实验室生物安全通用要求

实验室生物安全通用要求,西双版纳州疾病预防控制中心艾滋病筛查中心实验室,内容,术语与定义微生物危害程度分级生物安全实验室二级屏障生物安全实验室一级屏障生物安全实验室管理动物实验生物安全实验室讨论,术语与定义（一）,生物安全 biosafety：避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施 生物因子 biological agents ：一切微生物和生物活性物质 病原体 pathogens ：可使人、动物或植物致病的生物因子危害 废弃物 hazardous waste ：有潜在生物危险、可燃、易燃、腐蚀、有毒、放射和起破坏作用的对人、环境有害的一切废弃物,术语与定义（二）,危害 risk：伤害发生的概率及其严重性的综合 气溶胶aerosols：悬浮于气体介质中的粒径一般为 0.001-100m的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系 高效空气过滤器 high efficiency particulate air filter(HEPA)：通常以滤除0.3m 微粒为目的，滤除效率符合相关要求的过滤器,术语与定义（三）,安全罩 safety hood ：置于实验室工作台或仪器设备上的负压排风罩，以减少实验室工作者的暴露危险 ，排风经高效过滤实验室分区 laboratory area ：按照生物因子污染概率的大小，实验室可进行合理的分区 缓冲间 buffer room ：设置在清洁区、半污染区和污染区相临两区之间的缓冲密闭室，具有通风系统，其两个门具有互锁功能，且不能同时处于开启状态,术语与定义（四）,气锁 air lock ：气压可调节的气密室，用于连接气压不同的两个相邻区域，其两个门具有互锁功能，不能同时处于开启状态。在实验室中用作特殊通道 定向气流 directional airflow：在气压低于外环境大气压的实验室中，从污染概率小且相对压力高处向污染概率高且相对压力低处受控制流动的气流,术语与定义（五）,一级屏障 primary barrier ：是操作者和被操作对象之间的隔离，也称一级隔离 。如生物安全柜、个体防护装备等二级屏障 secondary barrier ：是生物安全实验室和外部环境的隔离，也称二级隔离 生物安全实验室 biosafety laboratory ：通过防护屏障，达到生物安全要求的生物实验室和动物实验室,微生物危害程度分级（一）,危害等级I （低个体危害，低群体危害） ：不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子 危害等级 (中等个体危害，有限群体危害) ：能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限,微生物危害程度分级（二）,危害等级 III （高个体危害，低群体危害）：能引起人类或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能使用抗生素、抗寄生虫药治疗的病原体 危害等级 (高个体危害，高群体危害)：能引起人类或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接或间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物间传播的病原体,危害等级的病毒种类（18/230）,危害等级 III 的病毒种类（51/230）,危害等级 III 的细菌种类（31/222）,危害等级 III 的真菌种类（6/41）,病原生物的危害等级分布,临床检验相关生物危害等级分布,生物安全实验室二级防护屏障,二级防护屏障 secondary barrier 是实验室的设施结构和通风系统构成的防护屏障。是生物安全实验室和外部环境的隔离。,实验室生物安全水平分级,根据所操作的生物因子的危害程度和采取的防护措施，将实验室生物安全防护水平（biosafety level，BSL）分为4级，I级防护水平最低，IV级防护水平最高以BSL-1、BSL-2、BSL-3、BSL-4表示实验室的相应生物安全防护水平以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4表示动物实验室的相应生物安全防护水平,生物安全实验室的分级,BSL-1 实验室平面示意图,1级生物安全柜,洗手池,BSL1 实验室设施和施设备（一）,无需特殊选址，普通建筑物即可，但应有防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。每个实验室应设洗手池，宜设置在靠近出口处。