰，阴性对照无干扰，重复性良好，专属性较强，可完善银蒿解热合剂的质量标准，从而更好的控制该合剂的的质量，为其临床疗效做出保证。22材料与仪器2.1实验材料银蒿解热合剂（中山市中医院制剂室提供，两批批号分别是：20140520、20141104；阴性对照样品（中山市中医院制剂室提供）；绿原酸对照品（批号：110753201314）；连翘苷对照品（批号：110821201213）、连翘对照药材（批号:120908200915）、金银花对照品（批号：120160201107）、柴胡对照药材（批号：120992201108）、桑叶对照药材（批号：121123201305）、绵马贯众对照药材（批号：121034200302）、岗梅对照药材（批号：1152200001），以上药品均购自中国药品生物制品检定所；乙酸乙酯，甲醇，甲苯，甲酸，氨水，乙酸丁酯，三氯甲烷，石油醚（3090）等均为分析纯。2.2实验仪器KQ5200E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；GoodSeeI型薄层色谱摄影仪（上海科哲生化科技有限公司）；JA1203型电子天平（上海天平仪器厂）；BS224S电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；JJ200型电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）；DK8D电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；CH1006超级恒温槽(上海衡平仪器仪表厂）；东方A型直热式电热恒温干燥箱（广州东方电热干燥设备厂）；800型离心机（上海手术器械厂）；HCDX231电动吸引器（上海二二八厂）；CRLB1500S灶头（电炉）（肇庆金雅了电器有限公司）；加强型玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂生产）；IXUS115HSCanon数码相机（佳能（中国）有限公司）33实验方法与结果3.1处方与工艺取金银花，连翘，柴胡，桑叶，绵马贯众，岗梅等十味中药，加水15倍量，在中药提取制备室进行提取，取得中药提取液灌装于100mL洁净无菌塑料瓶中，包装，检验，即得。3.2薄层鉴别3.2.1岗梅的薄层鉴别3.2.1.1三氯甲烷方法（1）提取方法供试品液的制备：取本品15mL，加30mL三氯甲烷，并作超声处理10min，滤过，滤液蒸干，加三氯甲烷1mL溶解，作为供试品溶液2。对照药材溶液的制备：另取岗梅对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。阴性对照品的制备：另取缺岗梅阴性样品同法制成阴性对照品。（2）色谱条件层析板：预制硅胶G薄层板、手铺硅胶G薄层板展开剂：苯-丙酮（9：1）显色与检视：展开后取出晾干，置于紫外光灯下（365nm）检视点样量：供试品溶液、阴性溶液各10L、对照药材溶液10L。3.2.1.2乙酸乙酯方法（1）提取方法供试品液的制备：取去银蒿解热合剂33mL加乙酸乙酯萃取2次，每次35mL，合并乙酸乙酯液,置水浴上浓缩至1mL5。对照药材溶液的制备：取岗梅对照药材1g，加水33mL溶解，加乙酸乙酯，余下同供试品液方法制备。阴性对照品的制备：取缺岗梅的阴性样品同法制得阴性对照品（中山中医院制4剂室提供）（2）色谱条件层析板预制、手铺硅胶G薄层板展开剂A：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:3:0.5)B：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（10:3:0.5）C：甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10:3:1)D：甲苯-乙醇-甲酸（10:3:0.5）显色与检视展开后晾干，将其放在装有氨水的展开缸中进行氨熏，待斑点显色后，置于日光下观察。点样量供试品溶液、阴性对照溶液，对照药材溶液各10L3.2.1.3结果(1)使用三氯甲烷提取的溶液进行薄层鉴别，结果如下：（见下图1）溶剂前沿123456（紫外(365nm)图）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.