第4章定量分析样品前处理

1、一、概述一、概述 目的：为满足所选用的分析方法对试样的要求目的：为满足所选用的分析方法对试样的要求, 使之处于可测定状态。使之处于可测定状态。1、多数具有特殊结构或取代基的化学原料药可、多数具有特殊结构或取代基的化学原料药可 不经特殊处理，用适当的溶剂溶解不经特殊处理，用适当的溶剂溶解直接采直接采用用 滴定法、分光光度法或色谱法测定；滴定法、分光光度法或色谱法测定；2、药物制剂、药物制剂排除处方组成中的干扰组分；排除处方组成中的干扰组分；3、含金属或含卤素、硫、磷、硒等特殊元素的、含金属或含卤素、硫、磷、硒等特殊元素的 药物药物依据其在药物分子中结合状态，进行依据其在药物分子中结合状态，进行

2、前处理方法的选择。前处理方法的选择。含卤素（金属）有机药物含卤素（金属）有机药物 药物分子结构中所含卤素（金属）直接与芳环药物分子结构中所含卤素（金属）直接与芳环 或脂肪链相连者。或脂肪链相连者。 *而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。结构特点：结构特点：CX（一）含金属的有机药物的结合形式（一）含金属的有机药物的结合形式 1、金属离子不直接与、金属离子不直接与C原子相连：原子相连： 通常为有机酸或酚类的金属盐或配位化合通常为有机酸或酚类的金属盐或配位化合 物，常称为物，常称为含金属的有机药物；含金属的有机药物； *若有机结构部分不干扰测定，可若有机

3、结构部分不干扰测定，可不经有机破坏不经有机破坏 直接在溶液中进行定性定量分析。直接在溶液中进行定性定量分析。 2、金属离子直接与、金属离子直接与C原子以共价键相连：原子以共价键相连： 称为称为有机金属药物，需有机金属药物，需经有机破坏经有机破坏使其转变使其转变 成为无机盐类后进行分析。成为无机盐类后进行分析。（二）卤原子的结合形式（活泼性）（二）卤原子的结合形式（活泼性） 卤原子与碳原子直接相连卤原子与碳原子直接相连 卤原子的活泼性和它直接相连的卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系：烃基的结构有很大关系：（1）乙烯型卤和芳卤：）乙烯型卤和芳卤： 不活泼不活泼CH2CH XX碱性溶液

4、中加还原剂（如锌粉）回流碱性溶液中加还原剂（如锌粉）回流（2）烯丙型卤和苄卤：）烯丙型卤和苄卤： 活泼活泼CH2XCH2CH CH2X（3）卤代烷型：）卤代烷型： 介于两者之间介于两者之间 碱性溶液直接回流碱性溶液直接回流CH2CH (CH2)nX n22. 分子中所含卤原子的个数分子中所含卤原子的个数 分子中所含卤原子的个数越多，活泼分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显。更加明显。原理原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe2+ NN3Fe

5、2+ - - eNN3Fe3+红色红色浅蓝色浅蓝色OCCHOFeHCCOOOOCCHOHCCO+Fe2+（二）（二） 经水解后测定法经水解后测定法 1.碱水解后测定法碱水解后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当溶剂（如本法是将含卤素有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶液（或一定量过量的乙醇）中，加入氢氧化钠溶液（或一定量过量的硝酸银滴定液）后，加热回流使其水解，将有机硝酸银滴定液）后，加热回流使其水解，将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（量法（Volhard法）测定。法）测定。 本法适用于含卤素有机药物结构本法适用于含卤

6、素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物（如卤中卤素原子结合不牢固的药物（如卤原子和脂肪碳原子相连者）。原子和脂肪碳原子相连者）。 原理原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使量过量的硝酸银滴定液，使Cl-生成生成AgCl沉淀，沉淀，过量的硝酸银，以过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用硫氰酸铵为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。液回滴定。 例例:三氯叔丁醇的测定三氯叔丁醇的测定 Ch.

