秋季12内分泌外泌体代谢课件

1••1 •证明巨噬细胞能分泌证明巨噬细胞能分泌miRNA而且这些miRNA实验材料：Cy3标记的miR-骨髓来源的巨噬细胞3T3-L1实验设计：Cy3-miR223转染转染后的BMDMs与3T3-L1adipocyte共培养实验结果：荧光显微镜观察：Cys表达（红色荧光可见qPCR检测miR223在3T3-L1adipocyte的表达：miR223证明脂肪组织巨噬细胞（ATM）能证明脂肪组织巨噬细胞（ATM）能 实验材料：从小鼠的内脏脂肪组织（VAT）分离实验设计：分离得到的ATMs培养72小时（IMDM+10%exosome-FBS），实验结果：B.电镜观察：可见直径30-100nm的细胞外囊泡C.Nanosight分析：大量直径30-100nm的D.WBATMs证明ATM证明ATM 3T3-L1adipocyteGW4869：EV实验设计：E.荧 PKH26标记的外泌体加入3T3-L1adipocyte培养基，培养12hF.转染miR223的ATM与3T3-L1adipocyte共培养，（加/不加GW4869）实验结果：E.荧光显微镜观察：PKH26FqPCR检测miR223在3T3-L1adipocyte的表达：miR223Fig.1巨噬细胞分泌miRNA，分泌的miRNA 泌体 泌体携带miRNA进入受体细胞ATM分泌包含miRNA实验设计：尾静脉注射外泌体，30ug/7days，2A.12h禁食，1g葡萄糖/kgB.6h禁食，0.7units胰岛素/kg实验结果：A.葡萄糖耐受测试（GTTs）：B.胰岛素耐受测试（ITTs）： 实验设计：尾静脉注射外泌体，30ug/7days，2 实验结果：C.葡萄糖输注率D.肌肉胰岛素刺激的葡萄糖利用率（IS-GDR)实验设计：普通饲料喂养的野生型瘦小鼠尾静脉注射外泌体， 取组织检实验结果：WB：胖小鼠来源的外泌降低了不同组织胰岛素激活的AKTFig.2 实验材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primary来源于瘦小鼠和胖小鼠ATM实验设计：A/B.葡萄糖摄取 饥饿/外泌体刺激，100nM 刺激30minC.葡萄糖产出 饥饿/外泌体刺激，100nM /GCG刺激30min实验结果：A/B.葡萄糖摄取：肥胖鼠外泌体抑制脂肪细胞和肌细胞 C.葡萄糖产出：肝细胞胰 实验材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primary来源于瘦小鼠和胖小鼠ATM实验结果：WB：肥胖鼠外泌降低了不同组织细胞 miRNAmiRNA实验材料：Drosha敲除的M1BMDMs（miRNA无法合成实验设计：葡萄糖摄取 饥饿/外泌体刺激，100nM 刺激30min实验结果：不含miRNA的外泌体（M1ExossiRNA-Drosha）对 Fig.3 外泌体发挥作用是依赖于miRNA实验设计：尾静脉注射外泌体， A.12h禁食，1g葡萄糖/kgB.6h禁食，0.7units /kg体重，腹腔注实验结果：A.葡萄糖耐受测试（GTTs）：B. 来源于瘦小鼠和胖小鼠ATM实验设计：尾静脉注射外泌体，30ug/7days，2 实验结果：C.葡萄糖输注率D.肌肉胰 实验材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；实验设计：葡萄糖摄取 饥饿/外泌体刺激，100nM 刺激30min实验结果：葡萄糖摄取：瘦小鼠外泌体进一步促进脂肪细胞和肌细胞 Fig.4 来源于瘦小鼠的外泌体能抑制肥胖诱导的 抵抗实验材料：来源于瘦小鼠和肥胖鼠ATM实验设计：外泌体miRNA提取，小 （Illumina），定量分实验结果：miR155实验材料：来源于瘦小鼠和肥胖鼠ATM/实验材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primary来源于瘦小鼠和胖小鼠ATM实验设计：外泌体刺激细胞24h后，qPCR检测miR155实验结果：肥胖鼠外泌体刺激组，miR155miR155Fig.5通过miRNA ，发现miR155在肥胖鼠外泌体表达量明显高于瘦小鼠qPCR结果证实miR155在肥胖鼠ATM肥胖诱导小鼠ATM及外泌体miRNAGlucoseuptake&Glucose实验材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primaryhepatocyte 实验设计：miR155质粒转染24h后，3T3-L1adipocyte和L6做葡萄糖摄取实验；Primaryhepatocyte miR155实验材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primaryhepatocyte 实验设计：miR155质粒转染24h后，做WB，检测靶蛋白：PPAR-实验结果：miR155过表达，其靶 GLUT4的miR155实验材料：3T3-L1adipocyte；L6myocyte；Primaryhepatocyte 实验结果：miR155过表达，结合Ago的PPAR-γmRNA量显著增加。miR155miR155实验材料：3T3-L1adipocyte；L6myocytemiR155Rosiglitazone（PPAR-γagonist）

实验设计：miR155质粒转染24h后，Rosipretreat，insulintreat，实验结果：miR155过表达，Rosi能减弱miR155对胰 诱导的glucoseuptake的葡萄糖， 敏感性（体内实验材料：HFD-miR-155KO小鼠；HFD小鼠；HFDBMT小鼠；HFDBMT-miR-155KO小鼠实验设计：尾静脉注射外泌体， 12h禁食，1g葡萄糖/kg6h禁食，0.7units /kg体重，腹腔注 miR155miR155的作用机理研究（体内实验材料：HFDWT小鼠；HFDBMT小鼠；HFDBMT-miR-155KO小鼠实验结果：在小鼠adipocyte和hepatocyte，miR155的表达量为：HFDWT小鼠>HFDBMT小鼠>HFDBMT-miR-155KOHFDBMT-miR-155KO小鼠PPAR-γ和GL