机能学设计性实验

机能学设计性实验,01,02,03,04,05,小组成员及学号,别嘌醇与苯溴马隆治疗高尿酸血症的疗效对比,2013级临床医学 第五组,目前中国高尿酸血症患者达1.2亿，痛风患者约1700万！,高尿酸血症发病率,痛风发病率,中国高尿酸血症和痛风发病率,HUA与多个重要靶器官损害密切相关,CONTENTS,目录,1,2,3,4,研究目的,研究思路及内容,主要理论依据,实验准备及主要技术路线,数据的搜集与处理,5,开题报告,参考文献,6,学习高尿酸血症动物模型的建立。观察比较苯溴马隆与别嘌醇治疗高尿酸血症的疗效及不良反应，为治疗原发性高尿酸血症的药物选择提供实验依据。通过研究治疗高尿酸血症的药物达到对痛风等相关疾病的早期防治的目的。,研究目的,采用次黄嘌呤、氧嗪酸钾和乙胺丁醇三者联合应用复制高尿酸血症的动物模型；验证抑制尿酸生成药别嘌醇和促进尿酸排泄药苯溴马隆降低血尿酸的作用；观察别嘌醇与苯溴马隆作用的不良反应及比较二者的疗效。,研究内容及思路,主要理论依据,Uric acid,尿酸的代谢,hyperuricemia,高尿酸血症,medication,高尿酸血症的治疗,Main theoretical basis,尿酸的代谢,尿酸是鸟类和爬行动物的主要代谢产物。微溶于水，易形成晶体。,尿酸在体内的生成过程,尿酸在体内的排泄过程,大部分尿酸经肾脏随尿排出体外，小部分尿酸通过分解代谢而被破坏。在肾脏的排泄过程如下图所示：,高尿酸血症的定义,高尿酸血症（Hyperuricemia，HUA）是指在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血尿酸水平 男性高于420mol/L 女性高于360mol/L 这个浓度为尿酸在血液中的饱和浓度，超过此浓度时尿酸盐即可沉积在组织中，造成痛风组织学改变。,体内尿酸的生成过多,01,大部分尿酸经肾脏随尿排出体外，小部分尿酸通过分解代谢而被破坏。因此，体内尿酸的生成过多和体内尿酸的排泄减少是高尿酸血症产生的主要原因。,尿酸随尿排出体外减少,02,尿酸通过分解代谢而被破坏减少,03,高尿酸血症产生的原因,一、生活方式治疗1、健康饮食、限制烟酒、坚持运动和控制体重；2、每日尿量1500 ml以上；3、适当碱化尿液(尿pH 6269) ；4、单纯的饮食控制对尿酸水平的影响有限。二、药物治疗一类是促进尿酸排泄药：减少尿酸被肾重吸收如苯溴马隆；另一类抑制尿酸生成药：竞争抑制体内嘌呤分解如别嘌醇。,高尿酸血症的治疗,苯溴马隆,通过抑制肾小管对尿酸的重吸收，降低血尿酸的浓度和组织中尿酸结晶的沉着，也可促进尿酸结晶的重新溶解。苯溴马隆不能改善血管内皮功能，因为其增加尿酸排泄，而没有抑制黄嘌呤氧化酶的作用，故不能减少氧自由基的产生。适用于原发性和继发性高尿酸血症，及各种原因引起的痛风关节炎非急性发作期，急性痛风发作时不得使用。苯溴马隆的不良反应：胃肠反应为恶心及腹部不适等。引起肾结石和肾绞痛。诱发关节炎急性发作。罕见发热、皮疹和肝或肾功能损害。,别嘌醇,竞争性抑制黄嘌呤氧化酶（XO），阻断次黄嘌呤和黄嘌呤转化为尿酸，同时别嘌呤被氧化为羟基嘌呤醇，也发挥着降低血尿酸浓度的主要作用。但别嘌醇的使用可能增加尿酸前体-次黄嘌呤和黄嘌呤的浓度。新近发现，别嘌醇还具有改善血管内皮细胞功能的作用，这一作用并非仅通过降尿酸，而是同时抑制黄嘌呤氧化酶的结果。适用于几乎所有原因造成的高尿酸血症。别嘌醇的不良反应不常见，也比较温和。5%的正常个体因不良反应不能耐受别嘌醇。最常见的问题包括皮疹、胃肠道疼痛、腹泻和头痛。严重的过敏反应少但可致命。,实验动物,健康雄性SD大鼠24只，8周龄，体重（180220g）室2025，伺以所配制的饲料。自由饮水，日常光照。另有健康雄性SD大鼠8只，8周龄，体重（180220g）室温2025，饲以标准饲料，自由饮水，日常光照。,饲料制作：用打粉机将正常饲料粉碎成粉末后加入次黄嘌呤搅拌均匀，取出加入灭菌蒸馏水和好，用50 mL针筒挤出圆柱状饲料。放入烘箱烘干至饲料中残留水分挥发即可。,主要仪器,TDZ4-WS自动平衡离心机、 AMS-18 自动生化分析仪、天平、鼠笼、秤、纱布、游标卡尺、大鼠手术器材、灌胃针、手术刀、皮钳、止血钳、直剪、注射器、针头等,主要试剂和药品,盐酸乙胺丁醇片(生产批号： 130102)， 广州白云山明兴制药有限公司； 腺嘌呤 (生产批号： ZXRYE-TP)，梯希爱 ( 上海 ) 工业发展有限公司； 次黄嘌呤 ( 生产批号：ZY131028)， 上海紫一试剂厂 ； 氧嗪酸钾(生产批号 ： 131015)瀚渤(上海)贸易有限公司；苯溴马隆溶液；别嘌醇溶液；生理盐水；蒸馏水；尿酸生理盐水等。,盐酸乙胺丁醇配制：将药片压碎，加蒸灭菌馏水溶解、混匀，配成25 mg/mL。氧嗪酸钾盐配制：干粉研磨约至细粉后，滴加入橄榄油研磨，可保存23天。