7、P（2005）CCl3- -C(CH3)2- -OH + 4NaOH 回流回流(CH3)2- -CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕红色）（淡棕红色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010- -12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 2、酸水解后测定法、酸水解后测定法 如如硬脂酸镁的测定硬脂酸镁的测定 Ch.P（2005） 取本品约取本品约0.1g，精密称定，精密加硫，精密称定，精密加硫酸滴定液酸滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸

8、至油滴，煮沸至油滴澄清，继续加热澄清，继续加热10min，放冷至室温，加，放冷至室温，加甲基橙指示液甲基橙指示液12滴，用氢氧化钠滴定液滴，用氢氧化钠滴定液 ( 0.1 mol/L ) 滴定。每滴定。每1 ml 硫酸滴定液硫酸滴定液( 0.05mol/L )相当于相当于2.016mg的的MgO。原理：原理：Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O (三三) 经氧化还原后测定法经氧化还原后测定法1.碱性还原后测定碱性还原后测定 卤素结合于芳环上时卤素结合于芳环上时,由于分子中碘的由于分子中碘的

9、结合较牢固结合较牢固,需在碱性条件下加还原剂（如需在碱性条件下加还原剂（如锌粉）加热回流，使结合的卤素转变为无锌粉）加热回流，使结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（机的卤素离子，然后采用银量法（Fajans法）测定。法）测定。 本法适用于测定结构中碘与苯环本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。子的含卤素有机药物。 例例 泛影酸的测定泛影酸的测定 Ch.P (2005) 取本品约取本品约0.4g，精密称定，精密称定，加氢氧化钠溶加氢氧化钠溶液液30ml与锌粉与锌粉1.0g，加热回流，加热回流30min，放冷，放

10、冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤洗涤3次，每次次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰，洗液与滤液合并，加冰醋酸醋酸5ml与曙红钠指示液与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于20.46mg的的C11H9 I 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流回流COONaN H2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O USP (24)、BP（1998） Ch.

11、P(2005)收载的胆影酸、碘番收载的胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。等均采用同法测定。 2. 酸性还原后测定法酸性还原后测定法 取本品的干燥品约取本品的干燥品约0.4g，精密称定，精密称定，加锌加锌粉粉1g及冰醋酸及冰醋酸10ml，加热回流，加热回流30min，放冷，放冷，冷凝管用水冷凝管用水30ml洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与脱脂棉用水洗涤脱脂棉用水洗涤2次，每次次，每次20ml，洗液与滤液，洗液与滤液合并，加四溴酚酞乙酯指示液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸银，用硝酸银滴定液滴定液(0.1mo

12、l/L)滴定。终点时黄色沉淀变为绿滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每色。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于19.031mg的的C11H12 I 3NO2。例例 碘番酸的测定碘番酸的测定 JP (13)三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 适用于适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药物金属药物,即采用上述方法难以将有机结合的待即采用上述方法难以将有机结合的待测原子转变为可测定的无机离子（或氧化物、测原子转变为可测定的无机离子（或氧化物、无氧酸等）的无氧酸等）的有机金属药物有机金属药物。包括：湿法破坏和干法破坏两种。包括：湿

13、法破坏和干法破坏两种。(一一) 湿法破坏湿法破坏即即酸破坏法。酸破坏法。依据所用试剂的不同依据所用试剂的不同（1）硝酸高氯酸法：）硝酸高氯酸法： 经破坏后得到的无机金属离子一般成高价态。经破坏后得到的无机金属离子一般成高价态。*此法破坏能力强，反应较剧烈，所以破坏时此法破坏能力强，反应较剧烈，所以破坏时 不能将溶液蒸干，以免发生爆炸。不能将溶液蒸干，以免发生爆炸。*本法不适合含氮杂环类有机物，破坏不完全。本法不适合含氮杂环类有机物，破坏不完全。*适合：生物样品和含动植物药制剂的破坏。适合：生物样品和含动植物药制剂的破坏。 （2 2）硝酸硫酸法：）硝酸硫酸法： 适合大多有机物质的破坏，无机离子均

