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1、荧光探针概述荧光探针概述为什么用荧光探针为什么用荧光探针荧光原理及影响因素荧光原理及影响因素重要荧光发色团重要荧光发色团荧光探针的类别荧光探针的类别为什么用荧光探针？为什么用荧光探针？荧光分析：超敏、快速、荧光分析：超敏、快速、多通道、高通量、安全、多通道、高通量、安全、低成本低成本荧光成像：微环境、无荧光成像：微环境、无损、高分辨率、原位在损、高分辨率、原位在线线荧光原理荧光原理n吸收（激发）吸收（激发）n内部转换内部转换n振动弛豫振动弛豫发射发射n系间跨越系间跨越n磷光发射磷光发射分子接受光能激发后，从分子接受光能激发后，从第一电子第一电子激发态最低振动能级激发态最低振动能级返回基态时发射

2、出的光返回基态时发射出的光。n吸收（激发）光谱吸收（激发）光谱 物质呈现颜色为吸收的补色物质呈现颜色为吸收的补色n荧光光谱荧光光谱 荧光颜色荧光颜色nStokes位移位移n半峰宽半峰宽吸收强度吸收强度 A = CL荧光强度荧光强度 FIFI 正比正比于于I0 I0可以很大，可以很大，荧光分析灵敏度高的原因荧光分析灵敏度高的原因荧光多参量：波长、强荧光多参量：波长、强度、寿命、偏振度、寿命、偏振荧光原理荧光原理荧光原理荧光原理吸收激发光的光子数发射荧光的光子数f荧光量子产率荧光量子产率（测量方法、公式）测量方法、公式）荧光强度荧光强度 FIFI 正比于正比于I0：内在亮度：内在亮度(intrin

3、sic brightness) （举例）（举例）荧光必要条件：吸收强荧光必要条件：吸收强( (大大)，量子产率高，量子产率高( (大大)分子结构分子结构 （内因）（内因）共轭体系（芳环、稠环）共轭体系（芳环、稠环）刚性共平面性刚性共平面性 取代基效应（复杂）取代基效应（复杂）荧光影响因素荧光影响因素环境因素（外因）环境因素（外因）极性极性酸碱度酸碱度粘度粘度温度温度重要荧光发色团重要荧光发色团NBNFFOONN+NnNOONHONNOHOOOHOOHO重要荧光发色团重要荧光发色团趋势：长波长、近红外荧光发色团趋势：长波长、近红外荧光发色团荧光探针的主要类别荧光探针的主要类别应用应用生物标记试剂生物标记试剂核酸探针核酸探针酶活性探针酶活性探针亚细胞定位探针亚细胞定位探针金属离子探针金属离子探针微环境探针微环境探针原理原理化学反应性化学反应性电子转移电子转移能量转移能量转移电荷迁移

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