药物分析 第九章 二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析

第九章二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析

药物分析主讲:戈振凯药物分析教研室定义:

钙通道阻滞药，是指能选择性地阻滞Ca2+经细胞膜上电压依赖性钙通道进入胞内、减少胞内Ca2+浓度，从而影响细胞功能的药物，也称“钙拮抗药”（calciumchannelblocker）。

二氢吡啶类（Dihydropyridines，DHP）钙通道阻滞药物：为目前临床上特异性最高、作用最强的一类钙拮抗剂，广泛应用于缺血性心血管疾病，高血压、脑血管疾病等的治疗。硝苯地平为第一个上市的DHP药物。中国药典2010版收载：硝苯地平、尼群地平、尼莫地平、尼索地平、非洛地平及制剂17种。其他国家药典收载：苯磺酸氨氯地平、拉西地平、伊拉地平、尼伐地平、盐酸尼卡地平及制剂。一、结构(Structure)

吡啶的结构：母核结构：苯基-1,4二氢吡啶的母核第一节二氢吡啶类药物的结构与性质二氢吡啶类药物的基本骨架：为活性必需，变成吡啶环或六氢吡啶环活性消失为活性必需，若为乙酰基或氰基活性降低，若为硝基则激活钙通道邻、间位有吸电子基团活性较佳，对位取代活性下降取代基与活性关系次序：H＜甲基＜环烷基＜苯基或取代苯基影响作用部位，5,6位取代酯基不同，为手性中心硝苯地平（nifedipine)尼群地平（nitrendipine)尼莫地平（nimodipine)尼索地平（nisoldipine)非洛地平（Felodipine)拉西地平（Lacidipine)伊拉地平（Isradipine)尼伐地平（Nilvadipine)苯磺酸氨氯地平AmlodipineBesylate二、主要理化性质(feature)1.二氢吡啶环的还原性

二氢吡啶环具有还原性，可用氧化还原反应鉴别和氧化还原滴定法进行含量测定。2.硝基的氧化性

苯环上大多有硝基，可被还原为芳伯氨基，用重氮化-偶合反应鉴别。3.二氢吡啶环氨基质子解离性

二氢吡啶类药物与碱作用后，二氢吡啶环1,4-位氢可以发生解离，形成共轭环发生颜色变化，可以进行鉴别。4.旋光性

本类药物的C4位多为手性碳原子，具有旋光性。6.吸收光谱特性

本类药物具有芳环，有明显的紫外吸收特征和红外特征。（定性定量分析）5.不稳定性

二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学反应，因此要避光保存此类药物。第二节鉴别试验(identification)（一）与亚铁盐的反应一、化学鉴别法

利用苯环硝基的氧化性，可将Fe(OH)2氧化成Fe(OH)3(红棕色沉淀）如：尼莫地平及制剂的鉴别（ChP2010）尼莫地平溶解乙醇新制5%硫酸亚铁铵2ml,1.5mol/LH2SO4溶液1滴0.5mol/L氢氧化钾溶液1ml振摇灰绿色沉淀红棕色沉淀1min（二）与NaOH反应

DHP在丙酮溶液与NaOH试液反应，1,4-位氢发生解离，产生共轭效应，显橙红色。如：硝苯地平，尼群地平，尼索地平（ChP2010）橙红色溶液硝苯地平溶解丙酮20%氢氧化钠溶液3-5滴振摇（三）沉淀反应

本类药物含有1,4-二氢吡啶结构，可与重金属盐类形成沉淀。如：尼莫地平+HgCl2白色沉淀尼群地平+KBiI4橙红色沉淀尼莫地平注射液萃取乙醚取乙醚层蒸干，加乙醇2ml振摇白色沉淀分液漏斗1%氯化汞溶液3ml（四）重氮化-偶合反应

利用苯环硝基的氧化性，在酸性条件下被锌粉还原成芳伯胺基，可用重氮化-偶合反应进行鉴别。如：硝苯地平（BP2010，JP15）硝苯地平滤液盐酸-水-乙醇(1.5:3.5:5)10ml亚硝酸钠溶液(10g/L)5ml摇匀显红色温热，锌粒0.5g,放置5min，过滤放置2min氨基磺酸氨溶液(50g/L)2ml盐酸萘乙二胺溶液(5g/L)2ml（一）紫外分光光度法（二）红外分光光度法

