关于番石榴叶对诺瓦克样病毒性腹泻患儿唾液中IFN-γ、IL-2水平的影响

1、关于番石榴叶对诺瓦克样病毒性腹泻患儿唾液中IFN-、IL-2水平的影响    You never know what you can do till you.               作者：周迎春黄海军鄢 文程冰洁黄桂琼If they say you are good, ask yourself if it be ture.  【摘要】  目的 了解番石榴叶对诺瓦

2、克样病毒(NVs)腹泻患儿唾液中干扰素-(IFN-)、白介素-2(IL-2)的调节作用。方法 将50例NVs腹泻患儿随机分为番石榴叶治疗组(治疗组A,30例)和思密达治疗组(治疗组B,20例),并随机抽取20名健康儿童作为正常对照组。采用ELISA法对3组治疗前及治疗组A、B治疗后唾液中IFN-、IL-2进行测定。结果 治疗前NVs腹泻患者IFN-、IL-2明显高于正常对照组(P<0.01)()。治疗后治疗组A IFN-、IL-2明显升高,治疗组B升高不明显,治疗组A优于治疗组B(P<0.01)。结论 NVs腹泻患者IFN-、IL-2水平较正

3、常人明显增高；番石榴叶能够提高NVs腹泻患者唾液中IFN-、IL-2水平,调节细胞免疫功能,促进Th1细胞免疫的作用。 【关键词】  诺瓦克样病毒番石榴叶腹泻干扰素-白细胞介素-2Abstract：Objective To elucidate the regulate role of the guava leaf on the levels of IFN- and IL-2 in the

4、 salivary juice on children patients with noroviruses diarrhea. Method 50 patients with noroviruses diarrhea was grouped randomly to group A (30 patients), which was treated&#

5、160;with guava leaf and group B (20 patients), which was treated with Smecta, and 20 health children was randomly choiced as normal control group. The levels of IFN-

6、 and IL-2 in the salivary juice of the three groups were determined and compared before and after the treatments. Results The levels of IFN- and IL-2 in the

7、0;group A and B before the treatments were higher than the normal control group (P<0.01), the levels of IFN- and IL-2 before the treatment in group A were hi

8、gher than that after the treatment, the group B had no much change after the treatment. The levels of IFN- and IL-2 in the group A were higher than the

9、0;group B after the treatments. Conclusion The levels of IFN- and IL-2 in the salivary juice in the patients with noroviruses diarrhea were higher than the normal he

10、alth patients. Guava leaf has the effect of raising the levels of IFN- and IL-2 in the salivary juice on noroviruses diarrhea patients, so it can regulate the c

11、ellular immune function and promote the T helper cell 1 (Th1) immunity.Knowledge will not be aquired without pain and application.  Key words：noroviruses；guava leaf；diarrhea；IFN-；IL-2Joy put heart into a man.    

12、60; 诺瓦克样病毒(Noroviruses,NVs)是世界范围内最常见的引起人类非菌性胃肠炎暴发的病原微生物1。欧美、日本等国的报道表明,发达国家60%85%急性胃肠炎的爆发由NVs所致2。目前的研究也证实,NVs同样是散发性急性腹泻的最常见的病原3。自1995年方氏等4首次报道我国存在NVs感染后,国内相关研究相继开展。近年来,北京、广州、郑州、兰州、济南、武汉等地均有诺瓦克样病毒性腹泻病例的报道,其发病率儿童为10%左右,其中济南地区高达29.25%5-8。由于缺乏组织细胞培养系统,以及无合适的动物感染模型,目前对NVs腹泻的发病机制了解尚少,因此对其治疗尚缺乏有效的药物(医药

13、学/临床医学论文 )。我们之前的临床研究表明,利用民间中草药番石榴叶治疗NVs腹泻患儿有较好的疗效,具有明显的止泻、止吐、改善病情的作用9；进一步研究表明,番石榴叶能升高NVs腹泻患儿唾液中SIgA、IgG水平,具有改善患者体液免疫和局部黏膜免疫的功能10。为进一步研究其对患者细胞免疫功能的作用,我们观察了其对NVs患儿Th1细胞因子干扰素-(IFN-)、白细胞介素-2(IL-2)的影响,现报道如下。Love makes obedience easy.  1  资料与方法1.1  病例选择    年龄为0