,雄性SD大鼠32只,A组（正常对照组）大鼠8只：饲以正常饲料,其余大鼠24只：饲以配制饲料（含次黄嘌呤 25g/kg）,实验前11天,灌胃给予乙胺丁醇 250 mg/kg， 给药体积为10 mL/kg，同时皮下注射氧嗪酸钾200 mg/kg，给药体积为0.5mL/kg；按原有方式连续喂饲大鼠，饲养量均一致，自由饮水，日常光照。,实验前10天,末梢静脉取血,AMS-18 自动生化分析仪测定血尿酸的浓度,血尿酸能维持在较高水平，有空白对照组差异有统计学意义，表明建模成功,主要技术路线,37条件下凝血约1h，4000r/min离心10min获得血清。,观察指标,建模前后各组血尿酸浓度的变化、给药14天和28天时各组血尿酸浓度变化、末次给药后胃和小肠的溃疡指数、末次给药后肾脏病理及损害程度，以及给药过程中皮肤的过敏瘙痒情况。 表1 各组造模前后血尿酸值比较 mol/L,表2 不同治疗方案对各组大鼠血尿酸、胃肠道、肾脏的影响,观察指标,预期结果,1、建模后大鼠体内血尿酸浓度明显升高，达到高尿酸血症 水平。2、与A、B两组相比，给药14天和给药28天时C、D组大鼠 血尿酸浓度明显降低，但仍高于正常水平。说明别嘌醇和 苯溴马隆均可以降低血尿酸浓度。3、C、D两组大鼠给药28天比给药14天时血尿酸浓度低。4、在给药28时和在给药14天时D组的血尿酸浓度均低于C组。 说明苯溴马隆的降尿酸效果优于别嘌醇。5、与A、B两组相比，C、D两组胃和小肠均出现溃疡，但D组胃 与小肠的溃疡程度低于C组。说明苯溴马隆对胃肠道的不良 反应轻于别嘌醇。6、与A组相比，B、C、D三组均出现肾脏病理及损害。,数据的收集及处理方法,统计学方法 采用 SPSS17.0 软件进行统计，数据以（meanSD）表示，组间的比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）中的Newman-Keuls检验，n表示小鼠的例数。P0.05表示数据间的差异有统计学意义,参考文献,1施琬, 黄惠珠, 李钟,等. 建立高尿酸血症动物模型实验研究J. 新中医, 2015,(6):273-276.2臧路平, 刘志刚, 吴新荣. 高尿酸血症发病机制及其药物治疗研究进展J. 医药导报,2011, 30(1):69-73.3万盟, 张倩, 杨小红,等. 别嘌醇与苯溴马隆对高尿酸小鼠糖代谢的影响J. 中国医药导报, 2014, 25期(25):18-21.4Ogino K， Kato M，Furuse Y，Kinugasa Y，Ishida K，Osaki S，Kinugawa T，Igawa O，Hisatome I，Shigemasa C，Anker SD，Doehner W.Uric acid-lowering treatment withbenzbromarone in patients with heart failure:a double-blind placebo-controlled crossover preliminary study.Circ Heart Fail2010；3:73-815刘静， 徐玲玲常用痛风模型的作用机制及评价 J中国药师， 2012， 15(8)：1193-11946刘淑芬，曾学军高尿酸血症动物模型研究进展 J基础医学与临床， 2011， 31(3)：344-347,参考文献,7Khanna D, Fitzgerald J D, Khanna P P, et al. 2012 American College of Rheumatologyguidelines for management of gout. Part 1: systematic nonpharmacologic and pharmacologic therapeutic approaches to hyperuricemia J.Arthritis Care Res (Hoboken), 2012, 64(10): 1431-1446.8Liu H, Zhang X M, Wang Y L, et al. Prevalence of hyperuricemia among Chinese adults: a national cross-sectional survey using multistage, stratified sampling J. J Nephrol, 2014, 27(6): 653-658.9刘永贵, 赵丽嘉, 崔艳丽,等. 抗高尿酸血症药物研究进展J. 现代药物与临床, 2015, 第3期(03):345-350.10中华医学会内分泌学分会. 高尿酸血症和痛风治疗的 中国专家共识 J. 中华内分泌代谢杂志, 2013, 29(11): 913-920.11赵玉安. 苯溴马隆治疗高尿酸血症84