发酵染菌以及其防治

1、关于发酵染菌及其防治第一张，PPT共八十八页，创作于2022年6月染菌对发酵的影响1发酵染菌的分析2杂菌污染的途径和防止3发酵染菌及其防止第二张，PPT共八十八页，创作于2022年6月染菌对发酵的影响一染菌对发酵产品提取的影响二染菌对三废治理的影响三第一节 染菌对发酵的影响第三张，PPT共八十八页，创作于2022年6月1、什么叫发酵染菌? 在发酵过程中，生产菌以外的其他微生物侵入了发酵液，从而使发酵过程失去了真正意义上的纯种培养。 菌种培养过程操作不当 培养基灭菌不彻底 发酵设备（如发酵罐、管道）密封不严 空气除菌不净2、造成发酵染菌的可能途径有哪些？第四张，PPT共八十八页，创作于2022年

2、6月 染菌仍是发酵工业的致命伤。轻者影响产率、产物提取收得率和产品质量；严重者造成生产失败，浪费大量原材料，造成严重经济损失，而且扰乱生产秩序，破坏生产计划。遇到连续染菌，特别是又找不到染菌原因，未有防治措施时，往往会影响人们的情绪和生产积极性，造成无法估量的危害。3、染菌会对发酵工业造成哪些不良影响？第五张，PPT共八十八页，创作于2022年6月4、在现有科学条件下能否做到彻底不染菌？ 据报道，国外抗生素发酵平均染菌率为2%-5%，国内的抗生素发酵、青霉素发酵染菌率2%，链霉素、红霉素和四环素发酵染菌率约为5%，谷氨酸发酵噬菌体感染率1-2%。 目前要做的是要提高生产技术水平，强化生产过程的

3、管理，把握好各个易染菌的环节，尽可能防止发酵染菌的发生；而且一旦发生染菌，要能尽快找出其污染的原因，并采取相应的有效措施，把发酵染菌造成的损失降低到最小。5、既然染菌不可避免，哪我们应该怎样做？第六张，PPT共八十八页，创作于2022年6月染菌对不同发酵品种的影响1污染不同微生物2不同染菌时间3不同染菌途径4一、染菌对发酵的影响污染不同菌量5第七张，PPT共八十八页，创作于2022年6月1、染菌对不同发酵品种的影响放线菌由于生长的最适pH为7左右，因此染细菌为多，而霉菌生长pH为5左右，因此染酵母菌为多。青霉素发酵染菌，绝大多数杂菌都能直接产生青霉素酶，而另一些杂菌则可被青霉素诱导而产生青霉素

4、酶。不论在发酵前期、中期或后期，染有能产生青霉素酶的杂菌，都能使青霉素迅速破坏。不同菌不同产品第八张，PPT共八十八页，创作于2022年6月链霉素、四环素、红霉素、卡那霉素等虽不象青霉素发酵染菌那样一无所得，但也会造成不同程度的危害。如杂菌大量消耗营养，干扰生产菌的正常代谢；改变pH，降低产量。灰黄霉素、制霉菌素、克念菌素等抗生素抑制霉菌，对细菌几乎没有抑制和杀灭作用。不同产品疫苗生产危害很大。现在疫苗多采用深层培养，这是一类不加提纯而直接使用的产品，在其深层培养过程中，一旦污染杂菌，不论死菌、活菌或内外毒素，都应全部废弃。因此，发酵罐容积越大，污染杂菌后的损失也越大。第九张，PPT共八十八页

5、，创作于2022年6月2、污染不同种类和性质的微生物的影响（1）污染噬菌体噬菌体的感染力很强，传播蔓延迅速，也较难防治，故危害极大。污染噬菌体后，可使发酵产量大幅度下降，严重的造成断种，被迫停产。（2）污染其它杂菌有些杂菌会使生产菌自溶产生大量泡沫，即使添加消泡剂也无法控制逃液，影响发酵过程的通气搅拌。有的杂菌会使发酵液发臭、发酸，致使pH下降，使不耐酸的产品破坏。特别是染芽孢杆菌，由于芽孢耐热，不易杀死，往往一次染菌后会反复染菌。 第十张，PPT共八十八页，创作于2022年6月污染其他杂菌的异常现象：1）溶解氧的异常变化 当杂菌是好气性微生物时，溶解氧的变化是在较短时间内下降，直至接近于零，