岗梅对照药材溶液56.缺岗梅阴性对照溶液图1原标准方法提取的薄层鉴别5（2）使用乙酸乙酯提取的溶液进行薄层鉴别，在不同展开剂中展开，结果表明如下：溶剂前沿123456123456（展开剂A）（展开剂B）溶剂前沿123456123456（展开剂C）（展开剂D)1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.岗梅对照药材溶液56.缺岗梅阴性对照溶液图2.不同展开剂的选择薄层鉴别图6（3）使用三氯甲烷方法（原标准方法）进行薄层鉴别，结果发现：阴性有干扰，对照品与供试品无对应点。而使用乙酸乙酯提取的溶液在以上四种展开剂中展开的效果来看，使用展开剂B的效果不是特别理想，供试品的斑点未能分离清晰，使用展开剂C和使用展开剂D的效果不可行，斑点没有分离，不能作为鉴岗梅的薄层色谱方法。而使用展开剂A的效果是最好的，其结果表明：银蒿解热合剂的供试品在色谱上与对照药材溶液存在相同的荧光点，其斑点分离清晰，而阴性对照不存在干扰。可列入该制剂质量标准中。3.2.1.4方法学考察（1）专属性：按照最终确定的方法进行试验，结果发现，银蒿解热合剂供试品与岗梅对照药材溶液在相应位置上有相同荧光斑点，而且阴性没有干扰。（见图2展开剂A）（2）不同薄层板的比较：取预制硅胶G薄层板、手铺板，按拟定的方法试验，结果表明用不同的厂家生产的硅胶G薄层板，鉴别无明显影响。（见图4）溶剂前沿123456123456（A：手铺板）（B：预制板）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.岗梅对照药材溶液56.缺岗梅阴性对照溶液图4.不同薄层板的比较（3）不同温度的比较取点样后的薄层板，分别在10和25下展开，显色，7检视。结果表明：在以上两个温度环境下，鉴别基本无明显影响（见图5）溶剂前沿123456123456（A：10）(A:25)1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.岗梅对照药材溶液56.缺岗梅阴性对照溶液图5.不同温度的比较（4）不同湿度的比较取点样后的薄层板，分别在32%和88%相对湿度中展开，显色，检视。结果表明：在以上两个不同的相对湿度下鉴别，湿度较高的薄层板点分离不够清晰，但是基本上没有明显的差距。（见图6）溶剂前沿123456123456(图A:相对湿度32%）（图B：相对湿度88%）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.岗梅对照药材溶液56.缺岗梅阴性对照溶液图6.不同湿度的比较83.2.2金银花的薄层鉴别3.2.2.1甲醇静置方法采用药典中金银花药材的鉴别方法来鉴别银蒿解热合剂中的金银花，结果表明采用药典标准方法能鉴别出合剂中的金银花成分，薄层斑点分离清晰，且阴性无干扰。故采用该方法作为金银花薄层鉴别方法。（1）提取方法供试品溶液的制备：取本品20mL，加甲醇30mL，放置12h，滤过，取甲醇滤液作为供试品溶液3。对照药材溶液的制备：取金银花对照品粉末，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照药材溶液。绿原酸对照品的制备：另取绿原酸对照品粉末，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。阴性对照品的制备：取缺金银花的银蒿解热合剂同供试品的方法制成阴性对照品。（2）色谱条件层析板：预制硅胶H薄层板、手铺硅胶H薄层板展开剂：乙酸丁酯-甲酸-水（7:2.5:2.5)的上层溶液。显色与检视：展开后取出晾干，置于紫外光灯下（365nm）检视点样量：供试品溶液、阴性溶液及对照药材溶液各10L，对照品溶液10L3.2.2.2绿原酸点样量的考察取绿原酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取5L，6L，7L，8L，9L，10L分别点于同一硅胶H薄层板上，参照最终确定方法的色谱条件进行薄层鉴别。