甲型流感病毒抗原检测方法

关于甲型流感病毒抗原检测方法第1页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三预期用途流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，潜伏期为1-3天，患者发病突然，主要症状有畏寒、头痛、浑身肌肉疼痛、无力、干咳等。第2页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三万泰生物甲流感病毒抗原诊断试剂盒采用免疫渗滤技术，定性检测人鼻咽拭子或咽拭子样本中的甲流感病毒抗原。原理：采用双抗体夹心法原理检测甲流感病毒核蛋白抗原。硝酸纤维膜上预包被抗-FluANP的单克隆抗体，若待测样品中存在FluANP抗原，经裂解液处理后，抗原可与包被抗体结合，形成抗原-抗体复合物（Ag-Ab），随后加入抗-FluANP酶标试剂（Ab-HRP）,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物（Ab-Ag-Ab-HRP),最后通过酶催化底物显色，生成蓝色产物，若样品中无FluANP抗原，不显色。第3页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三注意事项样本采集不当、样本储存不当、标本不新鲜或样本反复冻融均会影响检测结果。采集的样本若存在个别高浓度药物（如鼻腔喷雾药剂）会影响检测结果。检测试剂仅对样本中的A型流感病毒抗原提供定性检测。阳性结果仅表示样本中A型流感病毒抗原的存在，而不等作为机体感染A型流感病毒的唯一标准。阴性结果并不能完全排除感染A型流感病毒的可能性。结果阴性但有临床症状存在，建议使用其他临床方法进行测试。第4页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三实验室生物安全

根据国家卫生和计划生育委员会印发的《人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南》的要求：医务人员接触患者的血液、体液、分泌物、排泄物、呕吐物及污染物品时应戴清洁手套，脱手套后洗手。第5页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三甲型流感病毒抗原检测盒第6页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三甲型流感病毒抗原检测第7页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第8页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三样本采集及送检注意事项采集拭子应使用检验科提供的专用微生物拭子（切勿使用普通棉签）。标本采集及检测应严格按照相关防护要求进行防护，避免感染。本试验使用鼻咽拭子标本进行检测。采集样本用品共两种，分别是：鼻咽拭子和样品保存液，临床需要时到检验科领取。第9页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三鼻咽拭子样本检测结果与核酸检测结果比较，灵敏度达到91.3%，特异性达到99.65%。咽拭子样本检测结果与核酸检测结果比较，灵敏度达到71.13%，特异性达到100%。样本采集不当可能导致阴性结果。对于进行了抗病毒药物治疗的患者，其体内病毒含量大为下降，会造成阴性结果。建议在使用抗病毒药物前检测。第10页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三甲型流感病毒抗原检测鼻腔分泌物采集：收集鼻腔分泌物时，将拭子插入鼻腔中分泌物最多处，轻轻转动并向鼻腔内部推动拭子，直至鼻甲（离鼻孔2.0cm-2.5cm）受阻处，贴鼻腔壁转动拭子三次，取出拭子。第11页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三甲型流感病毒抗原检测咽喉分泌物采集：将拭子从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心，适度用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，应避免触及舌部，取出拭子。第12页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三样品处理采集完毕的微生物拭子插入检验科提供的专用样品保存液中，紧靠管子内壁旋转多次使样品尽可能溶解在溶液中，最后把拭子头留于瓶中，旋紧盖子（避免液体漏出）后送检。见下图：第13页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第14页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三处理后的样品应及时送检，也可暂存与2-8℃（不超过12小时），中午、夜间采集的标本送到急诊化验室2-8℃密封保存，正常上班后检测。检测方法如下图：第15页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三1.将样品充分混匀后，取样200ul，加入样品处理瓶中第16页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第17页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第18页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三滴加14滴裂解液（约400ul）到样品处理瓶中。充分混匀。第19页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第20页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第21页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第22页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第23页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第24页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三滴加5滴（约200ul）酶标试剂到反应膜上第25页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三等待酶标试剂完全渗入后，再等待2-3分钟，让其完全反应第26页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三每次滴加12滴洗涤液洗涤2次第27页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三加2滴显色液显色，待显色液完全渗入，再等待2-3分钟第28页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三加1滴终止液，3分钟内判断结果。终止5分钟后的结果无临床意义第29页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第30页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第31页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三第32页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三由于阳性样品的强度不同，检测点的显色可能出现颜色深浅的现象。在规定的观察时间内，不论颜色深浅，即使非常弱的显色也应判定为阳性结果。第33页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三渗滤装置从包装中取出后请在20分钟内使用。样品处理瓶盖必须拧紧防止样品漏出，滴加时应使瓶中液体全部滴到加样孔中。滴加试剂时瓶口应垂直对准加样孔，保证液滴体积的准确性。第34页，讲稿共36页，2023年5月2日，星期三

标本的保存用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测。24小时内能检测的标本，置于4℃保存；不能于24小时内检测的标本，置于-70℃或以下保存。（如无－70℃保存条件，则于－