糖类药物

糖 类 药 物,1、了解糖类药物有哪些类别？2、掌握肝素和银耳多糖的制备检测原理和方法。,概 述,单糖药物,葡萄糖（溶媒，利尿剂）果糖（降颅压）氨基葡萄糖(适用于全身各个部位的骨关节炎),低聚糖药物,蔗糖麦芽糖乳糖,衍生物,6-磷酸葡萄糖1，6二磷酸果糖磷酸肌醇（抗癌卫士）,多 糖,糖类药物研究的最多是多糖类药物多糖链是生命科学中除肽链、核苷酸链之外具有重大意义的第三链,多糖类生理活性,增强机体免疫能力激活巨噬细胞激活网状内皮系统激活补体,人参多糖,抗癌活性 多糖通过增强机体的免疫功能、改变细胞膜生化活性、诱生肿瘤坏死因子、抗自由基作用而达到抗癌活性,香菇多糖、云芝多糖、茯苓多糖、银耳多糖,降血糖活性 在粘性多糖中乙酰基的存在是降血糖活性的重要抑制因子抗放射线作用 通过强化造血系统和活化吞噬细胞等作用提高机体对辐射的耐受性,茯苓多糖,抗衰老作用抗凝血作用 肝素抗血脂 硫酸软骨素,多糖与相关药物的研究分两个方向,作为信息分子进入机体发挥补充调节或抑制的作用，这种特异性治疗随着糖功能基团的发现将不断涌现，目前报道较少。研究热点以基质成分作为非特异性治疗调节各种生理功能，或纠正病理过程。国内较为普遍,粘多糖,糖胺聚糖由细胞分泌的胞外生物高分子，是动物体内蛋白多糖分子中的糖链部分。具有多种药理活性。包括抗凝血、降血脂、抗病毒、抗肿瘤及抗放射等。,第一节 糖类药物制备的一般方法,单糖及衍生物的制备 直接提取法 水 50乙醇 82乙醇 活性炭脱色、浓缩、结晶,多糖的提取,脱脂：动植物多糖及微生物细胞内多糖的组织细胞多有脂质包围，甲醇、1：1的乙醇乙醚混合溶液、石油醚。脱色：含色素较高的根、茎、叶、果实类，需进行处理。,稀碱液提取法 难溶于冷水、热水，可溶于稀碱液（胶类）水提法 易溶于温水、难溶于冷水和乙醇,粘多糖提取 粘多糖与蛋白质结合于细胞中，因此使糖-蛋白质间的结合键断裂，促使多糖释放。方法有：碱解法 酶解法,多糖与蛋白质结合的糖肽键对碱不稳定，故可用碱解法使糖与蛋白质分开。,理想的工具酶是专一性低的、具有广泛水解作用的蛋白酶。鉴于蛋白酶不能断裂糖肽键及其附近的肽键，为除去长肽段，常可与碱解法合用。胰蛋白酶、木瓜蛋白酶,多糖分离纯化,乙醇沉淀法分级沉淀法 季胺盐络合法,用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的粘多糖。,与CTAB、CPC等能形成季胺盐络合物。在离子强度大时，这种络合物可以解离，溶解，释放。,凝胶柱色谱法纤维素阴离子交换剂柱色谱法 电泳、超滤法、亲和色谱、制备性高压液相色谱、活性碳柱色谱,Sepharose 6B、DEAEToyopeurl 650M 及SephacrylS-200及Sephedex G 50柱色,常见的交换剂为DEAE-纤维素,多糖的含量测定与结构分析,显色试剂一硫酸法 硫酸蒽酮 （620nm） 苯酚硫酸（490nm） 两种方法都是测总糖的，多糖被硫酸水解为单糖，然后单糖在硫酸作用下脱水生成糠醛。 糠醛与蒽酮作用行测一种蓝绿色的络合物，在620nm处有最大吸收。 糠醛与苯酚作用形成橙黄色化合物，在490nm处有最大吸收。 二者的颜色深浅与糖含量呈正相关。 DNS法 其利用S，5一二硝基水杨酸与多糖水解产物还原糖共热后还原成棕红色氨基化合物，在540nm处有特征吸收。,高压电泳、纸色谱、薄层色谱、高效液相色谱、旋光测定、凝胶色谱、高效凝胶渗透色谱（HPGPC）等。,HPGPC测定多糖的纯度和分子量具有快速、高分辨率和重现性好的优点，在国内外已得到广泛应用。,第二节 重要糖类药物生产工艺,D-甘露醇（D-Mannitol） 在体内不被代谢，经肾小球滤过后在肾小管内甚少被重吸收，可吸收水进入血液中，起到渗透利尿作用。