6、且在长时间内不能回升； 当杂菌是非好气性微生物，而生产菌由于受污染而抑制生长，使耗氧量减少，溶解氧升高。2）排气的CO2异常变化 好气性发酵排出的气体中的CO2含量与糖代谢有关。对于特定的发酵过程，工艺确定后，排出的气体中的CO2 含量的变化是有规律的。染菌后，培养基中糖的消耗发生变化 ，引起排气中CO2含量的异常变化，如杂菌污染时，糖耗加快， CO2含量含量增加，噬菌体污染后，糖耗减慢，CO2含量减少。因此，可根据CO2含量的异常变化判断染菌。回第十一张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 还可以根据其他的一些异常现象，如菌体生长不良、PH值的异常变化、发酵过程中泡沫的异常增多、发酵液的

7、颜色异常变化、代谢产物含量的异常下跌、发酵周期的异常拖长、发酵液的粘度异常增加等判断染菌。 其它异常现象第十二张，PPT共八十八页，创作于2022年6月对整个发酵过程的危害极大。严重干扰生产菌的生长繁殖。干扰生产菌的代谢，影响产物的生成 。影响相对较小 。3、不同污染时间对发酵的影响种子培养期染菌发酵后期染菌发酵前期染菌发酵中期染菌第十三张，PPT共八十八页，创作于2022年6月（1）种子培养期染菌由于接种量较小，生产菌生长一开始不占优势，而且培养液中几乎没有抗生素（产物）或只有很少抗生素（产物）。因而它防御杂菌能力低，容易污染杂菌。如在此阶段染菌，应将培养液全部废弃。第十四张，PPT共八十八

8、页，创作于2022年6月（2）发酵前期染菌 发酵前期最易染菌，且危害最大。原因 发酵前期菌量不很多，与杂菌没有竞争优势；且还未合成产物（抗生素）或产生很少，抵御杂菌能力弱。在这个时期要特别警惕以制止染菌的发生。染菌措施 可以用降低培养温度，调整补料量，用酸碱调pH值，缩短培养周期等措施予以补救。如果前期染菌，且培养基养料消耗不多，可以重新灭菌，补加一些营养，重新接种再用。第十五张，PPT共八十八页，创作于2022年6月（3）发酵中期染菌 发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。杂菌大量产酸，培养液pH下降；糖、氮消耗快，发酵液发粘，菌丝自溶，产物分泌减少或停止，有时甚至会使已产生的产物分解。有时也

9、会使发酵液发臭，产生大量泡沫。措施 降温培养，减少补料，密切注意代谢变化情况。如果发酵单位到达一定水平可以提前放罐，或者抗生素生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染菌罐，抑制杂菌。第十六张，PPT共八十八页，创作于2022年6月（4）发酵后期染菌 发酵后期发酵液内已积累大量的产物，特别是抗生素，对杂菌有一定的抑制或杀灭能力。因此如果染菌不多，对生产影响不大。如果染菌严重，又破坏性较大，可以提前放罐。第十七张，PPT共八十八页，创作于2022年6月将导致染菌范围不断扩大，使生产蒙受重大损失。 使发酵大面积染菌。一般不具延续性，使单个（批）发酵罐发酵失败。 染菌几率较大。 4、不同染菌途径对发酵