93.2.2.3结果用甲醇静置法提取的溶液进行薄层鉴别，结果如下（见图7）溶剂前沿1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.金银花对照药材溶液5.绿原酸对照品溶液6.缺金银花阴性对照溶液123456(紫外（365nm）图)图7从上图中可以看出供试品色谱中与对照药材相应位置有相同的斑点都存在对应的点，由于银蒿解热合剂中的桑叶含有绿原酸，故加入金银花的对照药材，在图中供试品与金银花的对照药材都有2个相对应的斑点，其中有一个点与绿原酸所在斑点相对应，另一个点仅有供试品与金银花对照药材相对应，并无其他干扰，所以可以鉴别出该合剂中含有金银花。结论：该方法可以为该合剂的质量标准研究提供依据。3.2.2.4点样量的考察溶剂前沿10123456图8.绿原酸点样量考察薄层1-6的点样量分别是5L，6L，7L，8L，9L，10L从上图可以看出吸取10L的效果是最好的，最终还是选取了10L作为最终的点样量。3.2.2.5方法学考察(1)专属性：按最终选定的方法提取溶液进行薄层鉴别，结果表明，银蒿解热合剂供试品与金银花对照药材溶液色谱中在相应的位置上有相同的荧光斑点，且缺金银花阴性对照溶液无干扰。（见图7)(2)不同薄层板的比较:取预制硅胶G薄层板、手铺板，按确定的方法试验，结果表明用不同的硅胶G薄层板，鉴别无明显影响。（见图9）溶剂前沿123456123456（A：手铺板）（B：预制板）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.金银花对照药材溶液5.绿原酸对照品溶液6.缺金银花阴性对照溶液图9.不同薄层板的比较11(3)不同温度的比较:取点样后的薄层板，分别在10和25相对温度中展开，晾干，检视。结果表明：在以上两个不同的温度下，鉴别无明显区别。（见图10）溶剂前沿123456123456（A：温度10）（B:温度25）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.金银花对照药材溶液5.绿原酸对照品溶液6.缺金银花阴性对照溶液图10.不同温度的比较（）不同湿度的比较：取点样后的薄层板，分别在32%和88%相对湿度中展开，显色，检视。结果表明：在以上两个不同的相对湿度下，湿度较高的薄层板展开的溶液前沿稍低点，除此之外，基本无明显差别。溶剂前沿12345612345612（A：相对湿度32%）（B：相对湿度88%）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.金银花对照药材溶液5.绿原酸对照品溶液6.缺金银花阴性对照溶液图11.不同湿度的比较3.2.3连翘的薄层鉴别3.2.3.1甲醇方法采用药典中连翘药材的鉴别方法来鉴别银蒿解热合剂中的连翘，结果薄层斑点分离清晰，且阴性无干扰。故采用该方法作为该合剂连翘薄层鉴别方法。(1)提取方法供试品溶液的制备：取本品10mL，加石油醚(3060)20mL，密塞，超声处理15min，用分液漏斗弃去上层石油醚液，取下层溶液，加甲醇20mL，密塞，超声处理20min，滤过，取滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，作为供试品溶液3。对照药材溶液的制备：另取连翘对照药材粉末，加上甲醇制成每1mL含有连翘0.25mg的对照药材溶液。连翘苷对照品的制备：再取连翘苷对照品，加上甲醇制成每1mL含有连翘苷0.25mg的溶液，作为对照品溶液。阴性对照品的制备：取缺连翘的银蒿解热合剂10mL，按供试品的制备方法制得阴性对照品。（2）色谱条件层析板：预制硅胶G薄层板、手铺硅胶G薄层板展开剂：A:三氯甲烷-甲醇（5:1)B:三氯甲烷-甲醇（8:1）显色与检视：展开后取出晾干，喷上10%的硫酸乙醇溶液，并在105下烘干至斑点显色。点样量：供试品溶液、阴性溶液、对照药材溶液各10L连翘苷对照品5L3.2.3.2连翘苷点样量的考察取连翘苷对照品，加入甲醇制成每1mL含有连翘苷0.25mg的溶液，吸取133L，4L，5L，6L，7L，8L分别点于同一硅胶G薄层板上，参照上述最终确定方法的色谱条件进行薄层鉴别。3.2.3.3结果用甲醇方法提取的溶液进行薄层鉴别，分别在展开剂A和展开剂B中展开，结果如下：溶剂前沿123456123456（展开剂A）（展开剂B）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.连翘对照药材液5.连翘苷对照品溶液6.缺连翘阴性对照溶液图12.不同展开剂的选择从图12（展开剂A）中可以看出供试品以及对照药材色谱在相同的位置有相同颜色的斑点，由于连翘含有特征成分连翘苷，所以在点样过程中加入了连翘苷，在图中供试品与连翘对照药材都有2个对应点，其中有一个点均与连翘苷色谱中相应的位置相对应，阴性对照没有任何点与之对应，即阴性无干扰。结论：该方法可以为该合剂的质量标准研究提供依据。143.2.3.4点样量的考察溶剂前沿123456图13.连翘苷点样量考察薄层从1-6的点样量分别是3L，4L，5L，6L，7L，8L，从上图可以看出吸取5L，6L，7L，8L的效果相差不大，但是出于节约对照品溶液，最终还是选取了5L作为最终的点样量。3.2.3.5方法学考察（1）专属性：按最终选定的方法提取溶液进行薄层鉴别，结果表明，银蒿解热合剂供试品色谱中与连翘对照药材、连翘苷对照品色谱在相同的位置有相同颜色的斑点，同时缺连翘的阴性对照溶液与银蒿解热合剂供试品、连翘对照药材溶液，以及连翘苷在相应的位置上都没有显色相应的斑点，说明阴性对照溶液无干扰。（见图12展开剂A)15（2）不同薄层板的比较:取预制硅胶G薄层板、手铺板，按确定的方法试验，结果表明用不同的硅胶G薄层板，鉴别无明显影响。（见图14）溶剂前沿123456123456（A：预制板）（B;手铺板）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.连翘对照药材溶液5.连翘苷对照品溶液6.缺连翘阴性对照溶液图14.不同薄层板的比较（3）不同温度的比较:取点样后的薄层板，分别在10和25中展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105下烘干至斑点显色。结果表明：在以上两个不同的温度下，鉴别无明显影响。溶剂前沿12345612345616（A:温度10）（B：温度25）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.连翘对照药材溶液5.连翘苷对照品溶液6.缺连翘阴性对照溶液图15.不同温度下的比较（4）不同湿度的比较：取点样后的薄层板，分别在32%和88%相对湿度中展开，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105下烘干至斑点显色，鉴别结果表明：在不同温度中无明显影响。溶剂前沿123456123456（A：相对湿度40%）（B：相对湿度92%）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.连翘对照药材溶液5.连翘苷对照品溶液6.缺连翘阴性对照溶液图16.不同湿度下的比较3.2.4桑叶的薄层鉴定3.2.4.1乙醇超声方法（1）提取方法供试品液的制备：取本品20mL，加30mL石油醚(6090)，然后加热回流30min，弃去石油醚液，挥干药渣，加30mL乙醇溶液，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，得到残渣，加热水10mL，置60水浴上搅拌使溶解，滤过，滤液蒸干，最终残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液3。对照药材溶液的制备：另取桑叶对照药材粉末1g，加入甲醇溶液溶解，静置一段时间制成对照药材溶液。阴性对照品溶液的制备：取缺桑叶的银蒿解热合剂同法制得阴性。17（2）色谱条件层析板：预制硅胶G薄层板、手铺硅胶G薄层板展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5：2：1)的上层溶液为展开剂。显色与检视：展开后取出晾干，置于紫外光灯下（365nm）检视点样量：供试品溶液、阴性溶液、对照药材溶液各5L3.2.4.2改良后的乙醇超声方法（1）提取方法供试品液的制备：取本品10mL蒸至稠膏状，之后加适量硅藻土，再加乙醇25mL超声处理20min，滤过。滤液蒸干，残渣加甲醇1mL溶解，作为供试品溶液6。