14、.53岁,病程3 d,大便为水样或蛋花样,就诊前24 h有4次以上稀便或水样便,无黏液脓血,粪检白细胞阴性。就诊前均未经过抗生素和微生态药物治疗。粪便标本经IDEIA Norovirus抗原检测试剂盒(购自Dako Cytomation公司)检测阳性者,为本研究的主要纳入对象。患儿有重度营养不良或伴有其它全身性疾病者,合并有心血管、肝、肾和造血系统严重疾病者,凡未按规定用药、无法判断疗效或资料不全者,不同意参加本研究者,均不纳入本研究。1.2  一般资料    所有病例来自2006年9月2007

15、年1月的本院门诊腹泻患儿,467例腹泻患儿大便标本检出NVs阳性50例,符合上述纳入标准。按就诊先后编号随机分为2组：治疗组A 30例,男18例,女12例,年龄(18.6±8.7)月；治疗组B 20例,男11例,女9例,年龄(20.2±8.6)月。另设正常对照组20例,来自门诊体检婴儿,均为无口腔疾病,无腹泻、发热,无其它全身性疾病的健康儿童,其中男11例,女9例；年龄(19.8±9.6)月。3组在性别、年龄上无显著性差异(P>0.05),具有可比性。论文既是探讨问题进行科学研究的一种手段，又是描述科研成果进行学术交流的一种工具.

16、0; 1.3  治疗方法Hide one's talents in a napkin.      治疗组A服用番石榴叶颗粒(广东一方制药有限公司生产),2.0 g/d,1次服用,连续服用3 d；治疗组B服用思密达(法国博福-益普生制药集团生产),剂量：1岁以内,1 g/次；13岁, 15 g/次,均3次/d。此外,2组同时给予相应口服补液盐,并指导饮食。1.4  唾液标本采集及指标检测方法    直接收集患者

17、治疗前及治疗后3 d的口腔混合唾液各1 mL于洁净的刻度试管中,刺激牙龈及舌下,收集混合性唾液于一次性试管中,2 000 r/min离心10 min后,留取上清液0.30.5 mL置-20 冻存待检。唾液IFN-、IL-2测定采用ELISA法, IFN-、IL-2 ELISA检测试剂盒购自深圳晶美生物公司。具体操作参照试剂盒说明书。1.5  统计学方法    测得数据均用x±s表示,采用SPSS11.0软件包进行统计分析,作方差分析和t

18、检验,进行显著性分析。2  结果    两治疗组治疗前IFN-、IL-2与正常组相比明显增高(P<0.01)；治疗组A治疗后IFN-、IL-2均较治疗前明显升高(P<0.01),与治疗组B相比,差异有统计学意义(P<0.01)；治疗组B治疗后IFN-、IL-2均较治疗前有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。表1  3组患者治疗前后IFN-、IL-2比较(略)注：与正常组治疗前比较,#P<0.01；与本组治疗前比较,P<0.01；  

19、0;   与治疗组B治疗后比较,P<0.01 论文教育信息网  论文包括学年论文、毕业论文、学位论文、科技论文、成果论文等.  3  讨论    唾液是由唾液腺分泌液龈沟液等组成的混合液。其内部主要由口腔唾液腺周围和黏膜下细胞分泌产生,唾液中含有各种细胞因子、免疫球蛋白、酶等多种物质。唾液检验患儿细胞因子采样简便,对人体无损伤,易于被受试者接受,近年来常被作为研究患者免疫变化的一种有效手段。在过去的30多年中,由于NVs不能在细胞中培养也无合适的动物模型,加之粪便标本中

20、极少量的病毒给提纯带来的问题,使得对NVs的研究充满着挑战。目前对其免疫学的研究结果主要是来自真正的暴发现场或志愿者,或在昆虫细胞中表达的NVs病毒颗粒的动物实验。因此,目前对其体液和细胞免疫机制尚未完全了解11。T细胞在病毒感染中起着重要的作用,然而目前对T细胞及其免疫机制在NVs感染中的作用尚无较多的报道。2003年, Tacket等12首次利用重组的NVs病毒样颗粒(virus like particles, VLPs)在人体上研究了受试者的细胞免疫情况,研究表明,Th1细胞免疫在其中起着主要作用,受试者的IFN-明显升高,且其升高与IL-4无明显

