重度子痫前期胎盘组织的体视学研究

重度子痫前期胎盘组织的体视学研究南方医科大学硕士学位论文重度子痫前期胎盘组织的体视学研究姓名胡玉芹申请学位级别硕士专业妇产科学指导教师何援利20090409硕士学位论文重度子痫前期胎盘组织的体视学研究硕士研究生胡玉芹指导教师何援利教授摘要一、研究背景子痫前期是妊娠期特有的疾病,是一种多系统功能紊乱并以高血压、尿蛋白水平升高、水肿为主要临床特征的疾病,是导致孕产妇及围产儿病死率升高的主要原因之一。根据血压和蛋白尿程度等,子痫前期可为轻度子痫前期和重度子痫前期,其中重度子痫前期严重威胁着母儿健康。美国学者在年代提出早发型重度子痫前期,的概念,我国学者杨孜等将起病在孕周前的重度子痫前期计为早发之列,在此后发病者称为晚发型,。近年来,己经引起产科、围产医学界的重视和研究兴趣,在妊娠妇女发病率为,占重度子痫前期的,由于该病发病孕周早,病情进展迅速,是引起孕产妇和胎儿死亡的重要原因,怎样预防和治疗是医疗工作者面临的一个棘手的问题。目前的研究对与的发病机制存在争议。等观察胎盘着床部位子宫全层标本的形态学,发现患者的胎盘组织凋亡明显增加,滋养细胞侵入受限,胎盘着床较浅,螺旋小动脉管腔狭窄。等认为,更倾向于是一种胎盘疾病,而则与母体关系更密切些。由于子痫前期病人大都在胎盘娩出后临床症状即很快缓解,故胎盘病理改变与重度子痫前期的关系日益引起人们的重视。胎盘是介于母体和胎儿的个中介性器官,胎盘功能的正常与否直接影响到胎儿的安危,因此学者们将胎盘做为专门课题来研究。随着科学技术的发展,胎盘研究的内容已广泛涉及到组织胚胎、生物化学、生殖免疫及分子生物学等中文摘要领域,但最基本的内容是胎盘病理学研究。近年来,免疫组织化学、体视学及超声学等方法已在胎盘病理学研究中广泛应用,各种病理妊娠胎盘的组织结构、超微结构的改变,基本都可以被观察和检测,从而对临床诊断和治疗起到指导作用。现阶段对重度子痫前期胎盘组织特别是的研究大多是形态学的研究,定量变化的研究相对较少。体视学是由二维结构信息定量推论三维结构信息的一门科学。在重度子痫前期的胎盘研究中应用体视学,能够反映重度子痫前期胎盘组织的定量变化特点。二、研究目的本文通过对重度子痫前期胎盘组织光镜水平及电镜水平的形态学观察和体视学参数测定,探讨重度子痫前期胎盘组织结构的定量变化,进而解释其形态学改变特征与胎儿不良预后之间的关系。三、材料与方法材料材料来源胎盘组织标本取自珠江医院等清新医院、黄岐医院妇产科住院分娩的产妇例,均获得患者知情同意。分组重度子痫前期组按照妇产科学第版重度子痫前期的诊断标准选择住院分娩的重度子痫前期患者胎盘例。将这例标本按照发病孕周分成两组周为晚发型重度子痫前期组组,共例周为早发型重度子痈前期组组,共例。对照组选择同期住院分娩的早产及足月分娩的例胎盘作为对照组。将这例标本按照孕周分为两组周为对照组,共例周为对照组,共例,分别作为组和组的对照组。以上组与对照组、组与对照组之间年龄、孕周、产次等比较均无统计学差异尸。光镜标本的处理及体视学参数测试定胎盘娩出后立即于胎盘的中间带分别贯穿随机切取块大小约为的组织块,经甲醛固定,石蜡硕士学位论文包埋,随机取张切片、进行染色。每张切片在倍物镜下随机拍摄互不重叠的张照片,将拍摄韵照片输入计算机,然后用图像分析软件设计方网测试系统进行测试,方网的点间距为个像素。测试前,首先用物镜测微尺对该网格进行标定,标定后方网的点间距为微米。选用的体视学参数有绒毛毛细血管的体积密度,表面积密度鼬,数密度。用上述方网测试系统测试击中绒毛毛细血管和包容空间的测试点数,计数测试线与绒毛毛细血管的交点数,计数测试区域内绒毛毛细血管的个数。