下颌前突与正常人群中Nell基因单核苷酸多态性位点rs的研究定稿课件_第1页
下颌前突与正常人群中Nell基因单核苷酸多态性位点rs的研究定稿课件_第2页
下颌前突与正常人群中Nell基因单核苷酸多态性位点rs的研究定稿课件_第3页
下颌前突与正常人群中Nell基因单核苷酸多态性位点rs的研究定稿课件_第4页
下颌前突与正常人群中Nell基因单核苷酸多态性位点rs的研究定稿课件_第5页
已阅读5页,还剩65页未读 继续免费阅读

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究专业:口腔正畸学导师:王小琴教授研究生:赵华下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61前言材料与方法结果讨论结论目录前言目录2前言前言3

AllwrightandBundred通过流行病学调查显示在亚洲人群中下颌前突(MandibularPrognathism,MP)患病率较其他地区相对较高,大约为8-40%但是其致病原因至今仍不清楚。AllwrightandBundred通过流4MP有家族聚集倾向MP可能为常染色体显性遗传病局部因素有一个影响MP的主基因且符合孟德尔遗传多因素影响

GherianiMarazita

许多学者RicardoSilviene

2003年

2007年19世纪MP有家族聚集倾向MP可能为常染色体显有一个影响MP的主基52007年,余兴华等人对MP患者和正常下颌患者进行了生长激素受体基因单核苷酸多态性分析。另外还有许多学者在研究与下颌骨发育有关的基因,比如Shh﹑Nell-1﹑Ptc等。结果发现了一个位于第10外显子的1673位SNP位点碱基突变类型为腺嘌呤(A)→胞嘧啶(C)。国内研究现状2007年,余兴华等人对MP患者和正另外还有许6Nell-1基因目前对Nell-1基因的研究主要集中在骨组织工程学方面,基因改变研究未见报道。本实验对105例(实验组60例,对照组45例)受试者的Nell-1基因SNP位点rs61150458进行了初步研究。Nell-1基因目前对Nell-1基因的研究主要集中在骨7SNP位点基因GC蛋白质Glu

Asp天冬氨酸谷氨酸SNP位点基因GC蛋白质GluAsp天冬氨酸谷氨酸8研究目的探讨Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458在下颌前突与正常人群之间的差异

为下颌前突的病因学机制提供理论基础。研究目的探讨Nell-1基因单核苷酸多态性9材料与方法材料与方法10仪器及材料厂家PCR扩增仪深圳泰立仪器仪表有限公司紫外凝胶分析系统UVP凝胶电泳仪HoeferScientificInstrumentsHinfⅠ限制性内切酶Fermentaslifesciences引物生工生物工程有限公司实验试剂与仪器仪器及材料厂家PCR扩增仪深圳泰立仪器仪表有限公司紫外凝11研究对象满足以下条件的进行头颅侧位片测量:均为汉族人,且没有异族通婚史双侧颌面对称,无面部畸形无不良习惯及替牙障碍均为成年人,无外伤史,无手术史研究对象满足以下条件的进行头颅侧位片测量:12纳入标准对照组(正常):SNA、SNB、ANB、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内,2°<ANB<4°实验组(MP)

:SNA、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内,ANB<0°。纳入标准对照组(正常):SNA、SNB、ANB、上颌长、13实验组60人对照组45人采静脉血5ml提取全部DNA设计相应目的基因的引物PCR扩增目的基因HinfⅠ酶切统计学分析实验步骤实验组60人对照组45人采静脉血5ml提取全部DNA设计相应14

DNA提取采用TKM血细胞DNA快速提取法DNA提取DNA提取15目的基因引物的设计引物的设计采用Printer3.0软件上游引物:gcttccagggtggagtttta下游引物:cacagagttttggacccatgt目的基因引物的设计引物的设计采用Printer3.0软件1650μLPCR反应体系

试剂名称剂量10×Buffer5μLMgCl2(25mM)4μLdNTP(10mM)1μL上游引物(10μM)1μL下游引物(10μM)1μLTaq酶0.4μL模板DNA10μL三蒸水28μL50μLPCR反应体系试剂名称剂量10×Buffer5μL17PCR反应参数

温度(℃)时间预热942min变性9420s退火5630s延伸7230s循环次数36次PCR反应参数温度(℃)时间预热942min变性9420s18

1SspI

aat|att13

1

tctttccctaatatttggcttccagggtggagttttagtaaaaattacagaaatgtgtcc

61

MboII

n|nnnnnnntcttc84

61

NdeII

|gatc83

61

MboI

|gatc83

HinfI

g|antc101

61

tcctttgaactgctcagaaaaggatcacattcttcctgagaatcagtgctgccgtgtctg

121

MboII

n|nnnnnnntcttc167121

tagaggtaagtgggcttggtggtgggccatgcgtggggtgaggctggggctggtcttctg181

gggcatgagattttaatgaatagtatgataataacatgggtccaaaactctgtgcgctgc

酶的确定

19HinfⅠ5’…GANTC…3’3’…CTNAG…5’

