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文档简介

1、第 十五 章 DNA的复制、修复和重组,1.遗传图,各基因沿染色体相对顺序和位置的排列图,2.DNA复制的一般规律,半保留复制、复制有特异原点及方向(复制叉);半不连续复制,复制子,复制子是独立完成复制的功能单位,前导链、滞后链、冈崎片段,3.大肠杆菌DNA聚合酶,1) 催化活性及特点,dNMP)n + dNTP (dNMP)n+1 + PPi,模板;引物、底物、连续性,2)DNA聚合酶 I的3种催化活性,聚合活性: 53 3 5外切酶活性:校对,能辨认错配的碱基对,并将其水解。 5 3外切酶活性:能切除引物,产生切口平移,大片段/Klenow 片段,木瓜蛋白酶, DNA聚合酶活性 ; 5 核

2、酸外切酶活性,3)为什么DNA聚合酶I不是大肠杆菌的复制酶,复制速度慢:16-20核苷酸/秒 复制连续性低:约50核苷酸 基因缺陷株可存活,4)DNA聚合酶I、II、III功能异同,同:53聚合活性, 3 5外切酶活性 异:I: 53外切;校对、切除引物 II:修复 III:复制酶,4.参与DNA复制的酶及蛋白因子,DNA聚合酶 解螺旋酶 SSB DNA拓扑异构酶 引物酶 连接酶 DnaA蛋白 HU:类组蛋白 Dam甲基化酶:甲基化原点GN6ATC顺序,5.大肠杆菌DNA的复制分三个阶段,复制起始 复制原点:共有序列3x13bp、4x9bp;一些遗传元件中反复出现且很少有改变的DNA序列 DN

3、A解开成单链,提供模板 甲基化调节 DNA片段的合成及延长:不对称DNA聚合酶III二聚体将滞后链模板弯曲前导链、滞后链聚合反应位点靠拢协调合成:DNA聚合酶I去引物、填补空缺,连接酶连接冈崎片段 复制终止:终止序列ter 与终止蛋白Tus 结合阻断复制的进行,6.真核细胞DNA的复制端粒、端粒酶,端粒 真核生物染色体线性DNA分子末端的结构 末端DNA序列是多次重复的TxGy短序 端粒酶 端粒酶RNA;端粒酶逆转录酶;端粒酶协同蛋白,7. 突变,遗传物质的结构改变而引起的遗传信息(碱基序列)改变,均可称为突变,错义突变:由于密码子的突变导致蛋白质中原来的氨基酸被另一种氨基酸取代为错义突变 无

4、义突变:当氨基酸密码子突变为终止密码子时为无义突变。它导致翻译提前结束而产物失活。 沉默突变:突变影响非必需DNA或突变对基因功能的影响可忽略 回复突变:突变克服第一次突变造成的影响,7.点突变的结果,8. DNA损伤的修复,甲基指导的错配修复,标签:模板链GATC序列中腺嘌呤N6甲基化 MutL-MutS蛋白复合物识别错配位点 与MutL-MutS复合物结合; MutH于半甲基化处剪切互补的非甲基化GATC之5G碱基处 外切酶切除损伤片段 DNA聚合酶III补充缺口 连接酶,碱基切割修复,DNA糖基化酶识别碱基脱氨、烷基化等损伤,切除受损碱基产生AP位点 AP核酸内切酶在AP位点剪切 DNA聚合酶I去除损伤片段、补充缺口 DNA连接酶,核苷酸切割修复,ABC核酸酶切除损伤片段 DNA聚合酶I去除损伤片段、补充缺口 DNA连接酶,直接修复光复活修复(胸腺嘧啶二聚体,重组修复 同源重组,不消除错误的复制后修复,SOS修复 当DNA损伤广泛难以继续复制时,由此而诱发出一系列复杂的反应。 这种修复特异性低,对碱基的识别、选择能力差,9. 同源重组:两

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