,和密度参数的参照空间为绒毛,数密度的测试以绒毛毛细血管管壁为基准。按文献中相应体视学公式计算出上述参数。电镜标本的处理及测试胎盘娩出后,立即在胎盘母体面底板区的中间带丛密绒毛处不同部位随机取块组织,大小约,放入生理盐水中清洗,洗净血液后浸入的戊二醛溶液中,置于冰箱中保存。经后固定、脱水、浸泡、包埋、修块半薄定位、超薄切片、电子染色后,每个组织块随机取张超薄切片,透射电镜观察绒毛及合体滋养细胞超微结构的变化。每张切片在倍下拍摄互不重叠的照片张,要求随机拍摄,拍摄时附上标尺。将拍摄的电镜照片输入计算机,用图像分析软件设计方网测试系统进行测试,方网的点间距为个像素。测试前,首先用电镜照片标尺对该网格进行标定,标定后方网的点间距为微米。测试以合体滋养细胞为参照系,用上述方网测试系统测试击中线粒体、内质网、微绒毛及包容空间的测试点数,计数测试线与线粒体、内质网、微绒毛的交点数,分别计数测试区域内的线粒体、内质网及微绒毛的个数。按公式计算需测试的各个体视学参数。分析方法分别观察组与对照组,组与对照组之间胎盘组织镜下形态改变及体视学参数之间的差异。数据处理及统计学分析采用统计软件包处理数据所有数据用均数标准差一表中文摘要示,两样本均数比较用独立样本检验,两样本率的比较用检验确切概率法,以萨为显著检验水准。四、结果胎盘绒毛组织光镜下观察结果观察中见对照组胎盘绒毛具有较多合体细胞结节,少见纤维素样坏死绒毛,具有血管合体细胞膜,的绒毛数较多对照组胎盘绒毛少有合体细胞结节,纤维素样坏死较少,具有血管合体细胞膜的绒毛数较多组胎盘绒毛具有较多合体细胞结节,纤维素样坏死较多,具有血管合体细胞膜的绒毛数较少组胎盘绒毛可见合体细胞结节,纤维素样坏死较多,而具有血管合体细胞膜的绒毛数较少。重度子痫前期组的终末绒毛毛细血管的、均小于相应对照组,差异有统计学意义,分别在两组之间比较无统计学差异。胎盘组织电镜下观察结果对照组和对照组胎盘合体滋养细胞表面均有大量的微绒毛,呈细而长,整齐排列,细胞内含有丰富的内质网和线粒体,胞质中有少量的脂质颗粒组胎盘合体滋养细胞表面微绒毛稀少,微绒毛末端膨大,部分合体滋养细胞的微绒毛缺失,线粒体肿胀,内质网明显扩张,部分融合呈囊状,脂质颗粒沉积增多组合体滋养细胞除组的表现外,还出现胞质大量空泡状变性,脂质颗粒明显增多。胎盘合体滋养细胞线粒体的体视学参数组与组胎盘合体滋养细胞线粒体的、均大于相应对照组,两组分别比较,差异有统计学意义线粒体的,组及组与相应对照组比较,差异无统计学意义尸。胎盘合体滋养细胞内质网体视学参数比较组与组胎盘合体滋养细胞内质网的、均大于相应对照组,两组分别比较,差异有统计学意义俨内质网的,组及组与相应对照组比较,差异无统计学意义。胎盘绒毛微绒毛体视学参数组与组胎盘合体滋养细胞微绒毛的、均小于其相应对照组,两组分别比较,差异有统计学意义。围生儿结局组剖宫产结束妊娠例,其中胎儿生长受限硕士学位论文,例,新生儿窒息例,无新生儿死亡组剖宫产结束妊娠例,例,新生儿窒息例,新生儿死亡例。对照组剖宫产结束妊娠例,自然分娩例,无,新生儿窒息及新生儿死亡对照组自然分娩例,例,新生儿窒息例,新生儿死亡例。五、结论重度子痫前期组观察到较多新生儿不良结局。光镜下组和组胎盘绒毛存在缺血、缺氧等病理学表现。电镜下组和组胎盘合体滋养细胞超微结构存在严重的损害。在重度子痫前期环境下,胎盘绒毛及合体滋养细胞超微结构的损伤,引起其生理功能的改变,影响胎盘的运输和合成功能,可能参与胎儿的损伤。