病毒致瘤因素及其致瘤机理PPT学习教案

1、会计学1病毒致瘤因素及其致瘤机理病毒致瘤因素及其致瘤机理 第1页/共56页第2页/共56页第3页/共56页鸡肉瘤滤液鸡肉瘤滤液 注射到小鸡注射到小鸡小鸡得肉瘤小鸡得肉瘤提取病毒，电镜观察提取病毒，电镜观察1966年得诺贝尔奖！年得诺贝尔奖！第4页/共56页第5页/共56页第6页/共56页 衣壳核心核心壳粒被膜第7页/共56页DNADNA病毒（无被膜）病毒（无被膜） 噬菌体噬菌体第8页/共56页病毒的形状和病毒的形状和大小大小第9页/共56页乙型病毒性肝炎病毒基因图乙型病毒性肝炎病毒基因图Centi meterMilliMicronano第10页/共56页第11页/共56页第12页/共56页病毒

2、的复制周期（病毒的复制周期（Replication CycleReplication Cycle）吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配释放吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配释放第13页/共56页吸附吸附HIV-CD4HIV-CD4EBV-CR-2 EBV-CR-2 鼻病毒鼻病毒ICAM-1ICAM-1第14页/共56页病毒吸附病毒吸附电镜图电镜图第15页/共56页穿入：三种方式穿入：三种方式 融合（融合（FusionFusion）胞饮（胞饮（ViropexisViropexis） 直接进入直接进入脱壳：脱壳：第16页/共56页致瘤性致瘤性DNADNA病毒感染病毒感染增殖性感染增殖性感染 非增殖性感染

3、非增殖性感染细胞病变细胞病变 细胞转化细胞转化病毒抗原病毒抗原肿瘤抗原肿瘤抗原病毒病毒病毒病毒DNADNA肿瘤抗原肿瘤抗原病毒繁殖病毒繁殖无病毒繁殖无病毒繁殖细胞死亡细胞死亡细胞恶性转化细胞恶性转化肿瘤细胞肿瘤细胞第17页/共56页DNADNA病毒复制的主要步骤病毒复制的主要步骤第18页/共56页第19页/共56页细胞分化细胞分化第20页/共56页 第21页/共56页第22页/共56页第23页/共56页第24页/共56页 puro SV GFPpSV40 polyA LMP1 pSV40 pCMV HSV SV polyA polyA PAT-GFP-LMP1结构示意图结构示意图Paterso

4、n Institute for Cancer Research, Christie CRC Research Center, Manchester, UK第25页/共56页CNE1电转染电转染puromycinpuromycin碱裂解法、碱裂解法、PG8000PG8000、EcoREcoR荧光显微镜荧光显微镜( (GFP)GFP)流式细胞仪流式细胞仪( (GFP)GFP)免疫组化免疫组化( (CS1-4)CS1-4)Western blot(S12)Western blot(S12)CNE1 CNE1G CNE1GLPAT-GFP-LMP1PAT-GFP第26页/共56页细胞增殖实验细胞增殖实

5、验细胞周期细胞周期体内倍增时间、生长率体内倍增时间、生长率平板克隆形成率平板克隆形成率裸鼠体内成瘤率裸鼠体内成瘤率裸鼠移植瘤潜伏裸鼠移植瘤潜伏期期角蛋白表达角蛋白表达裸鼠移植瘤转移率裸鼠移植瘤转移率流式细胞仪流式细胞仪PIPI、Hoechst3325Hoechst3325 双双荧光染色荧光染色DNADNA片断分析片断分析免疫组化免疫组化Western blotWestern blot平板克隆平板克隆形成形成试验试验转移转移能力能力增殖增殖能力能力恶性恶性程度程度凋亡凋亡 放射放射敏感性敏感性CNE1 CNE1G CNE1GL第27页/共56页原发灶侵袭正常组织转移瘤MMPsMMP-2MMP-9

6、降解细胞外基质基底膜立题依据第28页/共56页临床病理部分：技术路线慢性鼻咽炎（30例）鼻咽癌（30例）鼻咽癌颈淋巴结转移灶（24例）LMP1LMP1MMP-2MMP-2MMP-MMP-9 9免疫组化法第29页/共56页结果临床病理部分：LMP1MMP-2MMP-9positive rate %020406080100鼻咽炎 鼻咽癌 转 移灶 转 移 灶临床标本免疫组化结果第30页/共56页LMP1在NPC及NPC转移灶组织中的表达情况：第31页/共56页MMP-2、MMP-9在NPC及NPC转移灶中的表达第32页/共56页实验病理部分：技术路线CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1