HinfⅠ5’…GANTC…3’20统计学分析

比较各组间等位基因频率和基因型分布,采用卡方检验。对两组研究对象的基因型分布进行Hardy-Weinberg遗传平衡性检验所有统计学检验采用SPSS17.0软件完成,以P<0.05代表有统计学差异统计学分析比较各组间等位基因频21结果结果22电泳结果目的基因扩增产物200bpMarker目的基因电泳结果200bpMarker目的基因23实验组酶切后凝胶电泳图

100bp200bpGG型酶切后片段长度:83bp、134bp;CC型酶切后片段长度:217bpGC型酶切后片段长度:83bp、134bp、

217bp实验组酶切后凝胶电泳图100bp200bpGG型酶切后片段24对照组酶切后凝胶电泳图

100bp200bpGG型酶切后片段长度:83bp、134bp;CC型酶切后片段长度:217bpGC型酶切后片段长度:83bp、134bp、

217bp对照组酶切后凝胶电泳图100bp200bpGG型酶切后片段25等位基因频率分析组别等位基因X2P基因频数频率实验组G410.67C190.33对照组G280.620.4260.514C170.38注:P>0.05,即实验组与对照组之间等位基因频率差异无显著性。

等位基因频率分析组别等位基因X2P基因频数频率实验组G4126基因型分析组别基因型频数频率X2P实验组GG320.52GC180.30CC100.18对照组GG230.511.8350.400GC100.22CC120.27注:P>0.05,即实验组与对照组之间的基因型分布差异无显著性。

基因型分析组别基因型频数频率X2P实验组GG320.52G27讨论讨论28可单独引起成骨细胞的分化可以通过操纵一些成骨相关基因的下游途径来影响其他信号通路而促进成骨细胞的分化Cowan研究表明Nell-1蛋白只作用于颅颌面的成骨细胞,特别是对下颌骨的成骨有其特异性Nell-1基因的特点可单独引起成骨细胞的分化Nell-1基因的特点29MP的致病原因与Nell-1基因无关。由于样本量有限,其代表性有限。MP的致病原因与Nell-1的该SNP位点的变异无关。结果分析MP的致病原因与Nell-1基因无关。由于样本量有限,其代表30结论由于实验组与对照组的病例有限,对Nell-1基因与MP患者的内在联系需增加样本量做进一步的研究,对其它位点及二者之间的内在联系仍需深入探讨。Nell-1基因的rs61150458多态性位点在中国汉族MP人群与正常人群之间的等位基因频率及基因型分布差异无显著性,尚不能认为MP的致病原因与该位点的变异有关。