14、氧化成适合大多有机物质的破坏，无机离子均氧化成高高价态。价态。 不适合能与硫酸形成不溶性盐的金属离子。不适合能与硫酸形成不溶性盐的金属离子。（3 3）硫酸硫酸盐法：）硫酸硫酸盐法： 常用的硫酸盐：硫酸钾或无水硫酸钠。常用的硫酸盐：硫酸钾或无水硫酸钠。加硫酸盐的目的：提高硫酸的沸点，加硫酸盐的目的：提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化增强硫酸的氧化 破坏能力破坏能力以使样品破坏完全；以使样品破坏完全； 防止硫酸在加热过程中过早分解成防止硫酸在加热过程中过早分解成SOSO2 2而损失。而损失。 *金属离子以金属离子以低低价态存在；价态存在； 常用于：含砷或锑的有机药物的破坏常用于：含砷或锑的有机药物的破

15、坏As3+Sb 3+； 凯氏定氮法凯氏定氮法氮测定法。氮测定法。（4）其它湿法：其它湿法： 硝酸硝酸硫酸硫酸高氯酸法；高氯酸法； 硫酸硫酸氧化剂法（过氧化氢法、高锰氧化剂法（过氧化氢法、高锰 酸钾）破坏后，金属呈酸钾）破坏后，金属呈高高价态。价态。 HNO3-H2SO4-HClO4法、法、 H2SO4-H2O2法、法、 H2SO4-KMnO4法。法。(二二) 干法破坏干法破坏 适用于湿法不易破坏完全的有机物适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。药物。 不适用于含易挥发性金属（如汞、不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏。

16、砷等）有机药物的破坏。也称碱破坏法也称碱破坏法 有机物有机物Ca(OH)2或或Na2CO3或或MgNO3(MgO)小火灼烧，炭化，高温炽灼，完全灰化以达分小火灼烧，炭化，高温炽灼，完全灰化以达分解。解。*加碱加碱Ca(OH)2或或Na2CO3或或MgNO3(MgO)的的目目 的帮助灰化完全。的帮助灰化完全。*中国药典有机药物中砷盐检查碱破坏法。中国药典有机药物中砷盐检查碱破坏法。a.石灰法：石灰法： 氢氧化钙小火灼烧炭化后，氢氧化钙小火灼烧炭化后，500600炽炽灼完全灰化，待砷转化为非挥发性的亚砷酸钙灼完全灰化，待砷转化为非挥发性的亚砷酸钙Ca3(AsO3)2，再依法检查。，再依法检查。*本

17、法操作简单，但应注意完全灰化，否则可使本法操作简单，但应注意完全灰化，否则可使 砷斑较浅且重现性差。砷斑较浅且重现性差。b.无水碳酸钠碱融法无水碳酸钠碱融法: 环状结构的有机酸碱金属盐苯甲酸钠、对环状结构的有机酸碱金属盐苯甲酸钠、对氨基水杨酸钠，采用石灰法不能破坏完全，可采氨基水杨酸钠，采用石灰法不能破坏完全，可采用此法。用此法。c.硝酸镁乙醇溶液法：硝酸镁乙醇溶液法： 炽灼破坏分解有机物，使砷转化为非挥发性炽灼破坏分解有机物，使砷转化为非挥发性的砷酸镁的砷酸镁Mg(AsO4)2，残渣质轻，残渣质轻，HCl易溶。易溶。*本法操作简单，易于灰化，并且砷能定量回收。本法操作简单，易于灰化，并且砷能

