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第二章工业微生物菌种选育1.微生物分离2.自然选育3诱变育种4杂交育种菌种选育5.原生质体技术6分子育种第一节微生物分离11菌种分离的一般过程土样的采取→预处理→培养→菌落的选择产品的鉴定目的:高效地获取一株高产目的产物的微生物问题:如何使样品中所含微生物的可能性大如何在后续的操作中使这种可能性实现12采样时要注意的问题口气候、水分、空气口来源要广口结合产品的特点口标签:地点、时间、气候等13目的微生物富集的一些基本方法富集的目的:让目的徼生物在种群中占优势,使筛选变得可能。富集的三种方案口定向培养:采用特定的有利于目的微生物富集的条件,进行培养。口当不可能采用定向培养时,则可设计在一个分类学中考虑。口不能提供任何有助于筛选产生菌的信息,这时只能通过随机分离的办法。定向培养的方法物理方法:加热、膜过滤等但主要是通过培养的方法定向培养的富集方法1、底物2、pH条件3、培养时间4、培养温度等一切能提高目的微生物相对生长速度的手段,培养(固体、液体;分批连续)后使目的微生物在种群中占优势14菌落的选出口从产物角度出发在培养时以产物的形成有目的的设计培养基利用简单、快速的鉴定方法,如抗生素口从形态的角度菌落的外观形态,是微生物的一个重要表征。如多糖产生菌在适当的培养基上生长,从具有粘液性的菌落外观上就可以初步识别例:醛肟水解酶的筛选NZ-PAOxDehydratasec≡NH20zPhenylacetaldooxdme(Z-PAOxPhenylacetonitrile培养基中含0.05%ofZ-PAOx每隔2-3天移去一半培养物,补充新鲜培养基不断分析样品,2-3个月后z-PAOX降低后,稀释分离单菌落15目的微生物富集方法的研究进展口目前土壤中能够培养的微生物不到总数的1%。微生物的多样性及资源的开发仍然是今后若干年的研究重点口分子生物学的实验手段,在微生物鉴别及特定目标产物的筛选方面发挥了着越来越重要的作用。如:16SRNA同源性分析,基因序列分析及DNA/DNA杂交技术等aIncontrasttothistraditionalapproach,dernnolecularbiologytechniquesallowfordNAlibraryexpressionscreening,whichalsoenablesaccesstoenzymesofnonculturableorganisms.Bythisstrategy,forinstancethecompanyDiversa(SanDiego,CA,USA)identised120uniqueesterases/lipasesfromonly16%ofthetotaldnaobtainedfromanalkalinesoilsampl第二节自然选育2.1定义利用微生物在一定条件下产生自发突变的原理,通过分离,筛选排除衰退型菌株,从中选择维持原有水平的菌株,又称自然分离。22自然选育流程图生产菌种斜面

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