月季花药培养公开课

花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月，开花连续不断，通常扦插就可以成活。

课题2月季的花药培养知识回顾花药培养的原理（单倍体育种的过程？）花药离体培养（N）单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体加倍植株（2N）优点：1明显缩短育种年限2后代植株都为纯合子。正常植株（2N）（一）被子植物的花粉发育（1）被子植物定义：凡是种子有果皮包被着，胚珠有子房壁包被着的植物，就叫做被子植物（绿色开花植物）1、被子植物和裸子植物（2）裸子植物定义：凡是胚珠裸露，外面没有子房壁包被，种子外面没有果皮包被的植物称为裸子植物（无真正意义上的花）实例：玉米、大豆、梨、杏实例：松、杉、柏一、基础知识花药花丝（一）被子植物的花粉发育花丝花药：囊状结构，内有很多花粉（一）被子植物的花粉发育雄蕊花药药隔：花药中部，由薄壁细胞构成，内有维管束（疏导组织）花粉囊（4或2个）表皮纤维层（3）花药的结构：（4）被子植物的花粉发育①经历时期：四分体时期、单核期、双核期等阶段②花粉发育过程：花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞.小孢子母细胞（花粉母细胞）减数分裂4个小孢子（小孢子四分体时期）

1个小孢子（单核居中期）：这时的细胞含有浓厚的原生质，核位于细胞中央称为单核居中期②花粉发育过程：4个单倍体细胞连在一起，进入单核期时（四分体的4个单倍体细胞彼此分离，各自形成具有4个单细胞核的花粉粒）有丝丝分分裂裂1个个小小孢孢子子（单核核靠靠边边期期））：随随着着细细胞胞不不断断长长大大，，细细胞胞核核由由中中央央移移向向细细胞胞一一侧侧称称为为单单核核靠靠边边期期花粉粉管管细细胞胞核核生殖殖细细胞胞核核营养养细细胞胞生殖殖细细胞胞有丝分裂2个个精精子子（基基因因型型相相同同））双核核期期两个个精精子子和和一一个个营营养养核核的的基基因因型型相相同同生殖殖细细胞胞核核与与花花粉粉管管细细胞胞核核基基因因型型相相同同；；（一一））被被子子植植物物的的花花粉粉发发育育减数分裂细胞生长小孢孢子子母母细细胞胞或花花粉粉母母细细胞胞2N4个小小孢孢子子N四分分体体时时期期1个小小孢孢子子N单核核居居中中期期单核核靠靠边边期期N单核花粉粒有丝分裂有丝分裂精子子（花花粉粉或或花花粉粉细细胞胞））营养养细细胞胞核核双核花粉粒N×2三核花粉粒N×3（二二））产产生生花花粉粉植植株株的的两两种种途途径径1、、体细细胞胞胚胚（（胚胚状状体体））：：在在组组织织培培养养过过程程中中，，某某些些体体细细胞胞在在形形态态上上转转变变为为与与合子子发发育育成成的的胚胚非非常常相相似似的的结结构构，其发育育过过程程亦亦与与合合子子胚胚类类似似。（二二））产产生生花花粉粉植植株株的的两两种种途途径径2、、产生生花花粉粉植植株株的的两两种种途途径径：：通过过花花药药培培养养产产生生的的花花粉粉植植株株（（单单倍倍体体植植株株））一一般般有有两两种种途途径径：：一一种种是是花花粉粉通通过过胚胚状状体体阶阶段段发发育育为为植植株株；；另另一一种种是是花花粉粉在在诱诱导导培培养养基基上上先先形形成成愈愈伤伤组组织织，，再再将将愈愈伤伤组组织织诱诱导导分分化化成成植植株株。。①花药药中中的的花花粉粉②花药药中中的的花花粉粉脱分分化化胚状状体体（花花粉粉胚胚））分化化丛芽芽脱分分化化愈伤伤组组织织再分分化化丛芽芽诱导导生根根移栽栽两种种途途径径之之间间无绝绝对对界界限限，主要要取取决决于于培养养基基中中激素素的的种种类类及及其其浓浓度度配配比比。。诱导导花花粉粉植植株株能能否否成成功功及及诱诱导导成成功功率率的的高高低低，，受受多多种种因因素素影影响响，，其其中中材料料的的选选择择与培养养基基的的组组成成是主要要影影响响因因素素。（三三））影影响响花花药药培培养养的的因因素素①不同同植植物物的诱诱导导成成功功率率很很不相相同同；②同一一种种植植物物的的生理理状状况况对诱诱导导成成功功率率也也有有直直接接影响响：花期期早期期时的的花花药药比后后期期的更容容易易产生生花花粉粉植植株株。。一般般月月季季的的花花药药培培养养时时间间选选在在5月月初初到到5月月中中旬旬，，即即月月季季的的初初花花期期。。选材材是是否否成成功功是是花花药药培培养养成成功功的的关关键键（1））选选材材1、、材材料料的的选选择择：：花期期：：花期期一一般般指指在在一一个个生生长长季季内内植植株株开开花花的的时时间间段段。。