09游泳池水微生物检验方法细菌总数测定操作规程

1、作 业 指 导 书编号：JNKZ/ZY-009第3页共3页游泳池水微生物检验方法细菌总数测定操作规程第1次修订实施日期：2013年12月1日1、目的： 游泳池水微生物检验方法细菌总数测定。 2、适用范围： 本标准适用于游泳池水细菌总数的测定。 3、责任： 使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。 4、内容4.1定义 细菌总数：指水样在一定条件下培养后（如培养基成分和PH值、培养温度和时间以及需氧性质等），1ml检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。 细菌总数可作为判定游泳池水被污染程度的标志，

2、也可以为游泳池水消毒效果的判定和评价提供依据。 4.2仪器三角瓶。量筒。PH计或精密PH试纸。高压消毒锅。试管。灭菌平皿：直径9cm。灭菌刻度吸管：1mL、2ml、10mL。酒精灯。恒温培养箱。放大镜。4.3培养基和试剂4.3.1营养琼脂培养基4.3.1.1成分：蛋白胨 10g 牛肉浸膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 1520g 蒸馏水 1000ml4.3.1.2制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，12120分钟高压灭菌，用自然沉降法测定时，倾注约15ml，于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。用撞击法测定时，则参照采样器采样使用说明制备营养琼脂平板。4.3.2 10%（m/m

3、）硫代硫酸钠溶液，121高压灭菌20min。4.5 操作步骤4.5.1 采样瓶的要求和预处理：用于微生物分析的采样瓶要无酸、无碱、无毒的玻璃容器。采样瓶在灭菌前加入足量的10%（m/m）硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液.一般情况下125ml的采样瓶加0.1ml，加完后121高压灭菌20min。4.5.2 用灭菌吸管吸取均匀水样1ml，注入到灭菌平皿内，另取1ml注入另一灭菌平皿内作平行接种。取1ml加到9ml无菌生理盐水中作1：:10稀释，混匀后取2ml分别加到两个无菌平皿内，每皿1ml。4.5.3 将溶化并冷却至45的营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15ml，另取一个不加样品的平皿作空白对照

4、。立即摇匀平皿，使水样和培养基充分混匀。带琼脂凝固后翻转平皿，置361恒温箱内培养48h。4.6 菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大510倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀时，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。4.7菌落计数的报告4.7.1选择平均菌落在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告（见表1中的例1）。4.7.2若有两个稀释度，其平均菌落数均在30300之间，则由两菌落总数之比

5、值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2，则报告其中稀释度较低的平皿菌落数（见表1中的例2、例3）。4.7.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表1中的例4）。4.7.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表1中的例5）。4.7.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一个稀释度平均菌落数大于300，而相邻另一个稀释度平均菌落数小于30，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表1中的例6）。4.7.6若所有稀释度均无菌生长，报告数为每毫升小于1cfu（见表1中的例7）。4.7.7菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表1中的报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。表1 细菌计数结果及报告方式例次不同稀释度平均菌落数两稀释度菌落之比菌落总数cfu/ml报告方式cfu/ml10-110-210-3113651642016 40016 000或1.610422760295461.638 00038 000或3.810432890271602.227 10027 0