18、定量回收。但应注意灰化完全，使硝酸镁完全分解为氧化镁。但应注意灰化完全，使硝酸镁完全分解为氧化镁。*如有硝酸盐或亚硝酸盐残留，则在酸性溶液中如有硝酸盐或亚硝酸盐残留，则在酸性溶液中生成硝酸和亚硝酸，影响砷化氢气体的生成。生成硝酸和亚硝酸，影响砷化氢气体的生成。(三三) 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 （1）原理）原理 氧瓶燃烧法：氧瓶燃烧法：将有机药物放入将有机药物放入充满氧充满氧气气的的密闭密闭燃烧瓶中进行燃烧瓶中进行燃烧燃烧，并将燃烧所，并将燃烧所产生的欲测物质产生的欲测物质吸收吸收于适当的吸收液中，于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行

19、鉴别、检查或含量测定析方法进行鉴别、检查或含量测定NaClHClOClCNaOH2 -溶液点燃 适用于含卤素、硫、氮、硒等适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析有机药物的分析 本法特点是简便、快速、破坏完本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析全，尤其适用于微量样品的分析 （ 2） 仪器与材料仪器与材料 仪器装置仪器装置 燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml无色、磨口、厚壁、无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空空心，底部熔封铂丝一根，心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状下端呈螺旋状或网状称样用材料及称样称样用材料及称样 A. 固体样品固

20、体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B. 液体样品液体样品 纸袋纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹再用无灰滤纸包裹吸收液吸收液 A. 作用：吸收液的作用是将样品经作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。一定的便于测定的价态。氧气氧气B. 吸收液的选择吸收液的选择氟氟 水水 （HF） 氯氯 NaOH溶液溶液(HCl)溴溴 H2O2-NaOH(HBr) NaO

21、H-硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液碘碘 NaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液 (少量少量I2、HIO3、HIO；微量；微量HI)硫硫 NaOH或或H2O2 （SO3） 硒硒 硝酸溶液（硝酸溶液（SeO2少量少量SeO3 ）（3）操作方法）操作方法燃烧瓶燃烧前的准备燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。，立即用表面皿覆盖瓶口。样品的准备样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端

22、的网内或螺旋处。包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。样品的燃烧样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。检查或含量测定。例

23、例 碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定 ChP（2000）原理原理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴- -醋酸溶醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显

24、的蓝色消失即为终点淀粉结合所显的蓝色消失即为终点 取本品约取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用氢氧化钠试液进行有机破坏，用氢氧化钠试液2ml与水与水l0ml为为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸钾取醋酸钾10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml，再加冰，再加冰醋酸使成醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振摇，放置数分，密塞，振摇，放置数分钟，加甲酸约钟，加甲酸约lml，用水洗涤瓶口，并通入空气流，用水洗涤瓶口，并通入空气流约约35min以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾以除去剩余的溴蒸

25、气，加碘化钾2g，密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02Mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。正。每每lml的硫代硫酸钠滴定液的硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)相当于相当于1.388mg的的C19H29IO2。 滴定度的计算滴定度的计算 放大反应放大反应2mol碘苯酯碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaI321molNaI+Br2321molN

26、aIO3即即2mol碘苯酯碘苯酯2molNaIO32mol NaIO3+10I- -6molI2即即2mol碘苯酯碘苯酯1molI2 6molI212molI12molNa2S2O3反应摩尔比为反应摩尔比为1 6mlmgncMT/388. 1634.41602. 098：140. 氧瓶燃烧法中的装置有A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 磨口软质玻璃锥形瓶C. 铂丝D. 铁丝E. 铝丝96：133（99x：138）选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A. 磨口硬质玻璃锥形瓶B. 铂丝C. 普通滤纸D. 氢气 E. 无灰滤纸99：76氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为A. H2O2溶液B. H2O

27、2NaOH溶液C. NaOH溶液D硫酸肼饱和液E. NaOH硫酸肼饱和液99：134. 氧瓶燃烧法可用于A. 含卤素有机药物的含量测定B. 醚类药物的含量测定C. 检查甾体激素类药物中的氟D. 检查甾体激素类药物中的硒E. 芳酸类药物的含量测定第二节第二节 常用定量分析方法常用定量分析方法一、化学分析法一、化学分析法u包括重量分析和滴定分析包括重量分析和滴定分析u所用仪器简单，结果准确，主要用于制所用仪器简单，结果准确，主要用于制剂中含量较高的一些成分或矿物药剂中含量较高的一些成分或矿物药 制剂中制剂中的无机分析的无机分析u灵敏度低，操作繁琐，耗时长，专属性灵敏度低，操作繁琐，耗时长，专属性不