比比如如某某些些种种类类的的月月季季，，从从5月月初初一一直直到到11月月都都连连续续开开花花。。那那么么5月月初初就就叫叫做做该该种种月月季季的的初初花花期期或或花花期期早早期期。。花花期期早早期期的的花花蕾蕾营营养养状状态态及及生生理理状状态态都都比比较较好好，，能能提提高高花花粉粉诱诱导导成成功功率率。。选材是否否成功是是花药培培养成功功的关键键（2）花药培养养时期的的选择：：合适的花花粉发育时期期是提高诱导导成功率率的重要因素素①原因：：因为并不是任任何时期期的花粉都可以经过培养养产生愈愈伤组织织或胚状状体，花花粉发育育的过程程中，只有某一一个时期期对离体体刺激敏敏感。（三）影影响花药药培养的的因素一般来说说，在单单核期，，细胞核核由中央央移向细细胞一侧侧的时期期，花药药培养的的成功率率最高。。即：最适合花花药培养养的小孢孢子发育育时期为为单核靠靠边期。。②花药时期期选择：：单核靠边边期。选择单核期以以前的花药接接种，质地幼嫩嫩，极易易破碎；选择单核期之之后的花药接接种，花瓣松动动，又给材料的消毒困难难，且难以挑选到单核期的的花药。③其它时期选择择的缺点点④单核期花花药的挑挑选：通常选择择完全未未开放的的花蕾。。盛开的或略微微开放的的花，都都不宜选选作实验验材料。。⑤选择完全全未开放放花蕾的的原因：：花瓣松动动后，微生生物就可可能侵入入到花药药给材料的的消毒带来来困难。。旁栏思考考：为什么花花瓣松动动会给消消毒带来来困难？？可挑选到到单核期期的花,菌少、易易消毒2、培养养基的组组成：培培养基的的组成会会影响脱脱分化与与再分化化花药培养养基可能能因植物物的不同同而有所所变化如如小麦中为为N6马铃薯、、月季中中为MS油菜中为为B5培培养基月季花药药培养基基配方：：在1000mlMS培养基基配方中中添加2,4——D(0.4mg)、、KT(0.2mg)、IAA(4mg)；调节节PH至至5.83、其他他影响因因素：如亲本的生生长条件件、材料的低低温预处处理以及接种密度度对诱导成成功率都都有影响响。月季花药药培养时时的花粉粉粒最好好是（））A、四分分体时期期B、二核或三三核花粉粉粒C、单核核期C实验操作作一、材料料的选取取二、材料料的消毒毒三、接种种和培养养（一）材材料选取取2、通过镜检来确定是是否处于于适宜的的发育期期。方法：醋酸洋红红法(将染色体体染成红红色)焙花青-铬矾法(花粉细胞胞核染成成蓝黑色色)。1、从花药看看：从花粉看看：从花蕾看看：花药（载载玻片上上）→1%的醋酸洋洋红1滴→用镊镊柄将花花药捣碎碎，盖上上盖玻片片→镜检检（花粉粉粒的细细胞核被被染成红红色）花药（在在卡诺氏氏固定液液中处理理20min）→取出出，置于于载玻片片上→焙花青－－铬矾溶溶液染色色→盖上盖盖玻片→→镜检（（花粉粒粒的细胞胞核被染染成蓝黑黑色）月季的初初花期单核期完全未开开放的（二）材材料的消消毒5、无菌水水冲洗3～5次花药的外外面有花花萼、花花瓣保护护，通常常处于无无菌状态态1、花蕾蕾用体积分数数为70%的酒酒精浸泡30秒2、无菌菌水清洗洗3、无菌菌吸水纸纸吸干花花蕾表面面的水分分4、放入入质量分数数为0.1%的的氯化汞汞溶液中2～4分钟（（质量分数数为1%的次氯酸钙钙溶液或饱和漂漂白粉溶溶液）（三）接接种和培培养1灭菌后花花蕾，要要在下除去萼萼片和花花瓣，并并立即将将花药接接种到培培养基上上。3通常每瓶瓶接种花花药，温度控控制在左右，。幼小植植株形成成后才。2在剥离花花药时，，要尽量量（否则接种种后，容容易从受受伤部位位产生二二倍体愈愈伤组织织），同时时还要彻彻底，因为与花花丝相连连的花药药不利于于愈伤组组织或胚胚状体的的形成。一般经过过20-30天天培养后后，会发发现花药药开裂，，长出愈伤组织织或释放放出胚状状体。将愈伤伤组织及及时转移移到分化化培养基基上，以以便进一一步分化化出再生生植株。。如果花药药开裂释释放出胚胚状体，，则一个个花药内内就会产产生大量量幼小的的植株，，必须在在花药开开裂后尽尽快将幼幼小植株株分开，，分别移移植到新新的培养养基上，，否则这这些植株株将很难难分开。。无菌条件件不损伤花花药去除花丝丝7-10个25℃不需要光光照需要光照照部分花药药通过胚胚状体途途径形成成小植株株烟草花药药培养胚状体发发育途径径愈伤组织织转接种种到再生生培养基基愈伤组织织分化形形成再生生植株水稻花药药培养愈伤组织织发育途途径部分花药药产生愈愈伤组织织接种在平平板上的的水稻花花药鉴定和筛筛选：常常会出出现染色色体倍性性的变化化主要原因因是花粉管核核和生殖殖核融合合造成的植物组织织培养技技术与花花药培养养技术的的比较1离体体培养的的外植体体为体细胞。2有丝丝分裂的的过程，，染色体数数量不变变。1花粉粉是