在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作服分开放置。实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑，不得铺设地毯。,BSL1 实验室设施和施设备（二）,实验台面应防水，耐腐蚀、耐热。实验室中的厨柜和实验台应牢固。厨柜、实验台彼此之间应保持一定距离，以便于清洁。实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。实验室内应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。应有适当的消毒设备。,BSL-2 实验室平面示意图,2级生物安全柜,洗手池,洗眼器,高压锅,指示标志,带自动关闭锁,34/小时，通风换气次数,BSL2 实验室设施和施设备（一）,满足BSL-1的要求。实验室门应带锁并可自动关闭。实验室的门应有可视窗。应有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间。在实验室内应使用专门的工作服；应戴乳胶手套。在实验室的工作区域外应有存放个人衣物的条件。,BSL2 实验室设施和施设备（二）,在实验室所在的建筑内应配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。应在实验室内配备生物安全柜。应设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。应通风，如使用窗户自然通风，应有防虫纱窗。有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应设备用电源。实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。,BSL-3 实验室平面示意图,-30Pa,主实验室（-40Pa),半污染区(-20Pa),内更衣室（-10Pa),缓冲间(-10pa),女外更衣室,洗消间,安全通道,男外更衣室,外走廊,缓冲间,淋浴间,淋浴间,BSL3实验室布局,应在建筑物中自成隔离区（有出入控制）或为独立建筑物由清洁区、半污染区和污染区组成。污染区和半污染区之间应设缓冲间。必要时，半污染区和清洁区之间应设缓冲间。在半污染区应设供紧急撤离使用的安全门。污染区与半污染区之间、半污染区和清洁区之间应设置传递窗，传递窗双门不能同时处于开启状态，传递窗内应设物理消毒装置。,BSL-3 实验室围护结构,实验室围护结构内表面应光滑、耐腐蚀、防水，以易于消毒清洁；所有缝隙应可靠密封，防震、防火。围护结构外围墙体应有适当的抗震和防火能力。天花板、地板、墙间的交角均为圆弧形且可靠密封。地面应防渗漏、无接缝、光洁、防滑。实验室内所有的门应可自动关闭；实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。外围结构不应有窗户；内设窗户应防破碎、防漏气及安全。所有出入口处应采用防止节肢动物和啮齿动物进入的设计。,BSL-3 实验室的送风系统,应安装独立的送排风系统以控制实验室气流方向和压力梯度。应确保在使用实验室时气流由清洁区流向污染区，同时确保实验室空气只能通过高效过滤后经专用排风管道排出。送风口和排风口的布置应该是对面分布，上送下排，应使污染区和半污染区内的气流死角和涡流降至最小程度。送排风系统应为直排式，不得采用回风系统。由生物安全柜排出的经内部高效过滤的空气可通过系统的排风管直接排出。应确保生物安全柜与排风系统的压力平衡。实验室的送风应经初、中、高三级过滤，保证污染区的静态洁净度达到7级到8级。,BSL-3 实验室的排风系统,实验室的排风应经高效过滤后向空中排放。外部排风口应远离送风口并设置在主导风的下风向，应至少高出所在建筑2m，应有防雨、防鼠、防虫设计，但不应影响气体直接向上空排放。高效空气过滤器应安装在送风管道的末端和排风管道的前端。通风系统、高效空气过滤器的安装应牢固，符合气密性要求。高效过滤器在更换前应消毒，或采用可在气密袋中进行更换的过滤器，更换后应立即进行消毒或焚烧。每台高效过滤器安装、更换、维护后都应按照经确认的方法进行检测，运行后每年至少进行一次检测以确保其性能。在送风和排风总管处应安装气密型密闭阀，必要时可完全关闭以进行室内化学熏蒸消毒。应安装风机和生物安全柜启动自动联锁装置，确保实验室内不出现正压和确保生物安全柜内气流不倒流。排风机一备一用。在污染区和半污染区内不应另外安装分体空调、暖气和电风扇等。,BSL-3 实验室的环境参数,相对室外大气压，污染区为-40Pa（名义值），并与生物安全柜等装置内气压保持安全合理压差。保持定向气流并保持各区之间气压差均匀。实验室内的温度、湿度符合工作要求且适合于人员工作。实验室的人工照明应符合工作要求。