对照药材溶液的制备：另取桑叶对照药材粉末1g，加入25mL乙醇溶液，同法制成对照药材溶液。阴性对照品溶液的制备：同法制出缺桑叶的阴性对照品。（2）色谱条件层析板：预制硅胶G薄层板、手铺硅胶G薄层板展开剂：甲苯:乙酸乙酯:甲酸（8:2:1)的上层液为展开剂显色与检视：展开后取出晾干，置于紫外光灯下（365nm）检视点样量：供试品溶液、阴性溶液、对照药材溶液各10L3.2.4.3结果（1）使用乙醇超声法提取的溶液进行薄层鉴别，结果如下：（见图）溶剂前沿1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.桑叶对照药材溶液56.缺桑叶阴性对照溶液12345618图17.乙醇超声法的薄层鉴别（2）使用改进后的乙醇超声方法提取的溶液进行薄层鉴别，结果如下：（见图18）溶剂前沿1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）3.桑叶对照药材溶液4.桑叶对照药材溶液5.缺桑叶阴性对照溶液6.缺桑叶阴性对照溶液123456图18.改良后的乙醇超声法乙醇超声方法中供试品与对照药材溶液色谱中没有对应的荧光点，该方法不能鉴别出桑叶，而使用改良后的乙醇超声方法可以看出供试品最上方的2个荧光点与对照药材溶液相对应且荧光颜色相同，而阴性对照品与供试品和对照药材溶液在相应位置没有相同的荧光点，即阴性无干扰，可以鉴别出该合剂中含有桑叶，该方法可以列入该合剂的质量标准。3.2.4.4方法学考察（1）专属性：按最终选定的方法进行薄层鉴别，结果表明，银蒿解热合剂供试品与桑叶对照药材溶液色谱中，在相应的位置上有相同颜色的荧光斑点，且缺桑叶的阴性对照溶液相应位置与之无对应斑点，说明阴性对照溶液无干扰。（图)19（2）不同薄层板的比较:取预制硅胶G薄层板、手铺板，按确定的方法试验，结果表明用不同的硅胶G薄层板，鉴别无明显影响。（见图19）溶剂前沿123456123456（A：预制板）（B;手铺板）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.桑叶对照药材溶液56.缺桑叶阴性对照溶液图19.不同薄层板的比较（3）不同温度的比较:取点样后的薄层板，分别在10和25中展开，晾干，检视。结果表明：在以上两个不同的温度下，鉴别无明显影响。（见图20）溶剂前沿20123456123456（A:温度10）（B：温度25）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.桑叶对照药材溶液56.缺桑叶阴性对照溶液图20.不同温度的比较（4）不同湿度的比较：取点样后的薄层板，分别在32%和88%相对湿度中展开，显色，检视，结果表明：在以上两个不同的相对湿度下，鉴别无明显影响。（见图21）溶剂前沿123456123456（A：相对湿度32%）（B：相对湿度88%）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.桑叶对照药材溶液56.缺桑叶阴性对照溶液图21不同相对湿度的比较3.2.5柴胡的薄层鉴定3.2.5.1甲醇超声方法（1）提取方法供试品液的制备：取银蒿解热合剂15mL，加入甲醇20mL，并作超声处理10min，滤过，滤液浓缩至1mL，作为供试品溶液3。对照药材溶液的制备：另取柴胡对照药材粉末0.5g，同法制成对照药材溶液1。阴性对照品溶液的制备：取缺柴胡的银蒿解热合剂同法制得阴性对照品21（2）色谱条件层析板：预制硅胶G薄层板、手铺硅胶G薄层板展开剂：乙酸乙酯-乙醇-水(8：2：1)为展开剂显色与检视：展开，取出，晾干，喷以2对二甲氨基苯甲醛的40硫酸溶液，在60加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。点样量：供试品溶液、阴性溶液、对照药材溶液各5L3.2.5.2正丁醇方法（1）提取方法供试品液的制备：取本品30mL,用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL合并正丁醇提取液，用5%NaHCO3溶液20mL洗涤1次，取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇2mL溶解，即得供试品溶液7。