28、高，对微量成分测定的准确性不理想不高，对微量成分测定的准确性不理想 是中药及其制剂含量测定的常用方法，是中药及其制剂含量测定的常用方法，具有灵敏度高，精度好，造作简单等优点。具有灵敏度高，精度好，造作简单等优点。 要求被测组分本身或其显色产物对可见要求被测组分本身或其显色产物对可见- -紫外光具有选择性吸收。紫外光具有选择性吸收。 按测定波长不同可分为单波长光度法和计按测定波长不同可分为单波长光度法和计算分光光度法。算分光光度法。二、可见二、可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（1）外标法）外标法（2）内标法）内标法（3）回归曲线定量法）回归曲线定量法外标一点法外标一点法外标两点法外标两点法n（

29、 ）tR=5.54tRW1/2=16（ ）tR W（ ）H=A+B/u+Cu 2(tR2tR1) R W1W2 （1）内标法加校正因子）内标法加校正因子（2）外标法）外标法（3）归一法）归一法（4）标准溶液加入法）标准溶液加入法n（ ）tR=5.54tRW1/2=16（ ）tR W（ ）H=A+Cu.键合相色谱法键合相色谱法.胶束色谱法胶束色谱法.反相键合相色谱反相键合相色谱.正相键合相色谱正相键合相色谱.离子对色谱法离子对色谱法.离子抑制色谱法离子抑制色谱法定量分析方法的特点定量分析方法的特点一、容量分析法一、容量分析法 用原料药精制品用原料药精制品( (含量含量99.599.5) )或对照

30、品考察方法的精密度，相对标或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于准差一般应不大于0.20.2；进行回收率；进行回收率试验。试验。回收率一般在回收率一般在99.799.7100.3100.3之间之间。 二、光谱分析法二、光谱分析法( (一一) )UV-可见分光光度法可见分光光度法 用适当浓度的精制品进行测定，用适当浓度的精制品进行测定，其其RSD一般不大于一般不大于1。制剂的。制剂的测定测定，回收率一般应在回收率一般应在98102之间。之间。 线性：线性：吸光度吸光度A一般在一般在0.20.7，浓，浓度点度点n5。用浓度。用浓度c对对A作线性回归处理，作线性回归处理，得一直线方程，得一

31、直线方程，r应大于应大于0.999(n5)，方，方程的截距应近于零。程的截距应近于零。(二二)荧光分析法荧光分析法 1.特点特点 2.荧光分析仪荧光分析仪 3.含量测定含量测定三、色谱分析法三、色谱分析法(一一) HPLC法：要求法：要求RSD2，回收回收率率98102之间。之间。 线性范围：用精制品配制一系列线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点标准溶液，浓度点n应为应为57，用浓，用浓度度c对峰高对峰高h或被测物的响应值之比进或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，行回归处理，建立回归方程，r应大应大于于0.999，截距应趋于零。，截距应趋于零。 专属性：要考查辅料、有关物质

32、或降专属性：要考查辅料、有关物质或降解产物对主药的色谱峰是否有干扰，如有解产物对主药的色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排除干扰应设法排除(二二)气相色谱法气相色谱法 1.对仪器的一般要求对仪器的一般要求 2.系统适用性试验系统适用性试验 3.测定法测定法 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。 二 ) 用 途（一）药品质量标准起草时，分析方法需 经验证。（二）药物合成方法变更、制剂的组分 变更、原分析方法进行修订时， 分析方法需经验证。 验证内容有：准确度、精密度验证内容有：准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、（重复性、中间精