12结论由于实验组与对照组的病例有限,对Nell-1基Nell-31主要参考文献[1]AlexanderAE,McNamaraJAJr,FranchiL,etal.SemilongitudinalcephalometricstudyofcraniofacialgrowthinuntreatedClassIIImalocclusion[J].OrthodDentofacialOrthop,2009,135(6):1-14[2]BaccettiT,ReyD,ObertiG,etal.Long-termoutcomesofClassIIItreatmentwithmandibularcervicalheadgearfollowedbyfixedappliances[J].AngleOrthod,2009.79(5):828-234[5]WatanabeM,SudaN,OhyamaK.MandibularprognathisminJapanesefamiliesascertainedthroughorthognathicallytreatedpatients[J].OrthodDentofacialOrthop,2005,128(4):466-470[6]ChangHP,TsengYC,ChangHE.Treatmentofmandibularprognathism[J].FormosMedAssoc,2006,105(10):781-790[7]T.Yamaguchi,S.B.Park,A.Narita,etal.Genome-wideLinkageAnalysisofMandibularPrognathisminKoreanandJapanesePatients[J].DentResearch,2005,84(3):255-259[8]FrazierBS,RinconRR,ZhouJ,etal.EvidenceoflinkageinaHispaniccohortwithaClassⅢdentofacialphenotype[J].DentRes,2009,88(1):56-60[9]王豫蓉,余兴华,戴红卫,等.生长激素受体基因单核苷酸多态性在下颌前突与正常人群中的分布研究[J].2008,33(12):1522-1524[10]CowanCM,ChengS,TingK,etal.Nell-1inducedboneformationwithinthedistractedintermaxillarysuture[J].Bone,2006,28(1):48-58[11]ZhangX,KurodaS,CarpenterD,etal.CraniosynostosisintransgenicmiceoverexpessingNell-1[J].ClinInvest,2002,112(6):861-870[12]CowanCM,ShiYY,Aalamioo,etal.Adipose-derivedadultstromalcellshealcritical-sizemousecalvarialdefects[J].NatBiotechnol,2004,22(5):560-567[12]ZhangX,CarpenterD,BokuiN,etal.OverexpressionofNell-1,acraniosynostosis-associatedgene,inducesapoptosisinosteoblastsduringcraniofacialdevelopment[J].BoneMinerRes,2003,18(12):2126-2134主要参考文献[1]AlexanderAE,McNam32[13]LiebermanJR,DaluiskiA,EinhomTA.Theroleofgrowthfactorintherepairofbone.Biologyandclinicalapplications[J].BoneJointSurg,2002,84-A(6):1032-1044[14]A.A.El-Gheriani,B.S.Maher,A.S.El-Gheriani,etal.MarazitaSegregationAnalysisofMandibularPrognathisminLibya[J].DentResearch2003,82(7):523-527[15]RicardoMachadoCruz,HenriqueKrieger,RicardoFerreira,etal.MajorGeneandMultifactorialInheritanceofMandibularPrognathism[J].AmericanMedicalGenetics,2008,146A(1):71-77[16]StocktonDW,DasP,GoldenbergM,etal.MutationofPax9isassociatedwitholigodontia[J].NatGenet.2000,24(1):18-19[17]ZhouJ,LuY,GaoXH,etal.ThegrowthhormonereceptorgeneisassociatedwithmandibularheightinaChinesepopulation[J].DentRes,2005,84(11):1052-1057[18]ZhangX,KurodaS,CarpenterD,etal.CraniosynostosisintransgenicmiceoverexpressingNell-1[J].ClinInvest,2002,110(6):861-870[19]LanderES.Thenewgenomics:globalviewsofbiology[J].Science,1996,274(5287):536-539[20]DavidG,Wang.Large-scaleidentificationmappingandgenotypingofsinglenuclotidepolymorphismsinthehumangenome[J].Science,1998,280(5366):1077-1082[21]LaiE.ApplicationofSNPtechnologiesinmedicine:lessonsleamedandfuturechallenges[J].GenomeRes,2001,11(6):927-929[22]SachidanandamR,WeissmanD,SchmidtSC,etal.Amapofhumangenomesequencevariationeontaining1.42millionsinglenucleotidepolymorphisms[J].Nature,2001,409(6822):928-933[23]FomageM,DorisPA.Useofsinglenucleotidepolymorphismsforgenediscoveryinhypertension[J].CurrHypertensRep,2000,2(1):23-31[13]LiebermanJR,Daluiski33

首先,我衷心感谢我的导师王小琴教授,在三年来的学习、工作和生活中给予我无微不至的关怀和启迪。是她开拓了我的思路,让我走进了科研的大门。在我完成学位论文的每一步都离不开她的精心指导和关怀。她对我的帮助我终生难忘,受益匪浅。在收集病例中黄荣花老师、潘涛老师等也都给予了我极大的帮助,在这里请接受我诚挚的谢意。其次,我要感谢山西医科大学附属一院口腔科的各位老师,在我实习阶段,是你们毫无保留地教我知识,指导我操作,让我在实习阶段学到了许多。最后感谢我的家人这么多年对我含辛茹苦,倾尽心血的坚定支持,让我安心的完成学业。祝大家身体健康,万事如意!谢谢!致谢致谢34谢谢35下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458的研究专业:口腔正畸学导师:王小琴教授研究生:赵华下颌前突与正常人群中Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs636前言材料与方法结果讨论结论目录前言目录37前言前言38

AllwrightandBundred通过流行病学调查显示在亚洲人群中下颌前突(MandibularPrognathism,MP)患病率较其他地区相对较高,大约为8-40%但是其致病原因至今仍不清楚。AllwrightandBundred通过流39MP有家族聚集倾向MP可能为常染色体显性遗传病局部因素有一个影响MP的主基因且符合孟德尔遗传多因素影响