关键词子痫前期早发型胎盘体视学硕士学位论文,锄/,、,诵,、析,硕士学位论文,一,、析,、,硕士学位论文,、杪,硕士学位论文南方医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外,本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属南方医科大学。本人承诺承担本声明的法律效果。作者签名向而育日期沪穸年汐日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权南方医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于请在以下相应方框内打“、/”、保密口,在解密后适用本授权书。、不保密囤。作者虢枫面簟日期冲年细夕日别谧各彳多矧醐。年妒卢硕士学位论文一刖舌子痫前期是妊娠期特有的疾病,是导致孕产妇及围产儿病死率升高的主要原因之一【】。根据血压和蛋白尿程度等,将子痫前期分为轻度子痫前期和重度子痫前期,其中重度子痫前期严重威胁母儿健康,使孕产妇、围生儿的死亡率明显升高】。美国学者【在年代提出早发型重度子痫前期,的概念,我国学者杨孜等【】将起病于妊娠周前的重度子痫前期称为早发型,在此后发病者称为晚发型重度子痫前期,。近年来,己经引起产科、围产医学界的重视和研究兴趣,在妊娠妇女发病率为,占重度子痫前期的嘣,是引起母体和胎儿死亡的重要原因【】。目前的研究对与的发病机制存在争议。】等观察胎盘着床部位子宫全层标本的形态学,发现患者的胎盘组织凋亡明显增加,滋养细胞侵入受限,胎盘着床较浅,螺旋小动脉管腔狭窄。等认为,更倾向于是一种胎盘疾病,而贝与母体关系更密切些。由于子痫前期病人大都在胎盘娩出后即表现为临床症状的很快缓解【】,故胎盘病理形态改变与重度子痫前期发病的关系日益引起人们的重视。胎盘是介于母体和胎儿的一个中介性器官,胎盘功能的正常与否直接影响到胎儿的安危,因此学者们将胎盘做为专门课题来研究。随着科学技术的发展,胎盘研究的内容已广泛涉及到组织胚胎、生物化学、生殖免疫及分子生物学等领域。但胎盘研究最基本的内容是胎盘病理学研究。近年来,随着现代科学技术的发展,在胎盘病理研究中,免疫组织化学、体视学及超声学等方法已被广泛应用。各种病理妊娠胎盘的组织结构、超微结构的改变,基本都可以被观察和检测【】,从而对临床诊断和治疗具有指导意义。现阶段对重度子痫前期胎盘组织特别是的研究大多是形态学的研究,体视学是由二维结构信息定量推论三维结构信息的一门科学,是生物形态学定性研究向定量转变的一种方法【。由于胎盘组织形态变化是从量变到质变的过程,缺乏特征性,所以在对胎盘的研究中,体视学应用日益广泛。本文通过对重度子痫前期前言胎盘的光镜水平、电镜水平的形态学观察和体视学参数测定,探讨重度子痫前期胎盘组织结构的形态学改变及定量特征及与新生儿不良预后的关系,为今后重度子痫前期病理生理的进一步研究提供理论依据。硕士学位论文材料与方法一、实验材料研究对象材料来源胎盘组织标本取自珠江医院等清新医院、黄岐医院妇产科年月年月住院分娩的产妇,共例,均获得患者知情同意。分组重度子痫前期组例,重度子痫前期的诊断标准参考妇产科学第版【】血压,/尿蛋白/或血清肌酐“儿,血小板/血升高,血清或升高,持续性头疼或其它脑神经或视觉障碍,持续性上腹不适。将这例标本按照发病孕周分成两组例周为早发型重度子痫周为晚发型重度子痫前期组组,共前期组组,共例。对照组选择同期住院分娩的早产及足月分娩的例胎盘作为对照组。将这例标本按照孕周分为两组周为对照组,共例周为对照组,共例,分别作为组和组的对照组。各组一般临床资料见表。