[word格式] 海南地区zeta链蛋白检测在东南亚型α-地中海贫血筛查中的应用价值

海南地区ZETA链蛋白检测在东南亚型地中海贫血筛查中的应用价值中国优生与遗传杂志2008年第16卷第2期15海南地区ZETA链蛋白检测在东南亚型O一地中海贫血筛查中的应用价值覃西,吴洁,柯丽琴,黄燕妮海南医学院检验系,海口市570102摘要目的以0/,一地中海贫血基因检测结果为标准,探讨ZETA链蛋白检测在0/,一地中海贫血东南亚缺失型L临床筛查中的应用价值方法随机收集634例EDTAK2抗凝全血标本,采用酶联免疫法检测人外周血细胞中ZETA链蛋白,同时提取全血DNA,采用多重PCR结合电泳法检测标本0【一地中海贫血基因结果634例全血标本经酶联免疫法检测ZETA链蛋白阳性L13例阴性521例ZETA链蛋白阳性标本中经基因检测全部确诊为0【一地中海贫血东南亚缺失型,阴性中无0【一地中海贫血东南亚缺失型ZETA链蛋白检测0【一地中海贫血东南亚缺失型灵敏度为100,特异度为100,假阳性率0假阴性率O,阳性试验的预示值100,阴性试验的预示值100结论酶联免疫法检测ZETA链蛋白是一种简便,快速检测0【一地中海贫血东南亚缺失型的方法,可用于临床大规模筛查关键词0【一地中海贫血东南亚缺失型ZETA链蛋白酶联免疫法,中图分类号1155671文献标识码A文章编号10069534200802001503CLINICALVALUEOFZETAGLOBINCHAINSANALYSISIN一一OCTHALASSEMIADIAGNOSISQINXIN,WU,”一G,HUANGYANNIDEPARTMENTOFCLINICLABORATORYOFHAINANMEDICALCOLLEGE,HAIKOU570102,HAINANABSTRACTOBJECTIVETOEVALUATECLINICALVALUEOFZETAGLOBINCHAINSIN一一0【一THALASSEMIAANDTAKINGGENEDIAGNOSISASTHESTANDARDMETHODSCOLLECTING634CASESOFBLOODSAMPLESANTICOAGULATEDWITIEDTAL2EACHSAMPLEWASSCREENEDFORZETAGLOBINCHAINSBYENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYATTHESAMETIMEGENOMEDNAWASEXTRACTEDANDPCRFOLLOWEDBYELECTROPHORESISWASUSEDTOTEST0【GLOBINGENERESULTSENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYSHOWEDTHATAMONG634SAMPLES,113WERECONFIRMEDTOBEZETAGLOBINCHAINSPOSITIVEOTHERSTOBENEGATIVEANDGENEDIAGNOSISPROVEDTHATALLTHESEZETAGLOBINCHAINSPOSITIVES锄一PLESWERE一一0【一THALASSEMIAANDZETAGLOBINCHAINSNEGATIVESAMPLESWERENOT一一邬0【一THALASSEMIATHESENSITIVITY,SPECIFICITY,FALSEPOSITIVERATE,FALSENEGATIVERATE,POSITIVEPREDICTIVEVALUESANDNEGATIVEPREDICTIVEVALUESWERE100,100,0,0,100AND100RESPECTIVELYCONCLUSIONENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYFORZETAGLOBINCHAINSCANTEST一一0【一THALASSEMIASIMPLYANDRAPIDLYANDISVALUABLEINPOPULATIONSCREENINGPROGRAMSKEYWORDS0【一THALASSEMIA一一0【一THALASZEMIAZETAGLOBINCHAINSENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYA一地中海贫血简称Q一地贫是世界上最常见的人类单基因遗传性血液病之一,东南亚包括我国南方是该病的高发区其发病是由于A一珠蛋白基因突变导致A一珠蛋白肽链合成障碍,从而造成血红蛋白合成减少广东和广西两省区的人群0【一地中海贫血基因携带率高达8531119_LJ,海南地区发生率为45135,而黎族人群基因携带率可高达55L2J目前全世界已发现至少有81种Q一珠蛋白基因突变,其中东南亚缺失型为我国三种最常见突变类型之一_3J已阐明95以上的0【一地贫缺失类型是东南亚缺失型一一J,且该缺失型在人群中的基因携带率约为4目前对于地贫尚无根本有效的治疗方法,只有通过遗传筛查和产前诊断才能有效杜绝重症地贫患儿的出生基因检测是诊断6【一地贫最可靠的方法,已得到临床的普遍认可J但费用较昂贵,且操作繁琐,技术要求较高,需要依靠专业实验室才能完成检测,不利于大规模人群筛查因此准确,快速,简便的检测出A一地贫东南亚缺失型具有重要意义国外已有报道利用酶联免疫法ENZYMELINKEDIMMFINOSORBENTASSAY,ELISA检测ZETA链蛋白筛查0【一地贫东南亚缺失型SOUTHEASTASIANDELETION,一一的方法J,但国内未见临床应用报道本研究即以基因检测作为A一地贫诊断标准,探讨ELISA法筛查0【一地贫东南亚缺失型的临床应用价值资料与方法1标本来源634例EDTA抗凝全血标本,356例来自2006年12月2007年3月期间来海南医学院附属医院就诊的门诊和住院病人,278例为2007年6月采集黎苗族妇女标本,一70保存备用2检测试剂和仪器东南亚型0【一地贫ZETA链蛋白检测试剂盒由南方医科大学提供,全血DNA快速提取试剂盒和A一地贫基因检测试剂盒购自深圳亚能生物技术有限公司,由珠海海泰生物制药有限公司提供酶标仪为美国热电雷勃MK3酶标仪,聚合酶链反应POLYMERASECHAINREACTION,PCR扩增仪为珠海黑马HEMA4800型电泳仪为北京六一仪器厂的BYCP一31D水平电泳仪3方法1ZETA链蛋白检测双抗体夹心酶联免疫法定性检测血液中ZETA链蛋白,操作严格按照试剂盒使用说明书进行,同时按照要求设立阴,阳性及临界对照依据试剂盒提供的标准判断结果,即在阴性对照孔吸光度OD015,临界对16中国优生与遗传杂志2008年第16卷第2期照孔OD020,阳性对照孔OD050的前提下,若测定孔OD临界对照OD值平均值,则判为东南亚型缺失一一阳性如测定孔OD临界对照OD值的平均值085,则判为东南亚型缺失一一阴性OD值介于两者之间,判为东南亚型缺失一一临界阳性,如遇到此种情况,则需复查2一地贫基因检测全血DNA提取按照全血DNA快速提取试剂盒操作说明提取全血基因组DNA,后采用12琼脂糖凝胶电泳鉴定提取DNA的质量稳压68V/CMPCR扩增采用单管四重PCRGAPPCR技术一地贫PCR反应体积25L,扩增条件96C变性15MIN一9845S科OC1M30S一72OC3M35个循环一72延伸5MIN每次均设阴性,阳性对照扩增产物分析取一地贫扩增产物20TD与2电泳加样缓冲液20混匀,12琼脂糖凝胶电泳稳压68V/CM分析PCR产物DNA,紫外灯下观察结果4数据统计以基因检测为标准,计算ZETA链蛋白检测筛查一地贫东南亚缺失型的灵敏度,特异性,准确性,阴性预测值NPV和阳性预测值PPV结果634例全血标本经酶联免疫法检测ZETA链蛋白阳性113例,阴性521例ZETA链蛋白阳性标本中经基因检测全部确诊为一地中海贫血东南亚缺失型,阴性中无一地中海贫血东南亚缺失型,见表1经计算,ELISA法检测ZETA链蛋白筛查东南亚型缺失一一灵敏度为10O,特异度为100,假阳性率0,假阴性率0,阳性试验的预示值100,阴性试验的预示值100表1评价试验真实性归纳表讨论一一大部分只