疫浊度测定及其临床应用

1、免疫浊度测定免疫浊度测定及其临床应用及其临床应用免免 疫疫 测测 定定immunoassayi a免疫测定原理免疫测定原理利用抗原抗体反应检测标本中微量物质利用抗原抗体反应检测标本中微量物质 抗原抗原+ +抗体抗体 抗原抗体复合物抗原抗体复合物 ag +ab ag ag +ab ag * * ab ab免疫测定特点免疫测定特点特异性特异性 抗原性不同的物质不干扰敏感性敏感性 g-ng-pg可测物可测物 蛋白质，酶，激素，药物 ， 毒品免疫测定分类免疫测定分类免疫浊度测定 g ng标记免疫测定 ng pg免疫浊度测定免疫浊度测定免疫沉淀反应免疫沉淀反应海德堡曲线 heidelbergs curv

2、e抗原浓度抗原浓度测定范围测定范围抗体抗体过剩过剩抗原抗原过剩过剩ag * ab免疫浊度测定分类免疫浊度测定分类透射浊度法透射浊度法散射浊度法散射浊度法透射浊度法和散射浊度法的光路透射浊度法和散射浊度法的光路检测器检测器a(透射浊度法)检测器检测器b( (散射浊度法散射浊度法) ) i0i浑浊浑浊样品样品光源光源散射浊度法散射浊度法analyte antibody other stuffanalyte-antibody complexingnow big enough to scatter lighttoo small to detect opticallywhat happens insid

3、e the flow cell?321timescatterscatter signal versus timenephelometry1. buffer addition 2. sample addition 3. antibody additionfluid in the cell has causes little scatteradding sample increases scatter slightlyadding antibody causes a large increase in light scattering免疫浊度测定分类免疫浊度测定分类2终终 点点 法法速速 率率 法

4、法终终 点点 法法固定时间法固定时间法速率散射浊度法速率散射浊度法速率峰的测定速率峰的测定速率峰的测定速率峰的测定321timescattermeasure the rate after antibody additionrate nephelometry1. buffer addition 2. sample addition 3. antibody additionfirst derivative: rate of change of scatter over time;this is the slope of the curveratepeak ratetimeraterate of c

5、hange of scatter signal versus timeconcentrationrate在速率峰基础上完成的标准曲线在速率峰基础上完成的标准曲线抗原过剩的测定抗原过剩的测定analyte-antibody complexinganalyte antibodyantigen excessrate of scatter抗体过量时的反应抗原过量时的反应抗原过量时的反应60850反应时间反应时间( (秒秒) )arrayarray抗原过量自动检测抗原过量自动检测加入校正液加入校正液药物浓度测定药物浓度测定免疫浊度抑制测定免疫浊度抑制测定(小分子物质小分子物质)12conjugate-a

6、ntibody complexing213inhibition of complexing by hapten (drug)1. conjugate (hapten on carrier)2. antibody3. hapten (drug)免疫浊度测定试剂免疫浊度测定试剂抗体试剂的要求抗体试剂的要求1 1 特异性特异性2 2 亲和力亲和力3 3 反应时保持抗体过剩反应时保持抗体过剩 测定范围应包括高于及低于测定范围应包括高于及低于 正常值的正常值的50%50%5 5 测定的精密度应在测定的精密度应在5%5%左右左右校正曲线：聚乙二醇的增强作用校正曲线：聚乙二醇的增强作用抗原浓度c1c2c3吸

7、光度4%4%聚乙二醇聚乙二醇不加聚乙二醇不加聚乙二醇试剂组成配方举例试剂组成配方举例试剂试剂1 1100mmol tris或磷酸缓冲液 ph7.2 8.24% 聚乙二醇(分子量6000或10000)1%非离子型表面活性剂150mmol氯化钠或硫酸钠0.1 g/l 叠氮钠试剂试剂2 2100mmol tris或磷酸缓冲液 ph7.2 8.220% 多克隆羊抗血清150mmol氯化钠0.1 g/l 叠氮钠抗原浓度抗原浓度测定范围测定范围抗体抗体过剩过剩抗原抗原过剩过剩ag * ab技术特性技术特性nipia：近红外颗粒速率法免疫分析近红外颗粒速率法免疫分析nipia：近红外颗粒速率法免疫分析近红外颗粒速率法免疫分析nir：940nm波长波长近近0oc检测角检测角检测颗粒大小：检测颗粒大小：200500nm直径直径