,适应症,组织脱水药 降低眼内压渗透性利尿药 作为辅助性利尿措施治疗肾病综合征、肝硬化腹水 作为冲洗剂，应用于经尿道内作前列腺切除,结构与性质,甘露醇为白色针状结晶，无臭，略有甜味，不潮解。易溶于水，溶于热乙醇，微溶于低级醇类、低级胺类、吡啶不溶于有机溶剂。,生产工艺,从海藻、海带提取。葡萄糖为原料，经电解、脱盐，精制。发酵法。,发酵法,提取法,去粘多糖,检测方法,1、旋光法硼砂作为增旋剂 ，测旋光度，详见英国药典2、碘量法(药典法）过碘酸钾氧化碘量法 ，详见中国药典（第二部）,肝素,肝素是最有效的抗凝剂。 阻止血小板聚集和破坏，抑制凝血酶的形成及活性，并能促使纤维蛋白溶解。,临床运用,于外科预防血栓形成以及妊娠者的抗凝治疗 在心脏、手术和肾脏透析时维持血液体外循环畅通用于治疗各种原因引起的弥散性血管内凝血,结构与性质,肝素是天然抗凝剂，是一种含有硫酸基的酸性粘多糖。 肝素分子量不均一，由低、中、高三类不同分子量组成，分子量从3000到37500 。,肝素为白色或灰白色粉末，无臭无味，有吸湿性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂，其游离酸在乙醚中有一定溶解性。 肝素分子中含有硫酸基与羧基，呈强酸性，为聚阴离子，能与阳离子反应成盐。,生产工艺,在动物体内，肝素与蛋白质共价结合形成肝素蛋白复合物。这种复合物无抗凝活性，随着蛋白质的去除，其活性方能显示出来。典型的粘多糖提取步骤,肝素钠的提取分离两大生产工艺,碱性热水或沸水来提取肝素蛋白复合物。 使用碱性无机盐溶液使其断键解离 盐解法 使用蛋白水解酶使其断键解离 酶解法,盐解-离子交换生产工艺,酶解-离子交换生产工艺,质量检测,天青A法：碱性染料天青A 的正电荷与肝素磺酸基、羧基负电荷结合，生成肝素天青复合物，其颜色不同于原来的颜色，在pH8.6条件下，于505nm 处可进行比色测定。 生物检定法 ：兔全血法,人参多糖,(GPS)为人参的主要成分之一，近年研究表明，GPS可明显增强免疫系统的功能并有免疫抗肿瘤和辅助抗肿瘤活性。,粉碎,脱脂,超声提取,85 乙醇溶液沉淀,去蛋白，去核酸,总多糖,检测方法,硫酸苯酚法,见参考文献,银耳多糖 本品系担子菌多糖类免疫增强剂，有改善机体免疫功能及升高白细胞的作用。临床用于肿瘤化疗或放疗以及其它原因所致的白细胞减少症，有显著效果。此外尚可用于治疗慢性支气管炎。,制备方法,1. 去银耳子实体10g加水300ml，直火提取1h，提取过程中不断用玻棒搅拌。双层纱布过滤，提取液浓缩至100ml左右2.浓缩液加入等体积Sevag试剂去蛋白，3000 rpm离心10min。3.上清液加入95乙醇调整含醇量至80，静置0.5h，4. 3000 rpm离心10min，沉淀用无水乙醇，乙醚，丙酮洗涤1次，真空干燥，得银耳粗多糖。,银耳多糖鉴定：（1）Molish反应：多糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物，其与-萘酚反应作用生成紫色的化合物，原理是羰基于酚类进行了缩合，这样，将糖与浓酸作用后再与-萘酚反应作用就能生成紫色的化合物，因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。,（2）斐林试剂：质量浓度为0.1gmL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05gmL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的