10、的影响种子带菌设备渗漏空气带菌培养基或设备灭菌不彻底第十八张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 染菌程度越严重，即在发酵罐内的杂菌数量就多，对发酵的危害也就越大。但当生产菌在发酵过程已有大量的繁殖，并已在发酵液中占优势，如果污染极少量的杂菌，此时对发酵不会带来太大的影响。 5、污染不同菌量对发酵的影响第十九张，PPT共八十八页，创作于2022年6月二、发酵染菌对产品提取的影响1、发酵染菌对过滤和提取的影响 染菌发酵液中含有比正常发酵液更多的水溶性蛋白和其它杂质。采用有机溶剂萃取的提炼工艺，则极易发生乳化，很难使水相和溶剂相分离，影响进一步提纯。采用直接用离子交换树脂的提取工艺，如链霉素、

11、庆大霉素，染菌后大量杂菌黏附在离子交换树脂表面，或被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树脂的交换容量，而且有的杂菌很难用水冲洗干净，洗脱时与产物一起进入洗脱液，影响进一步提纯。生产酶制剂时，杂菌产生的蛋白酶会水解产品酶，使产率降低。第二十张，PPT共八十八页，创作于2022年6月二、发酵染菌对提炼的影响2、发酵染菌对产品质量的影响（如内毒素）：杂菌种类繁多，其代谢产物亦多，且多属未知，难于监测。3、发酵染菌对产品外观的影响（如土霉素）：由于感染杂菌，正常的代谢产物受到杂菌产物的影响，使得外观质量达不到质量标准要求。第二十一张，PPT共八十八页，创作于2022年6月三、染菌对三废治理的影响正常的

12、发酵废液中混杂有大量的糖类、少量的微生素、蛋白酶和其他代谢产物及无机盐等。废液中的废菌体本身又是高蛋白物质，是良好的禽畜饲料添加剂，如可回收利用，即可治理环境，化害为利，也可创造经济价值。但是被杂菌污染的发酵废液中会含有内毒素，禽畜食后，容易发生病变，因此不能用作饲料添加剂。而染菌后的废液中的BOD含量增高，因此会增加三废治理的费用和时间。第二十二张，PPT共八十八页，创作于2022年6月第二节 发酵染菌的分析一、染菌的检查检查方法二、发酵染菌原因分析 回第二十三张，PPT共八十八页，创作于2022年6月染菌的检查和判断 发酵过程是否染菌应以无菌试验的结果为依据进行判断。在发酵生产过程中，如何

13、及早发现杂菌的污染并及时采取措施加以处理，是避免染菌造成严重经济损失的重要手段。因此，生产上要求能准确、快速的检查出杂菌的污染。目前常用于检查是否染菌的无菌试验方法主要有以下四种：检查判断目的意义第二十四张，PPT共八十八页，创作于2022年6月（一）杂菌的检查方法1、显微镜检查法（形态观察）2、肉汤培养法3、平板划线培养或斜面培养检查法4、发酵过程的异常现象观察法 无菌试验时，如果肉汤连续三次发生变色反应（由红色变为黄色）或产生混浊，或平板培养连续三次发现有异常菌落的出现，即可判断为染菌。无菌试验第二十五张，PPT共八十八页，创作于2022年6月注意事项 1、无菌试验的肉汤或培养平板应保存并

14、观察至本批（罐）放罐后12h，确认为无杂菌后才能弃去。2、无菌试验期间应每6h观察一次无菌试验样品，以便能及早发现染菌。 回（一）无菌试验方法（二）检查的工序和时间见表31第二十六张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 总结发酵染菌的经验教训，积极采取必要的措施，防止生产过程中再次染菌，把发酵染菌控制在生产前。防患于未然是发酵生产过程中控制染菌污染的最重要措施 。分析目的二、发酵染菌原因分析第二十七张，PPT共八十八页，创作于2022年6月二、发酵染菌原因分析（一）发酵染菌率计算基准 总染菌率指一年发酵染菌的批（次）数与总投料批（次）数之比的百分率。染菌批次数应包括染菌后培养基经重新灭菌，

15、又再次染菌的批次数在内。这是习惯的计算方法，也是我国的统一计算方法。总染菌率%=第二十八张，PPT共八十八页，创作于2022年6月二、发酵染菌原因分析 造成染菌的因素很多，但总结几十年的经验，对绝大部分罐批染菌的原因是比较清楚的，但在实际生产中发酵染菌率仍比较高，可以说产生这种现象大多数是由于工作中“明知故犯”“不负责任”和“侥幸心理”所造成的。例如，灭菌的蒸汽压不足不能灭菌；设备有渗漏不能进罐等等都是众所周知的，但因为有侥幸心理还是照样灭菌，进罐，结果以污染杂菌而告终。现将我们收集到的国内外几家抗生素工厂发酵染菌原因列于下：第二十九张，PPT共八十八页，创作于2022年6月日本工业技术院发酵

16、研究所多年来抗生素发酵染菌原因分析 项目 百分率%种子带菌或怀疑种子带菌 9.64接种时罐压跌零 0.19培养基灭菌不透 0.79总空气系统有菌 19.96泡沫冒顶 0.48夹套穿孔 12.36盘管穿孔 5.89接种管穿孔 0.39阀门渗漏 1.45搅拌轴密封渗漏 2.09罐盖漏 1.54其它设备渗漏 10.13操作原因 10.15 原因不明 24.94第三十张，PPT共八十八页，创作于2022年6月上海第三制药厂染菌原因分析 项目 百分率%种子带菌 14.15盘管穿孔 14.20阀门渗漏 23.30空气系统有菌 10.0管理不善 25.80其它 7.49原因不明 5.78第三十一张，PPT共

17、八十八页，创作于2022年6月第四制药厂链霉素发酵染菌原因分析 项目 百分率%外界带入杂菌（取样、补料） 8.20设备穿孔 7.60空气系统有菌 26.00停电罐压跌零 1.60接种 11.00蒸汽压力不足或蒸汽量不足 0.60管理问题 7.80 操作违反规程 1.60种子带菌 0.60原因不明 35.00第三十二张，PPT共八十八页，创作于2022年6月造成染菌的主要原因总结一、设备渗漏二、空气染菌三、种子染菌四、灭菌不彻底五、技术管理不善第三十三张，PPT共八十八页，创作于2022年6月造成染菌的主要原因总结1、设备渗漏 设备渗漏包括夹套穿孔、盘管穿孔、接种管穿孔、阀门渗漏、搅拌轴渗漏、罐

18、盖漏和其它设备漏等。从日本工业技术院发酵研究所对染菌原因分析发现，这类染菌占33.85，上海三厂的分析这类染菌为37.5。所以说加强设备本身及附属零部件的严密度检查，对防御染菌是极其主要的，也是重要的。第三十四张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 由于发酵罐需要经受温度的升降变化，使用久了难免会出现夹层盘管的细微腐蚀而出现渗漏，导致染菌的发生。 渗漏原因 当设备渗漏时，往往每批染菌发生的时间逐渐提前。染菌特点设备渗漏方面原因回第三十五张，PPT共八十八页，创作于2022年6月2、空气带菌从日本工业技术院和上海第四制药厂分析空气带菌而造成的染菌分别为19.96和26%。国内外空气除菌技术虽

19、已有较大改善，但仍然没有使染菌率降低到理想的程度。因为空气除菌系统较为复杂，环节多，偶遇不慎便会导致空气除菌失败。第三十六张，PPT共八十八页，创作于2022年6月3、种子带菌种子带菌又分为种子本身带菌和种子培养过程中染菌。加强种子管理，严格无菌操作，种子本身带菌是可以克服的。种子培养过程染菌与发酵一样有许多因素造成。第三十七张，PPT共八十八页，创作于2022年6月4、灭菌不彻底灭菌技术的好坏与灭菌质量很有关系蒸汽通入培养基，升温快慢、保温时间产生过多泡沫蒸汽总压是否达到要求标准环境中的杂菌数量因季节而有很大差别。如上海第四制药厂在卡那霉素生产中，于炎热的夏季将连续灭菌预热至800C的培养基