GherianiMarazita

许多学者RicardoSilviene

2003年

2007年19世纪MP有家族聚集倾向MP可能为常染色体显有一个影响MP的主基402007年,余兴华等人对MP患者和正常下颌患者进行了生长激素受体基因单核苷酸多态性分析。另外还有许多学者在研究与下颌骨发育有关的基因,比如Shh﹑Nell-1﹑Ptc等。结果发现了一个位于第10外显子的1673位SNP位点碱基突变类型为腺嘌呤(A)→胞嘧啶(C)。国内研究现状2007年,余兴华等人对MP患者和正另外还有许41Nell-1基因目前对Nell-1基因的研究主要集中在骨组织工程学方面,基因改变研究未见报道。本实验对105例(实验组60例,对照组45例)受试者的Nell-1基因SNP位点rs61150458进行了初步研究。Nell-1基因目前对Nell-1基因的研究主要集中在骨42SNP位点基因GC蛋白质Glu

Asp天冬氨酸谷氨酸SNP位点基因GC蛋白质GluAsp天冬氨酸谷氨酸43研究目的探讨Nell-1基因单核苷酸多态性位点rs61150458在下颌前突与正常人群之间的差异

为下颌前突的病因学机制提供理论基础。研究目的探讨Nell-1基因单核苷酸多态性44材料与方法材料与方法45仪器及材料厂家PCR扩增仪深圳泰立仪器仪表有限公司紫外凝胶分析系统UVP凝胶电泳仪HoeferScientificInstrumentsHinfⅠ限制性内切酶Fermentaslifesciences引物生工生物工程有限公司实验试剂与仪器仪器及材料厂家PCR扩增仪深圳泰立仪器仪表有限公司紫外凝46研究对象满足以下条件的进行头颅侧位片测量:均为汉族人,且没有异族通婚史双侧颌面对称,无面部畸形无不良习惯及替牙障碍均为成年人,无外伤史,无手术史研究对象满足以下条件的进行头颅侧位片测量:47纳入标准对照组(正常):SNA、SNB、ANB、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内,2°<ANB<4°实验组(MP)

:SNA、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内,ANB<0°。纳入标准对照组(正常):SNA、SNB、ANB、上颌长、48实验组60人对照组45人采静脉血5ml提取全部DNA设计相应目的基因的引物PCR扩增目的基因HinfⅠ酶切统计学分析实验步骤实验组60人对照组45人采静脉血5ml提取全部DNA设计相应49

DNA提取采用TKM血细胞DNA快速提取法DNA提取DNA提取50目的基因引物的设计引物的设计采用Printer3.0软件上游引物:gcttccagggtggagtttta下游引物:cacagagttttggacccatgt目的基因引物的设计引物的设计采用Printer3.0软件5150μLPCR反应体系

试剂名称剂量10×Buffer5μLMgCl2(25mM)4μLdNTP(10mM)1μL上游引物(10μM)1μL下游引物(10μM)1μLTaq酶0.4μL模板DNA10μL三蒸水28μL50μLPCR反应体系试剂名称剂量10×Buffer5μL52PCR反应参数

温度(℃)时间预热942min变性9420s退火5630s延伸7230s循环次数36次PCR反应参数温度(℃)时间预热942min变性9420s53

1SspI

aat|att13

1

tctttccctaatatttggcttccagggtggagttttagtaaaaattacagaaatgtgtcc

61

MboII

n|nnnnnnntcttc84

61

NdeII

|gatc83

61

MboI

|gatc83

HinfI

g|antc101

61

tcctttgaactgctcagaaaaggatcacattcttcctgagaatcagtgctgccgtgtctg

121

MboII

n|nnnnnnntcttc167121

tagaggtaagtgggcttggtggtgggccatgcgtggggtgaggctggggctggtcttctg181

gggcatgagattttaatgaatagtatgataataacatgggtccaaaactctgtgcgctgc

酶的确定

54HinfⅠ5’…GANTC…3’3’…CTNAG…5’

HinfⅠ5’…GANTC…3’55统计学分析

比较各组间等位基因频率和基因型分布,采用卡方检验。对两组研究对象的基因型分布进行Hardy-Weinberg遗传平衡性检验所有统计学检验采用SPSS17.0软件完成,以P<0.05代表有统计学差异统计学分析比较各组间等位基因频56结果结果57电泳结果目的基因扩增产物200bpMarker目的基因电泳结果200bpMarker目的基因58实验组酶切后凝胶电泳图

100bp200bpGG型酶切后片段长度:83bp、134bp;CC型酶切后片段长度:217bpGC型酶切后片段长度:83bp、134bp、

217bp实验组酶切后凝胶电泳图100bp200bpGG型酶切后片段59对照组酶切后凝胶电泳图

100bp200bpGG型酶切后片段长度:83bp、134bp;CC型酶切后片段长度:217bpGC型酶切后片段长度:83bp、134bp、

217bp对照组酶切后凝胶电泳图100bp200bpGG型酶切后片段60等位基因频率分析组别等位基因X2P基因频数频率实验组G410.67C190.33对照组G280.620.4260.514C170.38注:P>0.05,即实验组与对照组之间等位基因频率差异无显著性。