组与对照组孕妇年龄、孕周及产次等比较无统计学差异,组与对照组孕妇年龄、孕周及产次等比较亦无统计学差异尸。要求研究对象月经规则,无慢性高血压,慢性肾炎,糖尿病等内科合并症,无不良烟酒嗜好等。材料与方法表孕妇的临床资料士牙士研究方法分别在光镜和电镜下观察各组胎盘组织的形态学变化,并分别测定各组绒毛毛细血管及合体滋养细胞微绒毛、线粒体、内质网的体视学参数,并分别比较各研究组和对照组组与对照组,组与对照组之间的差异。观察围生儿结局情况,探讨胎盘病理变化对围生儿结局的影响。主要试剂实验试剂试剂配制磷酸盐缓冲液三蒸水枸椽盐缓冲溶液枸椽酸钠枸橼酸三蒸水硕士学位论文甲醛福尔马林纯乙酸调值三蒸水/一中性甲醛甲醛,蒸馏水,磷酸二氢钠,磷酸氢二钠无水,值。戊二醛固定液戊二醛,/,加双蒸水。主要仪器轮转式切片机英公司,冰箱青岛海尔型电热恒温箱上海跃进医疗仪器一厂微波炉倒置生物显微镜日本公司型照相型显微镜日本公司病理图象分析仪德国南方医科大学病理教研室提供图像测试系统透射电子显微镜,日本物镜测微尺材料与方法二,实验方法光镜标本的处理胎盘娩出后立即于胎盘的中间带分别贯穿随机切取块大小约为的组织块,标本均经甲醛固定,石蜡包埋,预先用多聚赖氨酸预处理,采用轮转式切片机对蜡块进行连续切片,切片厚度为,每个组织块随机取张切片,捞组织片于载玻片上,置烤干备用。染色操作步骤石蜡切片脱蜡至水二甲苯分钟二甲苯分钟二甲苯分钟无水乙醇分钟无水乙醇分钟乙醇分钟乙醇分钟乙醇分钟自来水分钟蒸馏水分钟染色苏木素液自来水洗分钟盐酸乙醇分化秒自来水洗分钟的稀氨水返蓝秒自来水洗秒脱水、透明、封固硕士学位论文乙醇秒乙醇秒乙醇分钟无水乙醇秒无水乙醇秒二甲苯分钟二甲苯分钟二甲苯分钟中性树胶封固测试方法及体视学参数测定每张切片在倍物镜下随机拍摄互不重叠的张照片,经显微摄像系统输入计算机,然后像分析软件设计方网测试系统进行测试。方网的点间距为个像素。测试前,首先用物镜测微尺对该网格进行标定,标定后方网的点间距为微米。选用的体视学参数有绒毛毛细血管的,用上述方网测试系统测试击中绒毛毛细血管和包容空间的测试点数,计数测试线与绒毛毛细血管的交点数,计数测试区域内绒毛毛细血管的个数。,和密度参数的参照空间为绒毛,数密度的测试以绒毛毛细血管管壁为基准。按文献中相应体视学公式计算出上述参数【】。电镜标本的处理取材胎盘娩出后,立即在胎盘母体面底板区的中问带的丛密绒毛处不同部位随机取块组织,大小约,放入生理盐水中清洗,洗净血液后浸入的戊二醛溶液中,置于冰箱中保存。标本取材参】的文献报道。后固定饿酸后固定时脱水,丙酮梯度脱水,每级分钟浸泡环氧树脂混合齐,纯丙酮于下浸泡时材料与方法包埋环氧树脂混合剂于下包埋成块修块半薄定位超薄切片工型超薄切片机切片,厚约电子染色醋酸铀和拘椽酸铅双染色透射电镜观察超薄切片测试方法及体视学参数测定每张切片在倍下拍摄互不重叠的照片张,要求随机拍摄,拍摄时附上标尺。将拍摄的电镜照片输入计算机,用訇像分析软件设计方网测试系统进行测试,方网的点间距为个像素。测试前,首先用电镜照片标尺对该网格进行标定,标定后方网的点间距为微米。测试以合体滋养细胞为参照系,用上述方网测试系统测试击中线粒体,内质网、微绒毛及包容空间的测试点数,计数测试线与线粒体、内质网、微绒毛的交点数,分别计数测试区域内的线粒体、内质网及微绒毛的个数。按计算公式计算测试的各个体视学参数。体视学计算公式刀一踟/刀、,/尼注释测试粒子的截面数照片最终光学放大倍数测试网小方格长度参照系测试的点数击中相的测试点数硕士学位论文参照系测试线的长度测试线与相交点数表面积密度单位参照体积中相所占的表面积体积密度单位参照体积相所占的体积数密度单位参照体积相所占的数量三、数据处理及统计学分析采用统计软件包处理数据所有数据用均数标准差表示,两样本均数比较用独立样本检验,两样本率的比较用检验确切概率法,以萨为显著检验水准【。