33、密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性围和耐用性四 ) 验证内容 一、一、 准确度（准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。表示。 测定回收率测定回收率R（recovery）的具体方的具体方法可采用法可采用“回收试验法回收试验法”和和“加样回收加样回收试验法试验法”。 回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M%100AMR 加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品

34、）测定，测定值为M%100-APMR 数据要求 规定的范围内，至少用规定的范围内，至少用9次测定结果次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。1. 含量测定方法的准确度含量测定方法的准确度 原料药可原料药可用已知纯度的对照品或样用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。行比较。 制剂制剂可用含己知量被测物的各组可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。料中加入原料

35、药对照品的方法。 如不能得到制剂的全部组分，可向如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较或与另一个已建立准确度的方法比较结果。结果。 中药分析的准确度一般用加样回中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在收试验衡量。中药回收率一般要求在95105%范围内，有些方法操作步骤范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在繁多时，可要求在90110%范围内。范围内。RSD一般在一般在3%以内。以内。 2杂质定量测定的准确度杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂可向原料药或制剂中加入已知

36、量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。熟的方法进行比较。二、二、精密度（精密度（precision） 精密度是指在规定条件下，同一精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（果之间的接近程度。用偏差（d）、标）、标准偏差准偏差(SD)、相对标准偏差、相对标准偏差(RSD)（变（变异系数，异系数，CV）表示。）表示。 偏差（d）：测量值与平均值之差xxdi-标准（偏）差（SD或S）12-nxxSi相对标准（偏）差

37、（RSD），也称变异系数（CV）%100 xSRSD 1. 重复性重复性 在相同条件下，由同在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用在规定的范围内，至少用9次测定结次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作测三次或把被测物浓度当作100%，至少测至少测6次进行评价。次进行评价。 2. 中间精密度中间精密度 同一实验室，不同同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动

38、因素为不同日期、不同分影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备析人员、不同设备 3. 重现性重现性 不同实验室，不同分析不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说过程、重现性结果均应记载在起草说明中。明中。 三、专属性（专属性（specificity） 指有其他成分（杂质、降解物、辅料指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能

39、存在情况下采用的方法能准确测等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。度的度量。四、四、 检测限（检测限（limit of detection， LOD） 检测限系指试样中被测物能被检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限度试验参数，检测出的最低量。是限度试验参数，无需定量测定。常用无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。表示。1非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知

40、浓度的被测物，试验出能被用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。可靠地检测出的最低浓度或量。 2信噪比法信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是把已知低浓度（仪器分析方法），是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）3 1或或2 1时的相应浓度或时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。注入仪器的量确定检测限。3数据要求数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和检应附测试图谱

41、，说明测试过程和检测限结果。测限结果。 五、定量限（1imit of quantitation，LOQ） 指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。 常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10 1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定。 六、 线性线性 在设计的范围内，测试结果与试样在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 数据要求：应列出回归方程、相关数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。系数和线性图

42、。七、范围七、范围 指达到一定精密度、准确度和线指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。浓度或量的区间。八、八、 耐用性耐用性 指测定条件稍有变动时，结果不受指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。况下实验结果重现性的尺度。 2. 杂质的限量检查除专属性、检测限、杂质的限量检查除专属性、检测限、耐用性外，其它都不要求。杂质的定量测耐用性外，其它都不要求。杂质的定量测定除检测限外，其它都要求。定除检测限外，其它都要求。 3. 含量测定及溶出量测定除检测限、含量测定及溶出量测定除检测限、定量限外，其它都要求。定量限外，其它都要求。（九）应用（九）应用 1. 鉴别试验除专属性、耐用性外，其它鉴别试验除专属性、耐用性外，其它都不要求。都不要求。99：73. 精密度是指（B） A. 测得的测量值与真值接近的程度 B. 测得的一组测量值彼此符合的程度 C. 表示该法测量的正确性 D. 在各种正常试验条件下，对同一 样品分析所得结果的准确