对照药材溶液的制备：另取柴胡对照药材粉末1g，加水20mL，滤过，滤液用以水饱和的正丁醇提取3次，同供试品方法制得对照药材溶液。阴性对照品溶液的制备：取阴性对照样品(缺柴胡药材）30mL，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。（2）色谱条件层析板：预制硅胶G薄层板、手铺硅胶G薄层板展开剂：氯仿-甲醇-水(80:25:2)显色与检视：喷以1%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇液，在100烘至斑点显色，取出放置于通风处15min，在日光下以及紫外（365mn)下检视。点样量：供试品溶液、阴性溶液、对照药材溶液各10L3.2.5.3结果（1）使用甲醇超声法提取溶液进行薄层鉴别，其结果如下（见图22）溶剂前沿1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.柴胡对照药材溶液2256.缺柴胡阴性对照溶液123456图22.甲醇超声法的薄层鉴别（2）正丁醇方法提取溶液进行薄层鉴别，结果如下：（见图23）溶剂前沿123456123456(紫外（365nm）图)（日光图）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.桑叶对照药材溶液56.缺桑叶阴性对照溶液图23.正丁醇法提取的薄层鉴别从两组图片可以看出，使用甲醇提取方法，药材溶液与供试品，没有相应的荧光点。而采用正丁醇法得到的薄层图的效果是最佳的，在紫外线下观察，供试品与对照药材溶液色谱相应位置显示相同的黄色荧光点；在日光下观察则效果更明显，供试品与对照药材溶液色谱在相应位置都显示同样的紫色斑点，而阴性在这两种情况下均无干扰，正丁醇法的实验结果达到了令人满意的效果，可以为该制剂质量标准提供依据。3.2.5.4方法学考察（1）专属性：按正丁醇法提取溶液进行薄层鉴别，结果表明，缺柴胡的阴性对23照溶液与银蒿解热合剂供试品、柴胡对照药材溶液，在相应的位置上都没有显色相应的荧光点，说明阴性对照溶液无干扰。（见图23)（2）不同薄层板的比较:取预制硅胶G薄层板、手铺板，按确定的方法试验，结果表明用不同的硅胶G薄层板，鉴别无明显影响。（见图24）（A：预制板）（B;手铺板）溶剂前沿123456123456(紫外（365nm）图A)(紫外（365nm）图B)溶剂前沿24123456123456（日光图A）（日光图B）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.柴胡对照药材溶液56.缺柴胡阴性对照溶液图24.不同薄层板的比较（3）不同温度的比较:取点样后的薄层板，分别在10和25中展开，晾干，检视。结果表明：在以上两个不同的温度下，鉴别无明显影响。（见图25）溶剂前沿123456123456(紫外（365nm）10)(紫外（365nm）25)溶剂前沿25123456123456（日光图10）（日光图25）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.柴胡对照药材溶液56.缺柴胡阴性对照溶液图25.不同温度的比较（4）不同湿度的比较：取点样后的薄层板，分别在32%和88%相对湿度中展开，显色，检视，结果表明：在以上两个不同的相对湿度下，鉴别无明显影响。溶剂前沿123456123456(A：相对湿度32%，紫外（365nm）图)(B：相对湿度88%，紫外（365nm图)溶剂前沿26123456123456（A：相对湿度32%日光图）（B：相对湿度88%日光图）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.柴胡对照药材溶液56.缺柴胡阴性对照溶液图26.不同湿度的比较3.2.6绵马贯众的薄层鉴定3.2.6.1环己烷超声方法（1）提取方法供试品液的制备：取本品30mL，加环己烷20mL，超声处理30min，滤过，取续滤液10mL，浓缩至5mL，作为供试品溶液3。对照药材溶液的制备：另取绵马贯众对照药材粉末1g，同法制成对照药材溶液。阴性对照品溶液的制备：取缺绵马贯众的银蒿解热合剂同法制成阴性对照。