是无症状基因携带者,但相互婚配子代可能出现东南亚型缺失纯合状态一一/一一,可引起致死的HBBARTS水肿综合征,患有该病的几乎所有胎儿均夭折于妊娠晚期或生下即死亡,并大大增加了母体罹患严重的先兆子痫,难产,产前后出血和羊水过多等致死性并发症的风险此外,东南亚型缺失还可合并其他一地贫基因突变,引起中,重度贫血及严重影响生命质量的HBH病因此,一一检测对于预防一地中海贫血,提高人口素质至关重要ZETA链蛋白即珠蛋白链是由珠蛋白基因簇上的基因合成,是胚胎期血红蛋白的特有成分,存在于所有的胚胎与脐血中胚胎1730周时ZETA链约占血红蛋白的027015胚胎3137周为014011正常新生儿8O镌的脐血可检出,出生后3个月基因关闭,ZETA珠蛋白链将不再合成,而由开放的基因合成珠蛋白链,因而出生后半岁以上儿童及成人体内不能检出ZETA链东南亚型缺失一一基因携带者,水肿胎及HBH患者虽然全部或部分缺失了位于编码血红蛋白的珠蛋白基因簇上的两个基因,却保留了珠蛋白基因,故他们体内仍有非常少量的ZETA珠蛋白链持续表达于婴儿期及成人期,因此均可检出ZETA链,即ZETA链是东南亚型缺失一一一地贫的标志性蛋白利用这一特殊的蛋白制备单克隆抗体可用于对东南亚型缺失一一一地贫基因携带者进行筛选和诊断早在1989年CHUI等就利用了放射性同位素标记的单克隆抗体检测表达ZETA链的红细胞,并进一步建立应用酶联免疫吸附法测定ZETA链蛋白的方法,完善后的双抗体夹心法与地中海贫血诊断金标准分子生物学检测的比较,其敏感度和特异性分别为893964和982100目前国内已成功地研制出ZETA链蛋白单克隆抗体,但无临床应用报道2006年吴洪秋等人比较了ELISA法和血液学分析法检测一一携带者灵敏度,特异性,并比较了两者诊断一一携带者的临床应用价值,结果表明ELISA法诊断价值优于血液学分析法国内外已有研究表明ELISA法检测ZETA链蛋白是一种很有价值的筛查一一的技术手段该法不但能完全筛出一一/病例,而且还能检测出一一合并8一地贫特征的病例同时,该法检测的通量大,易于自动化操作简便,快速而又经济,且对技术和实验室设备的要求不高,故特别适合于那些实验室条件比较差的基层医疗卫生单位如该法常规地应用于小细胞低色素症个体将大大改善临床常规实验室检测一一携带者的能力,并对以控制重型一地贫出生为目标的婚前或产前一一携带者大样本人群遗传筛查的计划有着重要的实用价值本课题采用双抗体夹心酶联免疫吸附法ELISA检测ZETA链蛋白,一地中海贫血基因检测作为标准,对ELISA法作为临床常规筛查东南亚型缺失一一的方法进行评价结果显示,ELISA法检测ZETA链蛋白筛查东南亚型缺失一一灵敏度为100,特异度为100,假阳性率0,假阴性率0,阳性试验的预示值100,阴性试验的预示值100显示高的灵敏度,特异度和准确度,且与已有研究结果相近,这表明ELISA法能有效地检测出东南亚型缺失一一“携带者综上所述,ELISA法是一种很有价值的筛查东南亚型缺失一一A一地贫携带者的技术手段,可用于大规模人群筛查参考文献1徐湘民,等单管多重PCR快速检测中国人三种常见缺失型D一地中海贫血基因J中华医学遗传学杂志,20054,222180一L842姚红霞海南黎族地中海贫血的研究现状J中国现代医学杂志,2004,1143273293毛江洪,霍晓春D一地中海贫血的研究现状J实用临床医学,2005,631346下转第69页中国优生与遗传杂志2008年第16卷第2期69讨论1孕前BMI及增长与妊娠并发症的关系孕期体重指数BMI由体重和身高计算得出,反映了孕妇的营养状况和基础营养条件,是确定孕妇体重增加标准简单可靠的方法随着生活水平的提高,我国人民的膳食结构和营养状况发生了很大的变化,育龄妇女孕前体重基数逐渐增加,肥胖妇女也逐渐增加本组研究结果表明,超重及肥胖妇女妊娠后,妊娠期高血压疾病,子痫前期,妊娠期糖尿的发生率高于正常组妊娠期高血压疾病,子痫前期的发生是多种因素参与的结果,肥胖是其中之一文献报道,肥胖妇女常有内分泌代谢紊乱,易造成脂,糖代谢的紊乱血脂代谢紊乱可能与胎盘