实验室内噪声水平应符合国家相关标准。,BSL-3实验室特殊设备装置（一）,应有符合安全和工作要求的II级或III级生物安全柜，其安装位置应离开污染区入口和频繁走动区域。低温高速离心机或其他可能产生气溶胶的设备应置于负压罩或其他排风装置（通风橱、排气罩等）之中，应将其可能产生的气溶胶经高效过滤后排出。污染区内应设置不排蒸汽的高压蒸汽灭菌器或其他消毒装置。,BSL-3实验室特殊设备装置（二）,应在实验室入口处的显著位置设置带报警功能的室内压力显示装置，显示污染区、半污染区的负压状况。当负压值偏离控制区间时应通过声、光等手段向实验室内外的人员发出警报。还应设置高效过滤器气流阻力的显示。应有备用电源以确保实验室工作期间有不间断的电力供应。应在污染区和半污染区出口处设洗手装置。洗手装置的供水应为非手动开关。供水管应安装防回流装置。不得在实验室内安设地漏。下水道应与建筑物的下水管线完全隔离，且有明显标识。下水应直接通往独立的液体消毒系统集中收集，经有效消毒后处置。,BSL-3 实验室其他要求,实验台表面应防水，耐腐蚀、耐热。实验室中的家具应牢固。为便于清洁，实验室设备彼此之间应保持一定距离。实验室所需压力设备（如泵，压缩气体等）不应影响室内负压的有效梯度。实验室应设置通讯系统。实验记录等资料应通过传真机、计算机等手段发送至实验室外。清洁区设置淋浴装置。必要时，在半污染区，设置紧急消毒淋浴装置。,BSL-4 实验室平面示意图（安全柜型）,-30Pa,主实验室（-40Pa),半污染区(-20Pa),内更衣室（-10Pa),缓冲间(-10pa),女外更衣室,洗消间,安全通道,男外更衣室,外走廊,缓冲间,淋浴间,淋浴间,紧急消毒,BSL-4 实验室平面示意图（正压服型）,主实验室（-40Pa),半污染区(-20Pa),内更衣室（-10Pa),缓冲间(-10pa),女外更衣室,洗消间,安全通道,男外更衣室,外走廊,缓冲间,淋浴间,淋浴间,紧急消毒,化学淋浴,生物支持系统,四级生物安全防护实验室平面示意图（正压服型）,-30Pa,主实验室（-40Pa),准备间(-20Pa),内更衣室（-10Pa),缓冲间(-10pa),-10Pa,女外更衣室,洗消间,外更衣室,男外更衣室,隔离走廊,化学淋浴,淋浴,生物安全实验室一级防护屏障,一级防护屏障 primary barrier 是通过个人防护装备、生物安全柜、负压罩等实现的操作者和被操作对象之间的隔离。,个体防护装备,防护服眼罩手套正压防护服工作鞋或防水靴呼吸器或口罩,生物安全柜类别,一级生物安全柜气流形式,二级生物安全柜气流形式,三级生物安全柜气流形式,其他物理抑制设备,配有高效过滤装置的排气罩（离心机罩）带密封的专用离心杯动物负压箱笼动物隔离器（箱）,应急物品,洗眼器眼部清洗剂消毒液生理盐水,生物安全实验室管理,管理机构安全委员会：负责本实验室所操作生物因子的生物危害评估，审议实验室管理规章制度、标准操作程序、突发事故应急预案等。实验室负责人：对实验室所有员工和来访者的安全负责；负责拟订实验室管理规章制度、标准操作程序、突发事故应急预案等文件；负责培训员工；决定进入实验室人员实验室安全负责人：协助管理层负责安全事宜,管理文件,实验室管理规章制度：如培训制度、准入制度、健康监测报告制度、个人良好行为制度、意外事故报告制度等标准操作程序：如实验废弃物处置标准操作程序、进出实验室标准程序、菌毒种使用标准操作程序、实验室消毒标准操作程序、以外事故处理标准操作程序及各种仪器设备和实验标准操作程序等,BSL-2 标准微生物操作,实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。进行活体处理后，实验人员要洗手；离开实验室前脱手套。不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。不能用嘴移液，只能用机械装置移液。制定锐器安全使用规范。所有的操作过程应尽量细心，避免产生溅出和气溶胶。实验完毕、下班前、活体溅出或溢出时，都应使用对病源有效的消毒剂进行台面消毒。所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关规定。,BSL-2特殊操作（一）,在开展有关传染病源工作时，实验室主任应禁止或限制人员进入实验室。一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室或动物房，例如，患有免疫缺陷或免疫抑制的人，其被感染的危险性增加。实验室主任对每种情况的估计和决定谁能进入实验室或动物房工作，负有最终责任。实验室主任应制定规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊要求(如，经过免疫接种)的人，才能进入实验室。