等位基因频率分析组别等位基因X2P基因频数频率实验组G4161基因型分析组别基因型频数频率X2P实验组GG320.52GC180.30CC100.18对照组GG230.511.8350.400GC100.22CC120.27注:P>0.05,即实验组与对照组之间的基因型分布差异无显著性。

基因型分析组别基因型频数频率X2P实验组GG320.52G62讨论讨论63可单独引起成骨细胞的分化可以通过操纵一些成骨相关基因的下游途径来影响其他信号通路而促进成骨细胞的分化Cowan研究表明Nell-1蛋白只作用于颅颌面的成骨细胞,特别是对下颌骨的成骨有其特异性Nell-1基因的特点可单独引起成骨细胞的分化Nell-1基因的特点64MP的致病原因与Nell-1基因无关。由于样本量有限,其代表性有限。MP的致病原因与Nell-1的该SNP位点的变异无关。结果分析MP的致病原因与Nell-1基因无关。由于样本量有限,其代表65结论由于实验组与对照组的病例有限,对Nell-1基因与MP患者的内在联系需增加样本量做进一步的研究,对其它位点及二者之间的内在联系仍需深入探讨。Nell-1基因的rs61150458多态性位点在中国汉族MP人群与正常人群之间的等位基因频率及基因型分布差异无显著性,尚不能认为MP的致病原因与该位点的变异有关。

12结论由于实验组与对照组的病例有限,对Nell-1基Nell-66主要参考文献[1]AlexanderAE,McNamaraJAJr,FranchiL,etal.SemilongitudinalcephalometricstudyofcraniofacialgrowthinuntreatedClassIIImalocclusion[J].OrthodDentofacialOrthop,2009,135(6):1-14[2]BaccettiT,ReyD,ObertiG,etal.Long-termoutcomesofClassIIItreatmentwithmandibularcervicalheadgearfollowedbyfixedappliances[J].AngleOrthod,2009.79(5):828-234[5]WatanabeM,SudaN,OhyamaK.MandibularprognathisminJapanesefamiliesascertainedthroughorthognathicallytreatedpatients[J].OrthodDentofacialOrthop,2005,128(4):466-470[6]ChangHP,TsengYC,ChangHE.Treatmentofmandibularprognathism[J].FormosMedAssoc,2006,105(10):781-790[7]T.Yamaguchi,S.B.Park,A.Narita,etal.Genome-wideLinkageAnalysisofMandibularPrognathisminKoreanandJapanesePatients[J].DentResearch,2005,84(3):255-259[8]FrazierBS,RinconRR,ZhouJ,etal.EvidenceoflinkageinaHispaniccohortwithaClassⅢdentofacialphenotype[J].DentRes,2009,88(1):56-60[9]王豫蓉,余兴华,戴红卫,等.生长激素受体基因单核苷酸多态性在下颌前突与正常人群中的分布研究[J].2008,33(12):1522-1524[10]CowanCM,ChengS,TingK,etal.Nell-1inducedboneformationwithinthedistractedintermaxillarysuture[J].Bone,2006,28(1):48-58[11]ZhangX,KurodaS,CarpenterD,etal.CraniosynostosisintransgenicmiceoverexpessingNell-1[J].ClinInvest,2002,112(6):861-870[12]CowanCM,ShiYY,Aalamioo,etal.Adipose-derivedadultstromalcellshealcritical-sizemousecalvarialdefects[J].NatBiotechnol,2004,22(5):560-567[12]ZhangX,CarpenterD,BokuiN,etal.OverexpressionofNell-1,acraniosynostosis-associatedgene,inducesapoptosisinosteoblastsduringcraniofacialdevelopment[J].BoneMinerRes,2003,18(12):2126-2134主要参考文献[1]AlexanderAE,McNam67[13]LiebermanJR,DaluiskiA,EinhomTA.Theroleofgrowthfactorintherepairofbone.Biologyandclinicalapplications[J].BoneJointSurg,2002,84-A(6):1032-1044[14]A.A.El-Gheriani,B.S.Maher,A.S.El-Gheriani,etal.MarazitaSegregationAnalysisofMandibularPrognathisminLibya[J].DentResearch2003,82(7):523-527[15]RicardoMachadoCruz,HenriqueKrieger,RicardoFerreira,etal.MajorGeneandMultifactorialInheritanceofMandibularPrognat

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论