20、采样培养，可发现无法计数的大量的芽孢杆菌；而在冬季取样的培养中，则仅发现23个芽孢杆菌。故染菌率因季节不同而发生明显变化。第三十八张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原材料储存和保管，如液胨、玉米浆、母液糖等有机原料杂菌的数量发酵罐、培养基配制罐等设备的清洗质量有无灭菌的死角对减少或避免染菌仍然是十分必要的。 第三十九张，PPT共八十八页，创作于2022年6月5、技术管理不善技术管理就是要对发酵每个环节严格控制，发酵中稍有不慎就可能染菌，所以不能有侥幸心理而放松管理第四十张，PPT共八十八页，创作于2022年6月因管理不善而染菌的有31个罐批，占25.08。经分析有下表所列原因： 项目

21、百分率%进罐前未做设备严密度检查 25.8接种违反操作规程 25.8检修质量缺乏验收制度 19.35操作不熟练 19.35配料违反工艺规程 6.45调度不当 3.25第四十一张，PPT共八十八页，创作于2022年6月二、发酵染菌原因分析“防重于治”从发酵工厂的生产经验来看，染菌原因是以设备渗漏和空气系统的染菌为主，其他次之。1、从染菌的规模来分析2、从染菌的时间来分析3、从染菌的类型来分析第四十二张，PPT共八十八页，创作于2022年6月2）前期染菌种子带菌、培养基灭菌不彻底1）大批发酵罐染菌系统问题，如空气过滤系统有问题，特别是总过滤器长期没有检查，可能受潮失效；移种或补料的分配站有渗漏或灭

22、菌不彻底。3）单罐染菌不是系统问题，而是该罐本身的问题。如种子带菌、培养基灭菌不彻底、罐有渗漏、分过滤器失效1、从染菌的规模来分析4）中后期染菌补料的料液灭菌不彻底或补料管道、阀门渗漏，一般不会是种子问题第四十三张，PPT共八十八页，创作于2022年6月2.染菌时间分析：早期染菌中后期染菌 种子带菌；培养液或设备灭菌不彻底；中间补料、设备渗漏以及操作不当。第四十四张，PPT共八十八页，创作于2022年6月3.染菌种类分析：污染耐热性芽孢杆菌？污染球菌、酵母？霉菌？设备存在死角或培养液灭菌不彻底；从蒸汽的冷凝水或空气中带来的，发酵罐的冷却管或夹套渗漏引起的；灭菌不彻底或无菌操作不严格所致。第四十

23、五张，PPT共八十八页，创作于2022年6月杂菌的种类染菌原因分析耐热的芽孢杆菌球菌、无芽孢杆菌等不耐热菌浅绿色菌落的杂菌霉菌酵母菌填表 培养基或设备灭菌不彻底 种子带菌/空气除菌不彻底设备或冷却盘管的渗漏无菌室灭菌不彻底或无菌操作不当糖液灭菌不彻底或糖液放置时间过长根据染上杂菌的种类可以初步判断染菌原因第四十六张，PPT共八十八页，创作于2022年6月第三节 杂菌污染的途径和防止种子带菌及其防止空气带菌及其防止设备的渗漏或“死角”造成的染菌及其防治生产原料灭菌不彻底导致的染菌操作不当造成染菌及其防治噬菌体染菌及其防治 第四十七张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原因分析一、种子带菌及其

24、防治导致发酵前期染菌种子保存种子培养基种子换代及接种种子培养设备第四十八张，PPT共八十八页，创作于2022年6月1检查无菌室的无菌状况， 特别是接种箱。检查接种箱所用的杀菌熏剂。2检查发生污染的种子培养基灭菌状况，检查对三角瓶、棉花塞、培养基等所进行的灭菌操作。4检查灭菌锅的工作情况， 校核温度表和压力表。灭菌锅工作时锅内空气务必排尽。5检查发生污染所用的保藏菌种。6检查操作人员的操作技术。7摇瓶种子 保证摇瓶间的清洁卫生；摇瓶内液体装料不宜过多，避免溅起的培养液污染纱布；瓶口包扎八层纱布。防止措施第四十九张，PPT共八十八页，创作于2022年6月无菌室要求：在无菌室中装有紫外灯，打开紫外灯