结果结果一、光镜下胎盘组织特点胎盘绒毛组织光镜下观察结果观察中见对照组胎盘绒毛具有较多合体细胞结节,少见纤维素样坏死绒毛,具有血管合体细胞膜的绒毛数较多见图对照组胎盘绒毛少有台体细胞结节,纤维素样坏死较少,具有血管合体细胞膜的绒毛数较多见图组胎盘绒毛具有较多合体细胞结节,纤维素样坏死较多,具有血管合体细胞膜的绒毛数较少见图组胎盘绒毛可见合体细胞结节,纤维素样坏死较多,而具有血管合体细胞膜的绒毛数较少见图。】鬣萝。薰鬻凹对照组染色倍胎盘绒毛少见合体细胞结纤维素样坏死较少,具有血管台体细胞膜的绒毛数较多硕士学位论丈罔篱粥型组染色倍胎盘绒毛可见合体细胞结仃纤维素样坏死较多,而具有血管台体细胞膜的绒毛数较少幽光镜胎盘组织的结构特点各组胎盘终末绒毛毛细血管的体视学参数重度子痫前期组与相应对照组比,均小于对照组,差异有显著意义,在重度子痫前期组与相应对照组之间无统计学差片尸见表一。结果表胎【终末绒毛毛细血管的体视学参数卫组别例数衄/、/胤对照纽士牡纽士四值哪值。周对照组如蜘细士士值仁二、电镜下胎盘合体滋养细胞超微结构的改变胎盘组织电镜下观察结果对照组和对照组胎盘合体滋养细胞表面有大量的微绒毛,呈细而长,整齐排列,细胞内含有丰富的内质网和线粒体,遍布于整个胞质中,胞质中有少量的脂质颗粒分别见罔,。组胎盘合体滋养细胞表面微绒毛稀少,表面微绒毛术端膨大,部分合体滋养细胞微绒毛缺失线粒体肿胀,内质网明显扩张,部分融合呈囊状,脂质颗粒沉积增多见图,。组除组的改变外,台体滋养细胞出现胞质空泡状变性,脂质颗粒沉积增多见图,。凹胎盘台体澈养细胞超微结构特点硕士学位论丈例对【绑胎衙台体滋养细胞袁面覆有浓密微绒毛细胞内禽有丰甯的山质网胞质中有少堵的脂质颗粒。醋酸铀枸椽酸铅染色生对照纽胎盘台体滋养细胞表而覆有浓密微绒毛,细胞山含有十富的内质嗍胞质中有少龋的腊质颗粒。醋酸铀一枸橡酸铅染色幽,胎盘台体滋养细胞微绒毛稀少表面微绒毛末端膨人,部分台体啦荐细胞微绒毛缺走,线粒体肿胀,内质网明显扩张,部分融合早囊状,胞质内大茸的腊质颗粒沉积致密度增高。醋酸铀枸橡酸铅染色,幽月腑龠台体滋养细胞表面馓绒毛稀少,末端膨人都分台体溢养细胞微绒毛缺必,线粒体肿胀早辛泡状变性,内质同水肿早囊泡化胞质内人昔的脂质颗粒沉积。醋酸铀枸橡酸铅染色胎盘台体滋养细胞超微结构体视学参数测定结果胎盘台体滋养细胞线粒体的体视学参数组与对照组胎盘合体滋养细胞线粒体的较,差异尤统训学意义,线粒体的、均大照组,曲组比较差异有统汁学意义结果组与对照组胎盘合体滋养细胞线粒体的较,差异无统计学意义,线粒体的、均大于照组,差异有统计学意义见表。胎盘合体滋养细胞内质网体视学参数比较组与对照组胎盘合体滋养细胞内质网的比较,差异无统计学意义,内质网的、均大于对照组,差异有统计学意义尸组与对照组胎盘合体滋养细胞内质网的比较,差异无统计学意义,内质网的、均大于对照组,差异有统计学意义见表。表胎盘合体滋养细胞线粒体体视学参数只士厅表胎盘合体滋养细胞内质网体视学参数牙刚牙士硕士学位论文胎盘绒毛微绒毛体视学参数组胎盘合体滋养细胞微绒毛的、均小于对照组,差异有统计学意义组与对照组胎盘合体滋养细胞微绒毛的、均小于对照组,两组比较差异有统计学意义见表。表胎盘合体滋养细胞微绒毛体视学参数只士士三、围生儿结局,组剖宫产结束妊娠例,其中胎儿生长受限例,新生儿窒息例,无新生儿死亡组剖宫产结束妊娠例,例,新生儿窒息例,新生儿死亡例。