,BSL-2 特殊操作（二）,存在外源性病源时，实验室入口处应贴有生物危险标志，并显示以下信息：有关病源、生物安全级别、免疫接种要求、研究人员姓名、电话号码、在实验室中必须佩带的个人防护设施、出实验室所要求的程序。实验室人员接受适当的、和实验室中处理或将要处理的病源有关的免疫接种或测试(如，乙肝免疫接种或TB皮试)。,BSL-2 特殊操作（三）,根据所处理的病源，适当时，收集和储存适合于实验室人员和有风险人员使用的基本血清样品。根据所处理病源或设施的功能，应定期收集其他血清样品。实验室主任为实验室人员特别制定的标准操作程序或生物安全手册中，应包括生物安全程序。对于有特殊风险的人员，要求阅读并在工作及程序上遵照执行。实验室主任保证实验及其辅助人员接受适当的培训，包括和工作有关的可能存在的风险、防止暴露的必要措施和暴露评估程序。当程序必需改变时，有关人员必须每年更新知识，接受附加培训,BSL-2特殊操作（四）,对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器、毛细管、手术刀。 a针和注射器或其他锐器应限制在实验室内，类似灌肠、静脉切开放血、或实验动物液体吸出等，可以用其他器具的，就不要用锐器。可能时，用塑料器具代替玻璃器具。 b.注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器(即注射器和针头是一体的)。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。 c适当时，使用带针头套的注射器、无针头的系统和其他安全设施。 d打碎的玻璃器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在到掉前，应按照规定进行消毒。,BSL-2 特殊操作（五）,培养物、组织，体液标本，或具有潜在传染性的废物要放入带盖的容器中，以防在收集、处理、储存、运输或装卸过程中泄露。按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照地方、州或联邦的规定消毒；在离开设施转移前，要按照地方、州或联邦的规定打包运输。溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。和实验无关的动物不允许进入实验室,正确使用BSL-2安全设备（一）,任何时候都要使用正确保养的生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。 a确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器(容器内部的压力可能与大气压不一致)、动物鼻孔接种、从动物或胚胎卵采集感染组织。 b涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。,正确使用BSL-2安全设备（二）,当必须在生物安全柜外处理微生物时，需采取面部保护措施(跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置)，以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域(如，咖啡屋、图书馆、门房)时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。戴两副手套更合适。明显污染的手套要处理，当有关传染源工作结束时或手套损伤时，要去掉手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面(键盘、电话等)，也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。,BSL-3安全设备的正确使用,进入实验室时，要穿上实验防护服，如，前襟一体或后系式大褂、干净的外套或连裤服。不得在实验室外穿防护服。重复使用的衣服在清洗前要消毒，衣服被明显污染后应更换。在处理传染源、感染动物及被污染的仪器时，必须戴手套。建议经常更换手套和洗手，一次性手套不能重复使用。有关传染源的所有操作、感染动物的验尸、从感染动物或胚胎卵采集组织或液体等，都应在II级或III级生物安全柜中进行。当操作不能在生物安全柜中进行时，应适当的综合使用个人防护设施(如，口罩，面罩等)和物理遏制设施(如：带安全罩或密封转头的离心机)。当进入内有感染动物的房间时，应采取呼吸和面部保护措施。,BSL-3 标准微生物操作,实验时，由实验室主任决定限制或禁止进入实验室。接触传染源的人员在离开实验室取下手套后，要洗手。实验室内严禁饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。实验室内戴隐型眼镜的人，也要戴眼镜和面罩。