7、CNE1CNE1CNE1GCNE1GL LCNE1CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1GCNE1GL LCNE1CNE1CNE1CNE1CNE1GCNE1GL LCNE1GCNE1GL LCNE1GCNE1GL LCNE1GCNE1GL LCNE1-GL细胞亚克隆筛选CNE1CNE1CNE2ZCNE2ZCNE1GCNE1GL LMMP-2MMP-2MMP-9MMP-9免疫组化法Western-BlotCNE1CNE1CNE1GCNE1GL L基底膜粘附实验细胞运动实验重组基底膜侵袭实验粘附能力运动能力侵袭能力第33页/共56页实验病理部分：结果CNE1、CNE2Z和CNE1GL细胞

8、MMP-2、MMP-9表达情况（98.2%）（1.8%）（92.6%）（7.4%）491/5009/500463/50037/500CNE1-GL（47.6%）（52.4%）（29.6%）（70.4%）238/500262/500148/500352/500CNE2Z（30.2%）（69.8%）（15.5%）（84.5%）151/500349/50077/500423/500CNE1 阳性阳性 强阳性强阳性强阳性强阳性阳性阳性MMP-2 MMP-9细胞系细胞系MMP-2MMP-9High positive rate %020406080100CNE1 CNE2Z CNE1GL 第34页/共56

9、页实验病理部分：结果MMP-2和MMP-9在三组细胞中的表达（Western-Blot结果）：第35页/共56页实验病理部分：结果CNE1和CNE1-GL细胞与基底膜成分粘附实验OD值细胞系细胞系 MeanS.D. CNE1 0.9519 0.068 CNE1-GL 1.2508 0.0711groupsCNE1CNE1-GL Mean OD value0.051.001.251.50第36页/共56页实验病理部分：结果CNE1和CNE1-GL细胞运动实验结果细胞系例数MeanMeanS.D.S.D.CNE1CNE1CNE1-GLCNE1-GL3 33 3123.667123

10、.6675.5085.50855.66755.6675.0445.044方差分析：两组比较方差分析：两组比较P P0.0010.001CNE1和CNE1-GL细胞侵袭实验结果细胞系例数MeanMeanS.D.S.D.CNE1CNE1CNE1-GLCNE1-GL3 33 3339.00339.0035.837635.8376157.67157.6723.180523.1805方差分析：两组比较方差分析：两组比较P P0.010.01Invasion Assay Migration Assay0123cells number050100150200250300350400CNE1CNE1-GL第3

11、7页/共56页CNE1细胞运动实验结果（HEHE染色染色200200）CNE1-GL细胞运动实验结果（HEHE染色染色200200）第38页/共56页CNE1细胞侵袭实验结果（HEHE染色染色200200）CNE1-GL细胞侵袭实验结果（HEHE染色染色200200）第39页/共56页第40页/共56页第41页/共56页第42页/共56页外源性致瘤病毒的复制：外源性致瘤病毒的复制：V-RNA逆转录酶ss-V-cDNAds-V-DNA聚合酶V-DNAV-mRNAV-RNA+protein 第43页/共56页 第44页/共56页第45页/共56页第46页/共56页第47页/共56页第48页/共56

12、页（四）致癌机制（四）致癌机制第49页/共56页获得性环境因素获得性环境因素（化学、物理、病毒）体细胞体细胞基因组基因组突变突变遗传性突变遗传性突变激活促进生长的激活促进生长的癌基因癌基因灭活肿瘤抑制灭活肿瘤抑制基因基因癌基因产物的表达癌基因产物的表达抑癌基因产物的丧失抑癌基因产物的丧失恶性肿瘤恶性肿瘤第50页/共56页转化蛋白致瘤性致瘤性DNADNA病毒转化细胞的机理病毒转化细胞的机理转化性V-mRNA病毒核浆第51页/共56页第52页/共56页U3 R U5U3 R U5R U5R U5细胞细胞DNA LTR gag-DNA LTR gag-polpol-env env LTR LTR 细胞原癌基因细胞原癌基因 正常病毒DNA含有病毒的癌基因产物LTR: LTR: 前病毒末端重复顺序前病毒末端重复顺序U5-: