销售培训系列之-细胞培养基础知识

1、细胞培养基础知识中生生物科技：Gibco品牌价值和信任的历史GIBCO自1962年开始生产用于细胞培养的动物，是此行业的开创者。在四十年的岁月里，一直保持在技术和品质方面的领先水平。和培养基的市场占有率常年蝉联全球第一。GIBCO生产的纵向整体化管理从血液收集到最终产品检验和稽核的每一个步骤，GIBCO都采用设备和标准操作程序。这种严格的控制可保证产品的高品质和最低的批间差。可追踪性：品质的GIBCO收集并保留从采血、处理、检测到发运的全部文件供追踪之用。2Invitrogen Proprietary &细胞培养相关设备CO2培养箱，水浴，离心机，液氮罐，显微镜3Invitrogen Prop

2、rietary &细胞培养基本流程基础培养基+FBS+添加剂+抗生素去除Media用PBS加入Trypsin以分离贴壁细胞将部分细胞传代到新的Media中4Invitrogen Proprietary &1.细胞培养主要成分 基本培养基 细胞培养试剂（抗生素、细胞解离，生长因子等） 平衡盐溶液 真核细胞5Invitrogen Proprietary &培养基必须提供所有基本的营养6Invitrogen Proprietary &经典培养基的应用BME( Basal Medium Eagle):是由Eagle发明的，是最简单的培养基，只有11种氨基酸和盐及一些维生素。最先用于培养小鼠的L 细胞和

3、人类HeLa细胞，现在广泛用于各种细胞的培养EMEM or MEM(Eagles Minimum Essential Medium):是BME的升级版，氨基酸浓度是BME的两倍，适用于的细胞DMEM or DME是(Dulbeccos Modification of Eagles Medium)改进的 EM. 氨基酸和维生素浓度是BME的4倍.最先葡萄糖的浓度是 1g/L，称为低糖DMEM,后来增加到4.5g/L，称为高糖DMEM，广泛用于各种细胞培养。7Invitrogen Proprietary &经典培养基的应用M 199 (Medium 199):是一种比较古老的，配方复杂的，含有核苷

4、酸，核酸等成分的培养基。最初用于鸡胚肌细胞的培养，还用于各种细胞的维持和生产RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institute # 1640):是 McCoys 5A 的改进版，含有高浓度的肌醇。广泛用于悬浮细胞的培养。如人类白细胞，骨髓瘤细胞，杂交瘤细胞等血液来源的细胞Hams F10 (Hams Nutrient Mixture F10):由Ham发明，用于人类2倍体细胞和仓鼠细胞的培养。Hams F12 (Hams Nutrient Mixture F12):F10 的升级版，含有的维生素，肌醇，氨基酸。用于培养大鼠，兔子和鸡胚细胞，还用于中国仓鼠细胞以

5、及肺细胞的培养8Invitrogen Proprietary &基本培养基用途9Invitrogen Proprietary &GIBCO培养基的4种形式即用型(1X) 液体培养基 :直接用培养基浓缩液(10X or 50X ): 用前需要稀释成1 干粉培养基 DPM (Dryder Media):需要在水中溶解, 加入碳酸氢钠,调值, 然后过滤才可以用高级颗粒技术培养基 AGT (Advanced Granulation TechnologyTM):比DPM形式的培养基更容易溶解的颗粒状的培养基.AGT 是完全为工业产量的用户开发的,提前混合好了,只需要加水溶解和过滤。提前调好了,所有的成分

6、都10Invitrogen Proprietary &特性:干粉状形式节省空间需要在超纯水中溶解需要加入碳酸氢钠 需要调节优点:节省空间缺点:耗时干粉培养基需要用0.22um的滤膜过滤费空间高价格什么东西都不需要自己准备液体形式液体培养基直接可以使用不需要另外加入其他成分 不需调高价值不需调 不需过滤11Invitrogen Proprietary &培养基的保存及干粉：2年液体：10个月浓缩液体：12个月所有的培养基都必须在28，避光保存，不能冷冻，干粉培养基可在室况下。12Invitrogen Proprietary &培养基的保质期含有 L-Glutamine的液体培养基 12 个月不含

7、L-Glutamine的液体培养基 18个月干粉培养基，3年13Invitrogen Proprietary &GIBCO培养基的类型传统培养基要添加(5-10%)的培养基（Advanced medium）高级培养基浓缩了营养物质和其他成分的培养基,只需要 2% 的(减少50-90%)的麻烦,节省时间和花费减少不同批次带来的差异和试培养基(无培养基/无蛋白培养基/化学定义的培养基), 主要用于生物产品生产,干细胞研究等无使用时无须再填加培养基针对角质细胞、淋巴细胞、造血细胞、内皮细胞、肝细胞、神经元细胞、胚胎干细胞、CHO细胞、293细胞、各类昆虫细胞、杂交瘤细胞、羊水细胞等的无培养基14In

8、vitrogen Proprietary &的作用附着因子纤连蛋白，提高粘性增殖、分化所需的激素和生长因子调节膜的渗透性生长因子、脂类、酶和微量元素的载体缓冲液毒素灭活作用保护作用:波动,蛋白酶,试剂,机械损伤15Invitrogen Proprietary &GIBCO动物的种类(FBS):胎牛-原产地（；澳大利亚；巴西；新西兰等）经过鉴定的(certified) vs 质量有保证的(qualified)(NBS):新生牛-出生少于十四天:小牛-出生少于一年:捐献-特殊饲养的，专门用来进行提取的牛:其他-horse, chicken, goat, lamb（羊）, porcine（猪）, r

9、abbit16Invitrogen Proprietary &的类型热灭活:(在56水浴30min)热灭活一些可以产生免疫应答反应的物质（补体等）在昆虫细胞培养和胚胎干细胞培养中需要透析:透析掉小分子量的物质离子，氨基酸用于标记低IgG:有自己独特的层析技术去除球蛋白经过处理将IgG去除用于免疫学研究及其生产生物制品胚胎干细胞:胚胎/间充质干细胞维持干细胞处于为分化状态-射线照射处理的(客户订制)17Invitrogen Proprietary &Certified FBS Vs Qualified FBSCertified FBS 和 Qualified FBS都通过以下测试无菌，醋酸素介质

10、中的电泳图谱，渗透压，值，总蛋白，检测，内毒素和支原体对Certified 胎牛噬菌体检测；生物化学检测（碱性磷酸酶等21项内容）；激素检测（雌二醇等5项内容）；Sf9细胞生长，除以上检测外，还进行如下检测：18Invitrogen Proprietary &可追踪性：品质的GIBCO收集并保留从采血、处理、检测到发运的全部文件供追踪之用通常具有3-5年的保质期的性能可能会随着每批，和季节的不同而不同在拿到每一批前应该进行验证通常,最好足够1-2年使用，确保每一瓶都一样，一次而不需要每次都进行验证19Invitrogen Proprietary &培养效能检测，GIBCO都进行以下培养效能检测

11、。选择胎牛对所有的胎牛的最重要的标准是其通过严格的品质控制，GIBCO 也同时在支持特殊的细胞生长的能力，因此，除了保证条件下对的三个重要的培养效能进行检测：集落效率检定：分析每一批胎牛促成单一细胞集落的能力，及促进老鼠骨髓瘤细胞及其衍生的融合瘤细胞的生长能力。实际应用在低密度非贴附性细胞的集落形成、融合瘤发育以及单克隆抗体的制造。贴附效率检定：利用一贴附的、已的人类细胞株来检测每一批促使低密度细胞贴附及的能力。实际应用在低密度或正常密度、细胞株及细胞株的繁殖。二倍体成细胞生长促进检定：评估每一批能维持难培养的贴附细胞长期生长的能力。培养数代WI-38人类二倍体成细胞，计算每一代培养的细胞总数

12、。此项检测所挑选出的胎牛批号能维持难以生长的细胞、贴附性细胞、正常的细胞株的生长及存活。也进行昆虫细胞生长促进检定：评估每一批Certified等级胎此外，对部分胎牛，及特定批号的Qualified等级的胎牛其促进SF9昆虫细胞生长的能力。此项测最佳指标。牛试为选择适合昆虫细胞生长及BEVS实验的胎牛20Invitrogen Proprietary &其它检测对Certified胎牛噬菌体检测；利用适当的大肠杆菌，例如K12，进行噬菌体溶菌斑记数分析。此检测可以了解，除以上检测外，还进行如下检测：胎牛收集与制造过程的产品质量，噬菌体浓度高表示胎牛的原料处理有问题。生物化学检测（碱性磷酸酶等21

13、项内容）；激素检测（雌二醇等5项内容）；血红蛋白检测其它对ES cell-Qualified FBS,要进行特殊检测以确定对胚胎干细胞未分化的细胞形态的维持能力。进行其对VERO细胞生长的支持能力的检测；对小牛和新生牛，进行其对Sp2/O-Ag14细胞生长的支持能力的检测；对马，对部分，也进行细胞毒性的检测。21Invitrogen Proprietary &有关的常见问题22Invitrogen Proprietary &保存最好的方法?建议应保存在-5至-2O。然而，若存放于4时，超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。如何解冻才不会使产品质量受损?

14、建议您将从冷冻箱取出后，先置于28冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于中脂蛋白的变性所造成，而血蛋白(形成凝血的蛋白之一)在，也会存在于中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响本身的质量。若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将 分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。 不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。有关的常见问题23Invitrogen Proprietary &为什么要热灭活?加

15、热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，使用热灭活。有必要做热灭活吗?实验显示，经过正确处理的热灭活 ，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的 对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了 的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的 ，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是 污染，而把 放在37环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的 扩增。因此 建议您，若非必须，您可

16、以不需要做热处理这一步。如此一来，不但节省您宝贵的时间，更确保 的质量!有关的常见问题24Invitrogen Proprietary &为什么在冰箱中的胎牛会出现沉淀?GIBICO的胎牛没有预老化，在28时，中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、蛋白原、玻粘连蛋白等）可能而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响的质量。在20胎牛，避免反复冻融。如何避免沉淀物的产生?建议您在使用的时候，注意下列的操作:解冻时，请按照所建议的逐步解冻法(-20至4至室温)，若解冻时改变的温度太大(如-20至37)，实验显示非常容易产生沉淀物。解冻时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。将置于37太久

17、。若在37放置太久，会变得混浊，同时中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响的质量。的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。若必须做的热灭活，请遵守56，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。基本培养基如何选择DMEM或者RPMI-培养基25Invitrogen Proprietary &悬浮细胞培养不含钙离子低CO2压力Hs 平衡盐高CO2压力Earles 平衡盐长时间培养？GlutaMAX激素作用/比色分析？无酚红高细胞密度？额外的营养物质低CO2/ 无？HEPES高代谢率/高细胞密度？高葡萄糖固有非目的细胞过度生

18、长下游处理残留蛋白的抗原性中和抗体的存在造成产量下降增加污染的可能引起细胞分化26Invitrogen Proprietary &Serum-Free Medium（SFM）专门针对角质细胞、淋巴细胞、造血细胞、内皮细胞、肝细胞、神经元细胞、胚胎干细胞、CHO细胞、293细胞、各类昆虫细胞、杂交瘤细胞、羊水细胞的无培养基27Invitrogen Proprietary &WHY?成分更加清晰消除因批次不同而带来的不确定性 保持实验的连续性易于纯化和下游处理优化特殊细胞及其功能的培养条件越来越多的无培养基 用非动物/人来源的原料制造有利于精确阐述细胞功能提高生产力更好控制生理反应SFM, PFM

19、 和CDM 培养基的区别Serum-Free Media (SFM)无需加入可能包含降解的蛋白或者蛋白块蛋白含量保持在易于纯化的最小状态优化特殊细胞培养条件Protein-Free Media (PFM)无蛋白 (不同的厂商有不同的说明)包含于动物或者植物的不明确的提取物Chemically-Defined Media (CDM)无蛋白和不明确的成分所有的成分都有一个明确的结构 ，可以提供性能一致的产品,减少批次间的差别28Invitrogen Proprietary &平衡盐溶液的选择s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是H什么？Hs 平衡盐溶液（HBS）和Ear

20、les平衡盐溶液（EBS）本质的功能差别？-HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在Eagles(2.2g/L)中比在Hs (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的值。- Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hs液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液。如果仅仅是清的组织，用Hs液就可以。洗将要在细胞培养基中29Invitrogen Proprietary &enol Red酚红：酚红在培养基中被用来作为黄色，碱性时为紫色。值的指示剂：中性时为红色，酸性时为什么时候选择不含酚红的培养基？

21、酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）由于酚红干扰检测，在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。30Invitrogen Proprietary &细胞培养试剂31Invitrogen Proprietary &Supplement: 添加剂L-Glutamine在细胞培养液中L-谷氨酰胺是大部分细胞培养基的基本成分；脱掉氨基后，L谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的和核酸代谢。L谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞性。而L-谷氨酰胺是一种并不稳定的氨基酸，在中性的水溶液具中会自发降解；需要频繁地补加L-谷氨酰胺。频繁打开盖子，增加了破坏无菌状态的可能性；过多的追加

22、L-谷氨酰胺，增加了培养基中氨的毒性水平。32Invitrogen Proprietary &替代品：GlutaMAXGlutaMax是由丙氨酸和L-谷氨酰胺缩合形成的二肽与L-Glutamine（L-谷氨酰胺）相比，含有Glutamax的培养基1. GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX- I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L谷氨酰胺几乎完全降解。2. 由于稳定性增加，因此无需反复添加，使用更方便；3.可以防止L-谷氨酰胺降解而产生利于细胞生长。性氨的累积，因而有33Invitrogen Proprietary &Stability of Gl

23、utaMAX-I vs. L-glutamine in DMEMD-MEM waaliquotedpplemented with GlutaMAX-I or L-glutamine,o vials and stored at 37C. Sles were taken dailyand frozen at -20C. Levels of GlutaMAX-I and L-glutamine were determined by HPLC.34Invitrogen Proprietary &Ammonia Levels in Supplemented MediaD-MEM waaliquotedp

24、plemented with GlutaMAX-I or L-glutamine,o vials and stored at 37C. Sles were taken daily andfrozen at -20C. Levels of ammonia were determined by HPLC.35Invitrogen Proprietary &酸钠：Pyruvate培养基中酸钠的作用是什么？酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源。但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢酸钠。36Invitrogen Proprietary &胰酶：Trypsin（1）.胰蛋

25、白酶.；（2）.胰蛋白酶.。（3）0.25% 胰蛋白酶缺点：使用或酶失活需-20度保存37Invitrogen Proprietary &细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca+, Mg+离子和8.0 , 温度 37 oC 其作用等有关。通常情况下，能力最强。另外，钙、镁离子及均能大大降低其消化能力。每次进行传代消化前，一定要用D-Hs液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为：（1）.胰蛋白酶.；（2）.胰蛋白酶.。（3）0.25% 胰蛋白酶溶液.

26、；使用液配制。多数细胞传代消化可使用.胰蛋白酶.38Invitrogen Proprietary &胰酶（Trypsin） 替代品TrypLE= Trypsin Like Enzyme非动物来源的,纯化的重组蛋白酶,其纯度比传统的胰蛋白酶更高对细胞的作用温和室温下稳定,不怕反复冻融消化细胞之前不需要用缓冲液洗涤以去除都能用)稀释失活无需胰蛋白酶抑制剂经济方便 (避免Trypsin的分装和解冻等操作)无酚红的TrypLE (避免雌激素模拟作用)(在含和不含的情况下代Trypsin直39Invitrogen Proprietary &平衡盐溶液DPBS（Dulbeccososate-Buffere

27、d Salines）Earles 平衡盐Hs平衡盐磷酸盐缓冲液40Invitrogen Proprietary &平衡盐溶液的选择s 平衡盐溶液（HBS）要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因H是什么？Hs 平衡盐溶液（HBS）和Earles平衡盐溶液（EBS）本质的功能差别？-HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，碳酸氢钠的含量在Eagles(2.2g/L)中比在H衡，以维持溶液的s (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平值。- Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hs液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液。

28、如果的组织，用Hs液就可以。仅仅是将要在细胞培养基中41Invitrogen Proprietary &FAQs1. 如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。2. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞

29、无法存活。42Invitrogen Proprietary &4 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2 ；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。5.冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后， 须立即放入37 C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另

30、冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。43Invitrogen Proprietary &6.欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞， 其离心速率一般为300 xg (约1,000rpm)，5 - 10 分钟， 过高之转速， 将造成细胞。7. 细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能， 故不可将DMSO 直接加入细胞液中， 必须使用前先行配制完成。4

31、4Invitrogen Proprietary &8.应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。9.之细胞冷冻管经，为何会发生细胞数目太少之情形？研究在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少， 大都是因为离心过程操作上的， 造成细胞的物理性损伤， 以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心， 应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。45Invitrogen Proprietary &10.之细胞或细胞存活率不佳可能原因？研

32、究在细胞培养时出现存活率不佳， 常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。使用错误或的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞， 加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于80 C 太久。11. 什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中用作值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究用加有酚红的培养基。在做流式细胞检测时，不使46Invitrogen Proprietary &细胞培养基47Invitrog