25、，照半小时，关灯后15分钟再接种。用消毒药水如新洁而灭配成1/1000浓度擦桌子、拖地，开启超净台的通风，接种时必须在超净台上操作，超净台装有一台鼓风机，进风口有一粗过滤器，出风口有高效过滤器，保证无菌风从超净台吹出，外界有菌空气不可能进入接种区域，保证无菌条件。接种人员必须穿好无菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干净。第五十张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原因分析二、空气带菌及其防止 要杜绝无菌空气带菌，就必须从空气的净化工艺和设备的设计、过滤介质的选用和装填、过滤介质的灭菌和管理等方面完善空气净化系统。空气净化系统导致染菌，占总染菌的189 。压缩机粗过滤器贮罐冷却器冷却器旋风分离器

26、丝网分离器加热器过滤器第五十一张，PPT共八十八页，创作于2022年6月空气染菌原因分析：空气冷却器的列管穿孔泄露，冷却水会渗入到空气中，造成染菌。棉花-活性炭过滤器长期使用后，棉花和活性炭的体积被压缩而松动，如果上下端棉花铺得厚薄不均，厚的一边阻力大空气不畅通，薄的一边空气容易通过，久而久之，薄的一边长期受空气顶吹而使棉花活性炭改变位置，造成过滤器失效。过滤器用蒸汽灭菌时，若被蒸汽冷凝水润湿就会降低或丧失过滤效能，灭菌完毕应立即缓慢通入压缩空气，将水分吹干。超细纤维纸作过滤介质，灭菌时必须将管道中冷凝水放干净，以免介质受潮失效。在生产实践中，空气管道大多与其它物料管道相接，要装上止逆阀防止其

27、它物料窜入空气管道污染过滤器，导致过滤介质失效。第五十二张，PPT共八十八页，创作于2022年6月空气过滤系统方面原因 进风口、生产环境、空气过滤器（滤芯的灭菌要彻底，过滤介质要定期检查更换）。原因分析 空气过滤系统带菌会使发酵罐批批染菌、罐罐染菌，此时就要对空气过滤系统进行无菌样检测。 染菌特点第五十三张，PPT共八十八页，创作于2022年6月1油渗入空气：改用无油润的压缩机。2列管式冷却器穿孔。3过滤介质松动，空气走短路。4过滤介质被水润湿。5过滤介质老化. 防止措施压缩机粗过滤器贮罐冷却器冷却器旋风分离器丝网分离器加热器过滤器回第五十四张，PPT共八十八页，创作于2022年6月设备渗漏三

28、、设备的渗漏或“死角”造成的染菌及其防止 设备渗漏主要是指发酵罐、补糖罐、冷却盘管、管道阀门等，由于化学腐蚀（发酵代谢所产生的有机酸等发生腐蚀作用）、电化学腐蚀（如氧溶解于水，使金属不断失去电子，加快腐蚀作用）、磨浊摊口金属与原料中的泥沙之间磨损、加工制作不良等原因形成微小漏孔后发生渗漏染菌。第五十五张，PPT共八十八页，创作于2022年6月2、防止设备渗漏 发酵设备及附件由于化学腐蚀、电化学腐蚀，物料与设备摩擦造成机械磨损以及加工制作不良等原因会导致设备及附件渗漏。设备上一旦渗漏，就会造成染菌，例如冷却盘管、夹套穿孔渗漏，有菌的冷却水便会通过漏孔而进入发酵罐中招致染菌。阀门渗漏也会使带菌的空