粥样硬化导致妊娠期高血压疾病的发生肥胖与孕期发生妊娠期高血压疾病,妊娠期糖尿病有关无论肥胖与否,当孕妇孕期BMI增幅过高时,妊娠期高血压疾病,子痫前期,妊娠期糖尿病的发生率也将明显增加,这与孕妇孕期营养过剩,活动减少,使能量摄人大于能量消耗,孕妇及其胎儿内分泌代谢平衡失调有关孕期应采用合理的饮食结构,进行适宜的体力活动,使妊娠中晚期BMI增长幅度保持在正常范围,以控制妊娠期高血压疾病,妊娠期糖尿病的发生发展,对于孕13周时BMI较高的那些可能发生妊娠期并发症的孕妇更重要2孕前BMI及增长与妊娠结局的关系母体的营养状况对胎儿的生长发育起重要作用,有学者认为,肥胖孕妇巨大儿的发生率明显增加本研究发现肥胖组孕妇巨大儿发生率明显高于正常组,差异有高度统计学意义P0O1,随之而来,难产率剖宫产,阴道助产肥胖组,超重组的也明显高于正常组胎儿宫内窘迫的发生率也高于正常组但三组产后出血率相比较,差异无统计学意义,分析原因可能与提高了对肥胖产妇的产前认识,加强了围产儿监护,对肥胖孕妇的剖宫产术前准备充分以及术中术后及早使用宫缩素等原因有关妊娠后,由于胎儿的发育,子宫,乳房的增大,血容量,组织液的增加,孕妇的体重随妊娠的进展不断增加目前研究认为J过多的体重增加与异常产,巨大胎儿有关资料显示,孕期体重增加越多,巨大儿的发生率越高,难产率也明显增高,这可能与肥胖影响腹肌受缩力,加之盆底组织过厚,外阴脂肪堆积等因素,造成胎头下降阻滞,不利于胎头娩出有关,此时,新生儿窒息的发生率也明显增高,但各组产后出血率相比较仍无统计学意义本研究发现,BMI23的孕妇的巨大儿发生率明显高于BMI23者,而分娩巨大儿者孕期体重增加明显由此可见,肥胖应作为高危因素进行监护对孕前BMI23的妇女来说,应调整饮食,加强体育锻炼,增加体力活动,调整代谢功能正常妊娠期一般孕妇平均增重125KG,肥胖孕妇体内储存脂肪多,可以供给一部分能量消耗,节约葡萄糖共给胎儿,因此认为肥胖孕妇的孕期增重以79KG为宜J妊娠后应加强指导,妊娠32周后应估计胎儿体重,若胎儿过大,尤其有糖耐量异常者应控制血糖因此,应重视孕期BMI在孕期保健中的意义,以减少因体重增加过多而引起的孕产期并发症和新生儿并发往的发生,提高围产儿质量,降低剖宫产率参考文献1严仁英,主编围产医学基础M北京人民卫生出版社,19892522LAMMER,RANTAKAUIOP,HARTIKAINENA,ETA1PREPREGNANCYWEIGHTANDITSRELATIONTOPREGNANCYOUTCOMEJJOBSTETGYNECOL,1995L569753吴琦嫦,李素芸孕前体重指数及孕期体重增长对妊娠结局的影响J中华围产医学杂志,2001,42814金世宗孕妇过度肥胖对围产期的影响J中国优生优育杂志,L998,3331421445THORSDOTTIRI,TORFADOTTIRJE,BIRGISDOTTIRBE,ETA1WEIGHTNINWOMENOFNORMALWEIGHTBEFOREPREGNANCYCOMPLICATIONSINPREGNANCYORDELIVERYANDBRITHOUTCOMEJOBSTETGYNECOL,2002,99799806收稿日期20070525上接第16页4王莉OT一地中海贫血的诊治进展J国际儿科学杂志,20067,3352582605XUXM,ZHOUYQ,LUOGX,ETA1THEPREVMENCEANDSPECLRAMOFANDBETATHALASSEMIAINGUANGDONGPROVINCEIMPLICATIONSFORTHEFUTUREHEALTHBURDENANDPOPULATIONSCREENINGJJCLINPATHOL,2004,575175226汤丽霞,李仲笑,张晶,等血红蛋白A2在地中海贫血筛查中的应用价值J中国循证医学杂志,2005,51475O71AFFERTYJ,CROWTHERM,WAYEJS,ETA1ARELIABLESCREENINGTESTTOIDENTIFYADULTCARRIERSOFTHE一一ALPH