33、en Proprietary &神经细胞培养基NEUROBASALTM Media NEUROBASALTM-A MediaSerum-free mediumSerum-free Supplement: N2orB27For NSC：B27 without Vitamine Ano unwanted differentiation48Invitrogen Proprietary &昆虫细胞培养基Sf9/Sf21需要添加10% Grace medium（两种：有无添加物）无培养基 Sf9 SFM49Invitrogen Proprietary &培养基 SFM无角质细胞淋巴细胞造血细胞内皮细胞肝

34、细胞CHO细胞293细胞杂交瘤细胞羊水细胞50Invitrogen Proprietary &Stem Cell51Invitrogen Proprietary &Stem Cell Media造血干细胞间充质干细胞神经干细胞Culture Media for Four Stem Cell Types52Invitrogen Proprietary &胚胎干细胞Products for Embryonic Stem Cell (ESC)ResearchESC Culture ProductsKnockOut Serum Replacement (KSR)KnockOut DMEM (KO-DM

35、EM)DMEM/F-12 Low OsmolalityES Cell-Qualified FBSESC AntibodiesSSEA-1SSEA-3SSEA-4Tra-1-60Tra-1-81ESC Growth FactorsFGF-BASIC (full length) REC HUNoggin REC HUSonic Hedgehog (25-198) REC MS53Invitrogen Proprietary &KnockOut Products -The “Gold Standard” for serum free ESC CultureUsed together, KSR and

36、 KO-DMEM significantly reduce ESCdifferentiation compared to ESC-qualified FBS and traditional DMEM54Invitrogen Proprietary &55Invitrogen Proprietary &56Invitrogen Proprietary &Stem Cell Media胚胎干细胞造血干细胞神经干细胞Culture Media for Four Stem Cell Types57Invitrogen Proprietary &间充质干细胞骨髓间充质干细胞骨髓间充质干细胞 (Mesen

37、chymal stem cells,MSCs)是骨髓中的非造血干细胞,早期分离培养时, 其外观呈成细胞样而被称为成细胞集落形成单位(Colonyforming unit-fibroblastic, CUF-F)“Pluripotent stem cells： 可分化成 骨、软骨、脂肪、细胞、肝细胞成肌细胞、成心肌细胞、成58Invitrogen Proprietary &Today59Invitrogen Proprietary &The structure of Bone1968-1970骨髓脐带脂肪胎盘羊水牙齿Where Do MSCs Come From?间充质干细胞Traditiona

38、l Basal Culture MediaDMEM 低糖+10-20 % FBS缺点：高用量批次间差异大需预筛选适于生长的批次费用高60Invitrogen Proprietary &Products for Mesenchymal Stem CellMSC Culture ProductsMesenPRO RS MediumMSC-Qualified FBSMSC AntibodiesSTRO-1CD73CD90CD11bCD14MSC Growth FactorsFGF-BASIC (full length) REC HUBone morogenic protein-2 (BMP-2) R

39、EC HUdermal growth factor (EGF) REC HU61Invitrogen Proprietary &MesenPRO RS Medium- Reduced Serumreduced serum formulation containing 2% FBS62Invitrogen Proprietary &MesenPRO RS MediumMesenPRO RS Medium- ReducedSerumEliminates need to spend time and money pre-Mquaayinsg mFBuSltilo-ltinseage differen

40、tiation capabilitiesbonefatcartilage63Invitrogen Proprietary &MesenPRO RS MediumGene expresmediaprofiles match classicalReduced serum (2%) for consistency and variability compared to 10-20% serum mediacartilage64Invitrogen Proprietary &MesenPRO RS MediumVersatile Mediumt iitable for:MSCs derived fro

41、m Bone Marrow / Human Cord Blood /AdieMSCs derived from Human, Mouse and SheephMSC P2mMSC P165Invitrogen Proprietary &MesenPRO RS Medium66Invitrogen Proprietary &pre-qualified FBS for MSCsMSC-Qualified FBSQualified specifically for thegrowth of MSCsAttain enhanced MSC clonalefficiencyImproves expano

42、f MSCsMaains multi-lineagedifferentiation capabilitiesEliminates the need to spend time and money pre-qualifying FBS lots67Invitrogen Proprietary &Stem Cell Media胚胎干细胞造血干细胞间充质干细胞Culture Media for Four Stem Cell Types68Invitrogen Proprietary &神经干细胞Neural Stem Cell69Invitrogen Proprietary &Products for Neural Stem CellNEUROBASALTM Media NEUROBASALTM-A MediaSerum-free mediumSerum-free Supplement: N2orB27For NSC：B27 without Vitamine Ano unwanted differentiatio