对照组剖宫产结束妊娠例,自然分娩例,无,新生儿窒息及新生儿死亡对照组自然分娩例,例,新生儿窒息例,新生儿死亡例。由于本实验取材例数较少,组与对照组、组与对照组之间比较、新生儿窒息,新生儿死亡等方面相比,差异无统计学意义。结果表各组围生儿结局的比较硕士学位论文讨论子痫前期是妊娠期常见而又严重危害母儿健康的疾病,临床表现多为一过性高血压、蛋白尿等症状,分娩后即缓解。本病的基本病理生理变化是全身小血管痉挛,全身各系统各脏器灌流减少,对母儿造成危害,甚至导致母儿死亡。由于发病早、病情进展迅速,更是对母儿的预后存在严重的威胁,成为医疗工作者面临的棘手问题。其病因及发病机制不明,主要有遗传、免疫,胎盘浅着床及血管内皮损伤等因素。由于子痫前期病人大都在胎盘娩出后即表现为临床症状的很快缓解,故胎盘病理形态改变与重度子痫前期发病的关系日益引起人们的重视。一、胎盘研究的现状胎盘是介于母体和胎儿的一个中介性器官,胎盘功能的正常与否直接影响到胚胎的生长发育。随着科学技术的发展,胎盘研究的内容已广泛涉及到组织胚胎、生物化学、生殖免疫及分子生物学等领域【】,但胎盘研究最基本的内容是胎盘病理学研究。近些年来,随着现代科学技术的发展,在胎盘病理研究中,光镜、电镜、免疫组织化学及超声学等方法已被广泛应用【,多种病理妊娠胎盘的组织结构、超微结构的改变,基本都可以被观察和检测,从而指导临床诊断和治疗。目前,对一般妊娠期高血压疾病胎盘组织的研究已经很多,但是对重度子痫前期胎盘超微结构的定量改变,特别是针对胎盘定量改变的研究较少。本实验观察了重度子痫前期胎盘组织包括和的病理形态改变,并且对其胎盘绒毛毛细血管及合体滋养细胞超微结构进行体视学参数的测定,从而揭示胎盘结构与新生儿不良预后的关系,为重度子痫前期病理生理的进一步研究提供理论依据。二、关于体视学及体视学参数的选择体视学概念讨论由二维结构信息定量推论三维结构信息的科学称为体视学】。体视学的研究内容包括从二维结构推论三维结构的原理、方法及应用。用体视学原理和方法研究生物组织的三维结构,并根据生物组织的结构特点研究相应的体视学测试方法为生物体视学。生物体视学是体视学的一个分支。体视学的常用名词和参数选择在体视学上把包含结构成分的某一空间定义为包容空间也叫参照系。例如,在细胞中,线粒体、溶酶体、细胞核等是结构成份,细胞包含了这些结构成份,因此细胞可作为这些结构成份的的包容空间。本质相同的结构成份的集合成为相。例如一个细胞中所有的线粒体就构成该细胞的线粒体相。体视学参数包括密度参数、尺寸参数、形状参数、分布参数等。其中体视学的密度参数是指单位体积中所包含结构成分的体积、表面积、长度、曲度和粒子数的大小或多少,用通式/表示,表示体视学的某一密度参数表示包容空间中相的数量特征,如体积、表面积等的大小表示包容空间的体积,也即所定参照系的体积。如体积密度是指单位体积中相的体积,数密度是指单位体积中相的粒子数等等。本实验选择使用了密度参数、,在光镜下测试重度子痫前期组和对照组胎盘单位体积内绒毛毛细血管的体积、表面积的大小和数的多少,以及在电镜下测试合体滋养细胞线粒体、内质网和微绒毛体积、表面积的大小和数的多少,从而探讨重度子痫前期环境下胎盘绒毛及合体滋养细胞超微结构的损伤程度。体视学结果的影响因素及胎盘组织标本的取材方法体视学的大量测试工作一般都是在二维图像上进行的【。因此体视学测试结果受很多因素的影响,其结论与样品数、取材方法、部位、固定方式和制片过程等因素有关。本研究样品的例数、组织块数等的选择,是按照申洪所编著的常用样品含量确定。