（2）色谱条件层析板：手铺硅胶G薄层板（特制)：取硅胶G10g、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH7.0)10ml、维生素C60mg、羧甲基纤维素钠溶液20mL，调匀，铺板，室温避光晾干，50活化2小时后备用展开剂：正己烷-三氯甲烷-甲醇(30：15：1)为展开剂显色与检视：取出，立即喷以0.3坚牢蓝BB盐的稀乙醇溶液，在40放置1小时后观察。点样量：供试品溶液、阴性溶液、对照药材溶液各5L3.2.6.2盐酸酸化乙醚提取方法（1）提取方法供试品液的制备：取样品30mL用盐酸酸化至pH值为2-3后，再置分液漏斗中，27用乙醚萃取3次(20mL、l5mL、10mL)，合并乙醚液，浓缩至干，所得残渣加氯仿1mL溶解，即得8。对照药材溶液的制备：取绵马贯众对照药材粉末1g，置于l00mL烧杯中（干净)，加水30mL溶解，滤过，取滤液照供试品溶液的制备方法，制成对照药材溶液。阴性对照品溶液的制备：取不含绵马贯众的阴性样品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。（2）色谱条件层析板：预制硅胶G薄层板、手铺硅胶G薄层板展开剂：氯仿一丙酮一冰醋酸(16:4:0.3)显色与检视：喷以10%的磷钼酸乙醇溶液,再喷以0.4%的氢氧化钠溶液,置日光下检视。点样量：供试品溶液、阴性溶液各10L、对照药材溶液5L3.2.6.3结果（1）使用环己烷方法提取溶液进行薄层鉴别，其结果如下（见图27）溶剂前沿1.供试品溶液（20141104）23.供试品溶液（20140520）45.绵马贯众对照药材溶液6.缺绵马贯众阴性对照溶液123456（图27环己烷方法薄层）使用盐酸酸化乙醚提取方法进行薄层鉴别，结果如下（见图28）溶剂前沿1.供试品溶液（20141104）282.供试品溶液（20140520）3.绵马贯众对照药材溶液4.绵马贯众对照药材溶液5.缺绵马贯众阴性对照溶液6.缺绵马贯众阴性对照溶液123456（图28盐酸酸化乙醚提取方法）从上两图可以看出使用环己烷提取方法，阴性虽无干扰，但对照药材溶液与供试品对应点不够清晰。而使用盐酸酸化乙醚提取方法，供试品色谱正中间有2个荧光点可以与对照药材溶液相应位置有相同颜色的荧光斑点，而阴性对照品与供试品和对照药材溶液没有相对应的荧光点，即阴性无干扰，可以鉴别出该合剂中含有绵马贯众，该方法可以为该合剂的质量标准研究提供依据。3.2.6.4方法学考察（1）专属性：按盐酸酸化乙醚提取方法提取溶液进行薄层鉴别，结果表明，缺绵马贯众的阴性对照溶液与银蒿解热合剂供试品、绵马贯众对照药材溶液，在相应的位置上都没有显色相应的荧光点，说明阴性对照溶液无干扰。（见图28)（2）不同薄层板的比较:取预制硅胶G薄层板、手铺板，按确定的方法试验，结果表明用不同的硅胶G薄层板，鉴别无明显影响。（见图29）溶剂前沿123456123456（A：预制板）（B：手铺板）291.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.绵马贯众对照药材溶液56.缺绵马贯众阴性对照溶液图29.不同薄层板的比较（3）不同温度的比较:取点样后的薄层板，分别在10和25相对温度中展开，晾干，检视。结果表明：在以上两个不同的相对温度下，鉴别无明显影响。（见图30）溶剂前沿123456123456（A:温度10）（B：温度25）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.绵马贯众对照药材溶液56.缺绵马贯众阴性对照溶液图30.不同温度的比较（4）不同湿度的比较：取点样后的薄层板，分别在32%和88%相对湿度中展开，显色，检视，结果表明：在以上两个不同的相对温度下，鉴别无明显影响。（见图31）30溶剂前沿123456123456（A：相对湿度32%）（B：相对湿度88%）1.供试品溶液（20141104）2.供试品溶液（20140520）34.绵马贯众对照药材溶液56.缺绵马贯众阴性对照溶液图31.不同湿度的比较314检查为了检测银蒿解热合剂是否符合合剂的质量标准，对所研究的银蒿解热合剂在两个批号（20141104、20140520）中各随机选取5瓶做质量标准检测。检测依据：中山市中医院自订“银蒿解热合剂”质量标准。