21、相关。其后Nicollier- Jamot等13利用VLPs在小鼠上也证实了上述观点,证实存在Th1/Th2细胞免疫反应。又有学者对健康志愿者进行了活病毒的试验研究,研究表明,感染病毒后,患者血清中的IFN-和IL-2明显升高,而IL-4、IL-5、IL-10未见增高,也进一步证实Th1细胞免疫在其中的作用14。Ko G等15为进一步了解NVs患者肠道黏膜的细胞免疫反应情况,观察了粪便中细胞因子的变化,其中IFN-、IL-2均较正常对照组显著增高,得出之前研究相似的结果。    番石榴叶为桃金娘科植物番石榴(Psidium 

22、guajava L.)的干燥叶,性平,味甘涩,入脾、胃、大肠、肝经。功用收敛止泻、消炎止血,主治泄泻、创伤出血等。广东、广西民间多用以治疗腹泻,效果良好。为进一步研究其对患者细胞免疫的影响,我们观察了番石榴叶治疗前后患者唾液中IFN-、IL-2的变化情况。IFN-主要由活化的Th1细胞和NK细胞产生,是机体抗病毒感染中最重要的细胞因子之一。它不仅可以阻止病毒在体内复制和扩散,而且能对许多免疫细胞发挥强大的免疫调节作用。IL-2主要由抗原活化的Th1细胞产生,它本身无直接抗病毒活性,主要通过增强细胞毒T淋巴细胞、自然杀伤细胞的杀伤活性以及诱导IFN-产生而介导抗病毒作用。本研究结果表明

23、,NVs腹泻患儿唾液中IFN-、IL-2治疗组A治疗后较治疗前有明显增高,治疗组B无明显变化。结果提示,番石榴叶在调节细胞免疫功能、促进Th1细胞免疫方面起着重要的作用。同时本研究结果表明,治疗前NVs腹泻患儿IFN-、IL-2均较正常儿童高,与国外研究结果相似。In a great river great fish are found; but take heed lest you be drowned.  【参考文献】  1 Lopman BA, Brown DW, Koopmans M. 

24、Human caliciviruses in EuropeJ. J Clin Virol,2002,24(3)：137160.2 Christiane E, Wobus, Larissa B, et al. Murine Norovirus：a model system to study Norovirus biology and pathogenesisJ.

25、0;J Virol, 2006,80(11)：51045112.3 Estes MK, Prasad BV, Atmar RL. Noroviruses everywhere：has something changedJ. Curr Opin Infect Dis,2006,19(5)：467474.4 方肇寅,温乐英,晋圣谨,等.在我国腹泻患儿中发现诺瓦克样病毒感染J.病毒学报,1995,11(3)：215219.5

26、0;陈冬梅,张 又,钱 渊,等.北京地区婴幼儿人类杯状病毒感染状况及型别分析J.中华儿科杂志,2002,40(7)：398340.6 戴迎春,聂 军,刘 翼,等.广州地区人类杯状病毒感染的初步研究J.第一军医大学学报,2004,24(3)：290292.7 董巧丽,金玉章,谢华萍,等.兰州地区婴幼儿轮状病毒和杯状病毒腹泻的研究J.临床儿科杂志,2005,23(6)：364367.8 司红丽,王健伟,王建华,等.济南地区婴幼儿腹泻病杯状病毒的流行特征J.中国病原生物学杂志,2006,1(2)：8689.9 张学森,周

27、迎春,吴旖芬,等.番石榴叶治疗小儿诺瓦克样病毒性腹泻的临床观察J.成都中医药大学学报,2006,29(1)：2021.10 张学森,周迎春,吴旖芬.番石榴叶对诺瓦克样病毒性腹泻患儿唾液中SIgA、IgG水平的影响J.辽宁中医杂志,2006,33(4)：390391.11 Le Pendu J, Ruvoen-Clouet N, Kindberg E, et al. Mendelian resistance to human norovirus&#

28、160;infectionsJ. Semin innunol, 2006,18(6)：375386.12 Tacket CO, Sztein MB, Losonsky GA, et al. Humoral, mucosal, and cellular immune responses to oral Norwalk virus-like particles in volunteersJ. Clin Immunol,2003,108(3)：241247.13 Nicollier-Jamot B, Ogier A, Piroth L, et al. Recombinant virus- like particles of a no