由于胎盘体积大,自胎盘的胎儿面至母体面的不同层次内,绒毛干一再分支,各层次内母血流量分布亦不完全一致,而测试部位又仅是其中极小的一部分,故想从所得参数中推算整个胎盘的各项指标,必须考硕士学位论文虑如何科学地取材和测试。系统取材、随机抽样的方法已被公认为有效的方法。因此,随机抽样是体视学测量的基本要求,必须避免主观因素对抽样的影响。对于胎盘的取材部位是否具有代表性尚有争议。有人认为胎盘组织基本上是均质分布的,较早研究中将正常胎盘分成不同区域和不同平面进行研究,并发现绒毛纤维化、绒毛滋养细胞层基底膜增厚及合体血管膜形成在绒毛板区和底板区间有显著性差异,在胎盘的中央带与边缘带也有差异。国内刘伯宁【】应用图像分析仪对足月妊娠胎盘不同平面的体视学研究结果显示,底板区与中间区绒毛总数、绒毛体积密度、绒毛表面积密度无显著差异,而与绒毛板区相比有显著差异,电镜水平的测试显示绒毛板区与底板区的微绒毛表面积密度和微绒毛间腔表面积密度无显著差异。本研究要求严格在胎盘中央带、中间带的底板区取材。此外,在取材及样品制备中随机取样,取材及时、新鲜、一致,最大限度的避免了制作过程组织收缩以及其它因素引起的偏差。另外细胞的体视学的许多公式是在切片厚度的极限为零的条件下推导出来的,实际观察的生物组织切片都具有一定的厚度,当所研究的粒子直径明显大于切片厚度时,可忽略不计。三、重度子痫前期胎盘组织绒毛的结构特点及其意义正常妊娠胎盘呈盘状,多为椭圆形或圆形,中央向周围边缘逐渐变薄。胎盘分胎儿面和母体面,胎儿面边缘被覆羊膜呈灰蓝色、光滑半透明,脐动静脉丛附着处分支向四周呈放射状分布直达胎盘边缘。母体面紫红色较粗糙无膜覆盖,为剥离后的底蜕膜,蜕膜间隔形成若干浅沟分成小叶。胎盘末梢绒毛是胎盘的一个功能亚单位,早期绒毛发育成晚期绒毛是成熟老化的过程,与胎盘营养交换程度相平行【。由于绒毛的继续分支及间质结缔组织水肿的消失,成熟过程主要特点是末梢功能单位直径的逐渐缩小,随妊娠进展绒毛数目增多,体积变小。本文资料显示对照组可见合体细胞结节,合体细胞结节是由合体细胞核退化浓缩凝讨论集成的多核结节,是绒毛滋养细胞的一种自然老化和退化现象【,因此,在正常对照组中可能有少量合体细胞结节出现对照组因胎盘取自周的孕妇,胎盘未完全成熟故合体细胞结节少见而组满视野可见合体细胞结节,可能推测胎盘处于严重老化或趋于老化状态,这也可能是组胎盘功能减退,新生儿窒息增高的原因之一在组胎盘虽同样取自周孕妇,但可多见合体细胞结节的存在,这提示在重度子痫前期环境下,胎盘功能可能出现的提前退化现象。在组和组胎盘组织中均发现了众多纤维素样坏死绒毛,绒毛发生这种改变的机制尚不明确,但大量的研究显示这是胎盘缺氧状态下的特征改变,这表明和时均可能存在胎盘缺氧的可能。研究还发现组和组胎盘组织中少见血管合体细胞膜的存在。血管合体细胞膜是由于合体细胞核消失,胞浆变薄,这种细胞位于扩张的血管周围,则光镜下看起来似与血管壁融合而形成,研究认为【】这种血管合体细胞膜有利于母体与胎儿的气体交换,组和组少见绒毛的存在,因此这可能胎盘供氧障碍的因素之一。绒毛毛细血管密度参数、是以三维结构为基础来衡量绒毛毛细血管的定量特征。反映了单位体积内血管体积的大小,表明单位体积内血管表面积的大小,反映单位体积内血管数目的多少。本文资料发现重度子痫前期组与相应对照组相比、均小于对照组,差异有统计学意义尸,即单位体积内绒毛毛细血管的体积、血管数量少于其对照组。在重度子痫前期组与相应对照组之间比较无统计学差异胗,这可能是由于血管形态发生迂曲变化的结果。这样重度子痫前期时,胎盘的有效血流量减少,可推测重度子痫前期组患者存在血供障碍。