4.1相对密度的检测根据中国药典2010年版规定采用比重瓶法来检测相对密度。天平型号：BS224S计算公式：相对密度=123w其中w1（g）=空瓶重量W2（g）=空瓶重+新沸过冷水W3=空瓶重+样品检测结果：将上述所测的数据代入公式中，计算得到：批号为20141104的相对密度为1.07，批号为20140520的相对密度也为1.07，根据中山市中医院银蒿解热合剂的质量标准规定：该合剂的相对密度不得低于1.02，而批号20141104和批号20140520的相对密度为1.071.02，结果符合规定。4.2PH值的测定根据中国药典2010年版一部附录G规定，采用PH值测定法测定银蒿解热合剂的PH。测定值批号空瓶重量空瓶重+新沸过冷水空瓶重+样品201411047.3789g12.5810g12.9515g201405207.0565g12.2260g12.6011g32使用仪器：PHSJ-3F实验室PH计先用邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液（PH=4）以及磷酸盐标准缓冲液（PH=6.86）校正仪器，再测供试品的PH值。检测结果：批号20141104的PH值为4.93，批号20140520的PH值为4.68，根据中山市中医院银蒿解热合剂的质量标准规定：该合剂的PH值应在4.56.5，而两个批号所测的PH值均在该区间中，结果符合规定。4.3最低装量测定根据中国药典2010年版一部规定，采用容量法测定银蒿解热合剂的最低装量。计算公式：平均装量=3第三瓶第二瓶第一瓶检测结果：用干燥量筒测定3瓶供试品，其结果表示如下将上述所测的数据代入公式中，计算得到：批号为20141104的平均装量为100mL，批号为20140520的平均装量为105mL，根据中山市中医院银蒿解热合剂的质量标准规定：该合剂的平均装量不得低于100mL，每瓶供试品不得少于97mL，而批号20141104平均装量为容量瓶数批号第一瓶第二瓶第三瓶20141104100mL100mL100mL20140520110mL100mL105mL33100mL100mL，每瓶供试品均大97mL，批号20140520的平均装量为105mL100mL，每瓶供试品均大于97mL，结果符合规定。345讨论5.1超声提取方法与静置12小时提取方法的比较在金银花的薄层鉴别当中，由于超声仪刚好出现故障，故采用静置12小时提取的方法提取的连翘供试品，对照药材溶液，阴性对照溶液进行薄层鉴别，发现供试品与对照药材溶液的荧光点虽然相对应，但是很不明显，而且在下一次点样的过程中加大了点样量，结果发现荧光点依然很暗淡。待超声仪可正常工作，重新提取了连翘的供试品，对照药材溶液，以及阴性对照溶液，并将它们进行薄层鉴别，结果发现，供试品与对照药材溶液的荧光点分离清晰，斑点可见。超声具有的热效应、空化效应及机械效应等特点，而超声提取的原理就是利用该特点增大介质分子的运动速度、增大介质的穿透力以提取中药有效成分9。相对于静置12小时提取方法而言，超声提取法具有诸多优势：提取时间短，且有效，又不会对提取的有效成分造成破坏，操作方便。而静置12小时提取方法时间长，且未必能将中药的有效成分大量提取出来，效率低。结论：超声提取方法较优。5.2正确选择展开剂在岗梅的薄层鉴别时，出现供试品与对照药材溶液没有明显的荧光点对应或者是对应点的位置不理想，一开始认为是提取方法不正确，请教了导师以及相关工作人员，在他们的指导下对展开剂进行选择，最终将冰醋酸换成甲酸并调整了比例，结果发现供试品与对照药材溶液有显色相同的荧光点且位置对应，说明如何正确选择展开剂对于薄层的展开的效果至关重要。展开剂选择采用“相似相溶”原则，极性小的展开剂对应极性小的物质，极性大的展开剂则对应极性大的物质10。而甲酸的极性大于冰醋酸，可能是提取的岗梅有效成分的极性比较大，因此换成甲酸的效果更好，有效成分都得以分离。5.3手铺板对层析的影响自制薄层板采用CMC-Na和硅胶G粉按比例3：1混合，搅匀，均匀铺于玻璃板上，可是在实验过程中发现个别自制薄层板展开的效果不理想，溶液前35沿出现波浪状，或且斑点位置难以对应等问题。展开不太理想的薄层板存在表面不够均匀，有气泡孔等问题，可能是导致展开不理想的原因，所以在配硅胶溶液的时候建议使用超声，除去气泡，在铺板的时