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文档简介
1、单克隆抗体药物的制备本节聚焦1.了解动物细胞融合与单克隆抗 体的原理和应用.2.单克隆抗体的制备和应用.有些细胞的融合是正常的生命活动。如受精作用动物细胞融合实例1 受精作用动物细胞融合实例2 荧光标记的鼠细胞和人细胞融合示意图 1970年,有两位科学家做了一个人鼠细胞融合的实验,以证实细胞膜的流动性。那么,如何实现人-鼠细胞的融合,动物细胞融合后有什么意义?一、动物细胞融合1.动物细胞融合的过程请同学们阅读课本P52动物细胞融合 思考:1什么叫动物细胞融合?2动物细胞融合的结果是什么?3细胞融合原理是什么? 4促进细胞融合的方法有哪些 ?不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进
2、行有丝分裂1 .过程一、动物细胞融合2 .概念:指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。3 .结果:形成单核的杂交细胞4 .原理:细胞膜的流动性5 .诱导方式物理法:离心、振动、电激化学法:聚乙二醇(PEG)生物法:灭活的病毒6 .意义:突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。(种间、属间、科间、动植物之间)7 .应用:成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段.生物种类细胞来源成功年代酵母菌鸡原生质体血红细胞1975年人胡萝卜腹水癌细胞原生质体1976年人小鼠纤维肉瘤细胞畸胎瘤细胞1978年特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体二、单克隆抗体什么是抗体?抗体是机体受抗
3、原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。单克隆抗体读下面一段文字资料,找出单克隆抗体的概念 人们发现,在动物发生免疫反应的过程中,体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体,但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体,必须用单个B细胞进行无性繁殖,即克隆。单: 单个细胞 克隆: 无性繁殖 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学性质 单一特异性强的抗体 阅读课本P52最后一段和P53的第一段,思考回答问题。抗体是由何种细胞产生的?2.抗体是如何产生的?3.传统制备抗体的方法是什么,及缺陷?4.B淋巴细胞有什么特点?抗体是由何种细胞产生的
4、?2.抗体是如何产生的?知识回顾3.抗体的传统生产方法抗原 反复注射动物从动物的血清中分离抗体该法制备抗体的缺点:产量低、纯度低,且抗体的特异性差、灵敏度低。4.B淋巴细胞有什么特点? 动物在免疫过程中产生的抗体种类可达百万种每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体但是: 一个B淋巴细胞在体外不能无限增殖. 提示1:对B细胞进行细胞培养可行吗? 提示2:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?问题:如何大量生产单克隆抗体?请尝试设计一个方案。5.单克隆抗体的制备一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案:动物细胞融合技术单克隆抗体 既能产生特异性抗体,
5、又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合(只考虑两两融合)融合细胞几种类型?培养液中细胞有几种类型?3种骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞- B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞5种B淋巴细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞- B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞多种杂交瘤细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞将不同杂交细胞分开,克隆专一抗体,检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体的制备过程第1次筛选目的:得到杂交瘤细胞(多种)。第2次筛选目的:在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体
6、的杂交瘤细胞。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性,既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点?特异性强,灵敏度高2.制备过程:诱导其融合的方法有哪些?注射抗原的目的是什么大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法融合后培养液中有几种细胞两次筛选的原因单抗制备过程分哪几步?请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是? 你学会了吗?6.单克隆抗体的应用诊断试剂最广泛应用准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备。“生物导弹” 单克隆抗体药物 单抗导向,药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗,单克隆抗体作为载体,运载抗癌药物,
7、形成“生物导弹”,准确杀伤癌变细胞。本节小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势重点1. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( ) 淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A BC D C达标训练(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞,则B细胞是取自小鼠体内的 细胞,从小鼠体内提取分离该细胞之前,应给小鼠注射_类物质。(2)d过程是一个_过程,该过程的进行常用_或_的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合,则可形成 种类型的C细胞,因此需用_培养基筛选出D细胞用于培养,D细胞的名称是 ,其特点是_。效应B 抗原 细胞融合 聚乙二醇 灭活的病毒 3杂交瘤细胞选择性 既能无限增殖又能产生特异性抗体 2.(4)在培养时通过
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