四、重度子瘸前期胎盘合体滋养细胞超微结构的变化特点及临床意义合体滋养细胞的生物学功能在胎盘功能中起主导地位,它的生理功能受损,必然影响到胎盘的气体交换,营养物质输送及内分泌功能,从而威胁胎儿的健硕士学位论文康【引。本实验中对照组与对照组胎盘合体滋养细胞表面均有大量排列整齐致密的微绒毛,呈指状,胞质内含丰富的粗面内质网和线粒体,且形态规整。绒毛间质内有丰富的毛细血管,少量胶原纤维。线粒体常呈圆形或卵圆形,粗面内质网发达,游离核糖体丰富。细胞核呈近似长方形,染色质团分布较均匀。微绒毛是细胞的特化结构,构成了绒毛的刷状缘,增加了合体滋养细胞与母血接触的表面积,有利于胎儿营养物质的摄入。微绒毛表面是质膜,内部是细胞质的延伸部分【。微绒毛长度和数量与细胞代谢活动强度有着相应的关系】,微绒毛长,多,细均表明绒毛顶部的吸收作用强。微绒毛的各种运输系统如微丝和特殊受体等超微结构,有利于小泡的形成,故微绒毛的出现,不仅增加了合体滋养细胞与母血接触的面积,且可促进微绒毛间腔的微胞饮作用【】。人类胎盘合体滋养细胞中营养物质的转运,包括微绒毛和胞饮作用的特殊运输系统,其功能与微绒毛及其所含微丝的密度和合体滋养细胞表面的微绒毛间腔密度直接相关,这些结构是胎盘功能的形态学基础【。本实验镜下观察发现组和组胎盘合体滋养细胞表面微绒毛稀少,微绒毛末端膨大,部分合体滋养细胞微绒毛缺失。体视学结果显示组和组微绒毛的、均小于相应对照组。这些病变说明重度子痫前期时存在对细胞具有损伤性的因素,而部分合体滋养细胞对此敏感,作为母胎循环接触面的第一屏障微绒毛,易先受损。随着病情进一步发展,损伤因素持续存在,细胞出现表面微绒毛的丧失,甚至细胞膜的破裂及细胞器的溶解。我们在研究中也观察到部分细胞表面变得光滑,微绒毛缺失严重。合体滋养细胞微绒毛为适应胎儿所必须的物质交换,从而代偿性加大剩余微绒毛的表面积和体积,故有微绒毛末端膨大现象的存在引。细胞器是细胞的功能单位,其内含有生物氧化磷酸化有关的三羧酸循环、电子传递和营养物质的合成及分解代谢等所需要的酶类,也是细胞内生物氧化磷酸化和新陈代谢的重要场所。所以其结构、功能的正常对维持细胞正常生理功能十分重要。线粒体是细胞呼吸代谢和能源供应站,与细胞的生命活动有非常密切的关系,同时对各种损伤因素也极为敏感,受损的线粒体将减少甚至不讨论能合成细胞维持正常功能所需的,由此引起的质膜离子泵功能障碍,将导致细胞外液流入胞质内并引起细胞水肿或坏死,因此线粒体肿胀是细胞衰老和缺氧最常见的病理改变。在实验中我们发现,组和组线粒体均出现肿胀、扩张的现象,由正常的梭形变为圆球形,线粒体嵴显示不清,其体视学参数虽相对于其对照组无明显变化,但、却显著大于其相应对照组尸,是细胞功能改变或各种影响因素作用于细胞的最早的反映,与组织器官的生物功能障碍密切相关。这可能是重度子痫前期时胎盘功能受损的病理表现之一。内质网是细胞质中由膜围成的管状或扁平囊状的结构,互相连通成网,构成细胞质中的扁平囊状系统,内质网的存在大大增加了细胞内膜的表面积,为多种酶特别是多酶体系提供了大面积的结合位点。内质网的功能是参与蛋白质的合成与转运,蛋白质的加工,脂类代谢、糖类代谢和解毒作用。研究中发现组和组内质网均出现囊状扩张,其体视学参数虽相对于其对照组无明显变化,、却显著大于其相应对照组尸,这样囊状变化是内质网致使核糖体脱落,内质网受到一定程度的损伤,则蛋白质合成及运输受阻,多种抗原类物质生成及脂质代谢障碍,从而造成整个胎盘的损伤。实验中还见组和组有多量脂质颗粒沉积,这可能系重度子痫前期环境下合体滋养细胞的另一种病理表现。脂质颗粒是溶酶体的一种正常代谢产物【。重度子痫前期