食品要存放在工作区外专用的橱柜和冰箱中。不能用嘴移液，只能用机械装置移液。制定锐器安全使用规范。所有的操作过程应尽量细心，避免产生气溶胶。至少每天一次、或有活体洒出时，对工作台面进行消毒。所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。来自BSL3实验室的传染性废物转移至他处释放前应消毒。,BSL-3 特殊操作（一）,实验时，关闭实验室的门。实验室主任对进入实验室进行控制，限制项目有关人员及辅助人员进入。一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室或动物房，例如，患有免疫缺陷或免疫抑制的人，其被感染的危险性增加。实验室主任对每种情况的估计和决定谁能进入实验室或动物房工作，负有最终责任。未成年人不得进入实验室。实验室主任应制定规章和程序，只有告知潜在风险并符合进入实验室特殊要求(如，经过免疫接种)、遵守进出程序的人，才能进入实验室和动物房。当实验室或遏制设施中有传染源和感染动物时，所有实验室和动物房入口处，应贴有危险警告标志和常用的生物危险符号，并显示以下信息：有关病源、实验室主任和有关责任人的姓名和电话表、进入实验室的特别要求(如，必须免疫、戴口罩、或采取其他的个人防护措施)。,BSL-3特殊操作（二）,实验室人员接受适当的、和实验室中处理或将要处理的病源有关的免疫接种或测试(如，乙肝免疫接种或TB皮试)，并建议根据所处理的病源定期进行皮试。适当时，收集和储存适合于所有实验室人员和其他有风险人员使用的基本血清样品。根据所处理病源或实验室的功能，应定期收集其他血清样品。实验室主任应制定实验室专用生物安全手册，标准操作程序中要包括生物安全预防措施。要告知实验人员特殊风险，实验人员要阅读，并在操作和程序中遵照执行。实验人员及其辅助人员应接受适当的培训，包括和工作有关的可能存在的风险、防止暴露的必要措施和暴露评估程序。当程序必需改变时，有关人员必须每年更新知识，接受附加培训。实验室主任有责任确保在涉及BSL3的微生物工作开展之前，所有人员熟练掌握标准微生物操作及技能，熟练掌握特殊实验室设施的操作和运行，其中可能包括人致病菌或细胞培养物处理的重要技术，或由实验室主任或其他熟悉于微生物安全操作及技能的、称职的科研工作者提供的特殊培训课程。,BSL-3特殊操作（三）,必须经常对所有污染的锐器采取高度预防措施，包括针头和注射器、玻片、移液管、毛细管和手术刀。 a针和注射器或其他锐器应限制在实验室内，类似灌肠、静脉切开放血、或实验动物液体吸出等，可以用其他器具的，就不要用锐器。可能时，用塑料器具代替玻璃器具。 b注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器(即注射器和针头是一体的)。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。 c适当时，使用带针头套的注射器、无针头的系统和其他安全设施。 d打碎的玻璃器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在到掉前，应按照地方、州、联邦的规定进行消毒。,BSL-3特殊操作（四）,所有与传染源有关的开放操作，都应在遏制设施内的生物安全柜或其他物理遏制设备中进行。不许在开放的实验台上、并在开放的设施中开展工作。用背面为塑料质地的纸擦拭生物安全柜内的无孔台面，便于清洁。按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源洒出或溅出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。 a洒出的传染源需由专业人员、或由经过适当培训且配有装备的处理高浓度传染源的人员进行消毒、处理、清洗。制定并公布可能造成溅洒的实验程序。 b污染的设备，在离开设施送去修理、维护或打包运输前，要按照地方、州或联邦的规定消毒。,BSL-3特殊操作（五）,培养物、组织，体液标本，或具有潜在传染性的废物要放入容器中，以防在收集、处理、储存、运输或装卸过程中泄露。实验室里所有可能被污染的废弃物品(如：手套、实验室外套等)，在丢弃或重新使用之前，必须经过消毒。洒漏或偶然事件中，明显或可能暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。,讨论,生物安全问题实验室生物安全防护的目的生物安全实验室的构成良好的内务行为个人责任,一、生物安全问题,1.狭义的生物安全问题，是指现代生物技术的研究、开发、应用以及转基因生物的跨国越境转移可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的不利影响。特别是各类转基