本类药物含有苯环，可采用红外吸收光谱进行鉴别。药物溶剂浓度(mg/ml)λnm(nm)吸收度(A)尼群地平无水乙醇1353/303比值2.1-2.3二、分光光度法（一）HPLC法（二）TLC法BP2010：硝苯地平及制剂、非洛地平及制剂、尼莫地平片（注射液）USP33：硝苯地平胶囊Ch.p2010:尼群地平片鉴别三、色谱法

二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规定在避光条件下进行有关物质检查，大多采用HPLC法例：硝苯地平中有关物质检查第三节有关物质的检查

(Detectionofspecificimpurities)硝苯地平在光照和氧化剂存在条件下分别生成两种降解氧化产物：杂质I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯杂质II：2,6-二甲基-4-(2-亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯

具体方法（P259-260）1.供试液Ⅰ和Ⅱ的制备2.有关杂质对照品液Ⅰ和Ⅱ的制备3.色谱条件填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶流动相：甲醇-水（3：2）检测波长：235nm。结果：按外标法以峰面积计算，均不得超过0.1%，其他单个杂质的峰面积不得大于对照品溶液中硝苯地平峰面积，杂质总量不得过0.5%。铈量法UVHPLC第四节含量测定(Assay)二氢吡啶类药物具有还原性，可用铈量法测定含量

铈量法：也称为硫酸铈法，是以Ce(SO4)2为标准溶液的氧化还原滴定法。一、铈量法基本原理：Ce4+

（黄色）

C3+（无色）终点指示：①Ce4+为黄色，Ce3+为无色，Ce4+可自身作为指示剂，但不够灵敏。②常用邻二氮菲作为指示剂，即稍过量的Ce4+将指示液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色，以指示终点的到达。特点：①以Ce(SO4)2为滴定液的氧化还原滴定，酸度低时Ce4+易水解，故应在强酸条件下进行；且Ce(SO4)2标准溶液稳定，长时间放置、曝光、加热不会引起浓度变化。②Ce4+还原为Ce3+是单电子转移，不是生成中间价态，反应简单，副反应少。③大部分有机物不与Ce(SO4)2作用，不干扰测定。④特别适用于糖浆剂以及片剂等制剂药物的含量测定。邻二氮菲指示液（临用新制）邻二氮菲-Fe(II)指示剂：配置方法：将1.485g一水合邻二氮菲和0.695gFeSO4·7H2O溶于100mL水中配制。如硝苯地平的测定测定原理：可用下列反应式表示：

终点时（邻二氮菲-Fe(II)指示剂）:微过量的Ce4+将指示剂中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙红色配合物离子呈无色，以指示终点的到达。如：尼莫地平，尼群地平，非洛地平，硝苯地平采用该法定量。（ChP2010）ChP2010硝苯地平的含量测定：

取本品约0.4g，精密称定，加无水乙醇50ml，微热使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50℃左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液（0.1mol/L）相当于17.32mg的C17H18N2O6。含量计算公式：

本类药物具有苯环，在紫外光区有特征吸收，可用UV法测定含量。尼群地平胶囊的含量测定(Ch.p2010):操作：

10粒100ml100ml吸光度A取对照品同法测定，计算。无水乙醇取2ml无水乙醇353nm测定二、紫外-可见分光光度法高效分离，高灵敏度和高选择性－－可消除有关物质及制剂中辅料的干扰，准确测定药物含量。各国药典测定这类药物及制剂大多采用此法。例：尼莫地平分散片的含测（Ch.p2010）：色谱条件：色谱柱：ODS，流动相：甲醇-乙腈-水(35:38:27)，流速：1.0ml/min，检测波长：235nm理论塔板数：以尼莫地平峰计不低于8000，分离度符合要求。测定方法：避光操作取细粉（相当于10mg）50ml50ml峰面积取对照品同法测定，计算。流动相超声15min离心10min取上清液5ml10ul三、高效液相色谱法体内药物分析DHP类药物口服剂量小，肝脏首过作用大