29、气或水进入发酵罐而造成染菌。设备上的漏隙如果肉眼能看见，容易发现，也容易治理；但有的微小泄漏，肉眼看不见，必须通过一定的试漏方法才能发现 。第五十六张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 试漏方法可采用水压试漏法。即被测设备的出口处装上压力表，将水压入设备，待设备中压力上升到要求压力，关闭进出水，看压力有否下降。压力下降则有渗漏。但有些渗漏很小，看不出何处漏水，可以用稀碱溶液压入设备，然后用蘸有酚酞的纱布揩，只要酚酞能变红处即为渗漏处。 阀门渗漏可以用集气桶来试漏。方法是先在集气桶中装满水，然后关闭所有阀门，向发酵罐中通入空气，使罐压上升到要求压力，一般一公斤以上。由于集气桶连通各管道，观

30、察哪根管子冒泡，即这根管子的阀门漏气。3、检查设备渗漏方法第五十七张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 由于存在温差（内冷却水温、外灭菌温），温度急剧变化，或发酵液的pH低、化学腐蚀严重等原因 。原因分析 生产上可采取仔细清洗，检查渗漏，或降低冷却水中CL-1的含量等措施加以防治 防治措施盘管的渗漏染菌及防治第五十八张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 生产上常把不能彻底灭菌的部位称为“死角”。 实际过程中，“死角”包括了发酵设备或连接管道的某一部位和培养基或其他物料的某一部分等。 死角第五十九张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 受搅拌与通风的影响，易磨蚀穿孔。 管中的空气

31、流速不一致，靠近空气进口处流速最大，离进口处距离越远流速越小。 原因分析 采取频繁更换空气分布管或认真洗涤等措施 。防治措施2、空气分布管的“死角”染菌及防治第六十张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原因分析3、发酵罐的渗漏染菌及防止发生局部化学腐蚀或磨蚀，产生穿孔渗漏。罐焊接处等的周围容易积集污垢。发酵罐的制作不良。发酵罐封头上的各个接口。发酵罐的修补焊接位置不当 。第六十一张，PPT共八十八页，创作于2022年6月图5-3 不锈锅衬里破裂形成“死角” 图5-4 发酵罐底部培养基的沉积污垢形成 图5 发酵罐支撑件加强板形成“死角”染菌 第六十二张，PPT共八十八页，创作于2022年6月

32、1、采取罐内壁涂刷防腐涂料、加强清洗并定期铲除污垢等是有效消除染菌的措施 。2、采用不锈钢或复合钢可有效克服此弊端并注意清洗是可以避免染菌的 。防治措施第六十三张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原因分析4、管路的安装或管路的配置不合理形成“死角” 1、经常将一些管路汇集到一条总的管路上。 2、管路大多采用法兰连接。 但常会发生诸如垫圈大小不配套、法兰不平整、安装未对中、法兰与管子的焊接不好、受热不均匀使法兰翘曲以及密封面不平等现象，从而形成“死角”而染菌 。 第六十四张，PPT共八十八页，创作于2022年6月第六十五张，PPT共八十八页，创作于2022年6月采用单独的排气、排水和排污管

33、可有效防止染菌的发生。 法兰的加工、焊接和安装要符合灭菌的要求尽可能减少或取消连接法兰等措施 。防治措施第六十六张，PPT共八十八页，创作于2022年6月图5-5 灭菌时蒸汽不易通达的“死角”及其消除方法图5-6 法兰连接不当造成的“死角”染菌第六十七张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原因分析 采用加工精度高、材料好的阀门可减少此类染菌的发生。 防治措施5、管件的渗漏形成染菌及防治 目前生产上使用的阀门不能完全满足发酵工程的工艺要求，是造成发酵染菌的主要原因之一 。回第六十八张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原因分析四、培养基灭菌不彻底导致的染菌淀粉质原料，在升温过快或混合不均

34、匀时容易结块，使团块中心部位“夹生”，蒸汽不易进入将杂菌杀死培养基中诸如麸皮、黄豆饼一类的固形物含量较多，在投料时溅到罐壁或罐内的各种支架上，容易形成堆积，这些堆积物在灭菌过程由于传热较慢，一些杂菌也不易被杀灭。 第六十九张，PPT共八十八页，创作于2022年6月 1、升温前先通过搅拌混合均匀，并加人一定量的淀粉酶进行液化；有大颗粒存在时应先经过筛除去，再行灭菌； 2、对于麸皮、黄豆饼一类的固形物含量较多的培养基，采用罐外预先配料，再转至发酵罐内进行实罐灭菌较为有效。防治措施第七十张，PPT共八十八页，创作于2022年6月1购进原料应干燥，仓贮原料应保持干燥。2制各培养基时，粉碎原料先用冷水浸

35、润， 调浆罐搅拌要充分防止结块。3粉碎原料颗粒应足够小，大颗粒会影响杀菌效果。4假如生产原料被孢子严重污染， 制成培养基后， 可在30保温数小时， 待孢子发芽后再行杀菌。具体措施第七十一张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原因分析操作不当造成染菌及其防治1、灭菌时由于操作不合理，未将罐内的空气完全排除，造成压力表显示“假压”。培养基灭菌前含有大量杂菌，灭菌时如果蒸汽压力不足，就达不到要求的温度；2、产生泡沫发泡严重时泡沫可上升至罐顶甚至逃逸，以致泡沫顶罐。灭菌时产生大量泡沫或发酵罐中有污垢堆积，就会窝藏大量杂菌，造成灭菌不彻底。3、连续灭菌过程中，培养基灭菌的温度及其停留时间没有符合灭菌

36、的要求。培养基灭菌方法高压蒸汽灭菌分批灭菌 121，30分钟连续灭菌 罐温125130 ，3045分钟第七十二张，PPT共八十八页，创作于2022年6月为什么蒸汽灭菌时会产生大量泡沫呢？ 原因分析：培养基和水的传热系数比空气的传热系数大，如果灭菌时升温太快，培养基急剧膨胀，发酵罐内的空气排出较慢，就会产生大量泡沫，泡沫上升到发酵罐顶，泡沫中的耐热菌就不能与蒸汽直接接触，未被杀死。防止方法:缓慢开启蒸汽阀门，或加入少量消泡剂。灭菌时还会因设备安装或污垢堆积造成一些“死角”。这些死角蒸汽不能有效达到，常会窝藏耐热芽孢杆菌，所以设备安装要注意不能造成死角，发酵设备要经常清洗，铲除污垢。第七十三张，P

37、PT共八十八页，创作于2022年6月补充：发酵染菌后的措施染菌后的培养基必须灭菌后才可放下水道。灭菌方法：可通蒸汽灭菌，也可加入过氧乙酸等化学灭菌剂搅拌半小时，才放下水道。否则由于各罐的管道相通，会造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也会造成空气的污染而导致其它罐批染菌。凡染菌的罐要找染菌的原因，对症下药，该罐也要彻底清洗，进行空罐消毒，才可进罐。染菌厉害时，车间环境要用石灰消毒，空气用甲醛熏蒸。特别，若染噬菌体，空气必须用甲醛蒸汽消毒。第七十四张，PPT共八十八页，创作于2022年6月原因分析五、噬菌体污染及其防治 引起发酵生产噬菌体污染的原因，大都是由于生产过程中，人们不加注意地把大量活菌体随意排放，这些活菌体栖息于周围环境，同少量与其有关的其它溶原性菌株按触， 经过变异和杂交， 最终发生使生产菌株溶菌的烈性噬菌体，并在环境中逐渐增殖，随空气流动，污染种子和发酵罐。被噬菌体污染的发酵罐又大量排气，便是更太的发源点。第七十五张，PPT共八十八页，创作于2022年6月1、镜检可发现菌体数量明显减少，菌体不规则（图），严重时完全看不到菌体，且是在短时间内菌体自溶。2、发酵pH值逐渐上升，4-8小时之内可达8.0以上，不再下降。3、发酵液残糖高，有刺激臭味，粘度大，泡沫多。4、生产量甚少或增长缓慢或停止有无染噬菌体，根本的要做噬菌斑检验染噬菌体表现第七十六张，