紫皮石斛与铁皮石斛新鲜药材及枫斗的鉴别研究

紫皮石斛与铁皮石斛新鲜药材及枫斗的鉴别研究

石斛是一种重要的传统滋阴中药。它具有生津、养胃、除恶热、润肺、益肾、明目的作用。枫斗为石斛的一种特殊药材规格,是由兰科石斛属植物的茎经扭曲加工而成,外观呈弹簧状或螺旋状。中国药典2010年版将铁皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo列为铁皮石斛,将金钗石斛DendrobiumnobileLindl.、鼓槌石斛DendrobiumchrysotorumLindl.或流苏石斛DendrobiumimbriatumHook.的栽培品及其同属植物近似种列入石斛。由于过度采挖,野生铁皮石斛资源已经非常稀少,铁皮枫斗价格较高,因此市场上有数十种石斛属植物加工而成的枫斗被充作铁皮石斛出售,且枫斗外观十分相近,鉴别上有一定难度。近年来,云南、广西等地大量人工栽植紫皮石斛(齿瓣石斛DendrobiumdevoninumPaxt.)获得成功,尤其是云南龙陵紫皮石斛的种植面积和产量不断增加。但多年来,紫皮石斛却多被充作铁皮枫斗在市场上销售流通,这不仅扰乱了铁皮石斛的市场,也为紫皮石斛自身市场的开拓带来了不利影响,因此有必要建立1种简单有效的鉴定方法,准确迅速地区分铁皮和紫皮石斛的新鲜药材及枫斗制品。笔者通过采集云南龙陵不同产地的人工栽培紫皮石斛及紫皮枫斗制品,建立了显微鉴别和薄层鉴别方法,比较了其与铁皮石斛的显微结构与薄层色谱特征的差异,为紫皮石斛和铁皮石斛的新鲜药材及枫斗制品的鉴别提供了依据。材料和方法1.电子数码显微测试WFH-201B紫外投射反射仪(上海精科实业有限公司);ME21数码显微镜(广州市明美光电技术有限公司);KD-1508R-VI植物冷冻切片机(北京佳源兴科技有限公司)。2.材料和试剂铁皮石斛(0#),于2011年1月采于浙江天台铁皮石斛GAP基地,经北京林业大学生物科学与技术学院程瑾博士鉴定为DendrobiumofficinaleKimuraetMigo;1#-6#紫皮石斛样品均于2011年1月采自云南龙陵,具体编号见表1,经程瑾博士鉴定,为DendrobiumdevoninumPaxt.不同栽培种。以上新鲜药材请当地药农根据市场规格进行加工制成枫斗。FAA(福尔马林-乙酸-乙醇混合液)、甲醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、丁酮、乙酰丙酮、三氯化铝等均为分析纯,购自北京化工厂。3.方法3.1间苯三酚试液制备用刀片将新鲜茎切成长约1cm的小段,置于FAA固定液中浸泡固定24h。然后,用包埋剂包埋,迅速冷冻,用冷冻切片机切片。在常温下将所得切片置于干净的载玻片上,滴加几滴间苯三酚试液和盐酸进行染色。最后,用吸水纸吸去周围染色液,滴加几滴甘油,封片,显微镜观察。3.2间苯三酚试液制备将铁皮枫斗或紫皮枫斗置于水蒸气饱和的干燥器中,软化至螺旋散开变直。然后,用刀片将其切成长约1cm的小段,置于FAA固定液中浸泡固定24h。取出小段,用包埋剂包埋后迅速冷冻,用冷冻切片机切片。在常温下将所得切片置于干净的载玻片上,滴加几滴间苯三酚试液和盐酸进行染色。最后,用吸水纸吸去周围染色液,滴加几滴甘油,封片,显微镜观察。3.3供试品溶液与对照药材取紫皮石斛干燥后粉末1g,加甲醇50mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水15mL使溶解,用石油醚(60-90℃)洗涤2次,每次20mL,弃去石油醚液,水层用乙酸乙酯洗涤2次,每次20mL,弃去洗液,水层再用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇提取液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。另取铁皮石斛对照药材1g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2-5μL,分别条带状点于同一聚酰胺薄膜上,以水-乙醇-丁酮-乙酰丙酮(75:15:15:5)为展开剂,展开,取出,烘干,喷以三氯化铝试液,105℃烘干,约3min,置紫外光灯(365nm)下检视。结果1.通过对新鲜紫皮石斛的显微镜观察2.观测结果。紫色皮和铁皮枫斗3.色度法的识别结果显微和薄层鉴别方法由于石斛野生资源紧缺,一般野外能采集到的石斛均做药用,这不但使野生资源遭到毁灭性破坏,而且造成石斛药材的基源十分复杂,混乱现象严重。目前市场上流通的商品石斛中,药典收载种类较少,主流品种大多为非药典收载种,有30余种石斛属及部分石仙桃属和石豆兰属植物在市场上流通做石斛用。对于这些石斛新鲜药材,有经验者尚可根据其性状加以鉴别,但是加工成枫斗后,由于其外观性状极为相似,区分难度较大,因此有必要建立起有效的鉴别手段。近年来一些新技术逐步应用于石斛的鉴别,如滕建北等建立了金钗石斛和黑毛石斛的紫外光谱鉴别法,李兆奎等建立了铁皮石斛与其它易淆品的红外光谱鉴别方法,应依等建立了球花石斛的位点特异性PCR鉴别方法。这些方法为石斛属植物的鉴别提供了新的研究思路和方向,但由于这些鉴别方法所需测试条件要求较高,因此目前石斛的鉴别依然以薄层色谱和显微鉴别方法为主,如李付惠等建立了密花石斛的显微鉴别方法,范成杰等建立了迭鞘石斛的显微鉴别和薄层鉴别的方法,这些方法操作简单,对于区分常用的易淆品较为有效。鉴于目前紫皮石斛在加工过程中主要存在被充作铁皮石斛制作枫斗的现象,本文建立了紫皮石斛和铁皮石斛新鲜药材及其枫斗的显微和薄层鉴别方法,该方法操作简单,鉴别特征明显,可以迅速有效地区分紫皮石斛和铁皮石斛的新鲜药材及其枫斗制品。同时,薄层色谱特征显示,云南龙陵地区不同产地的紫皮石斛栽培品种其化学组成差异较大,提示这些栽培品基源不一,因此有必要进一步加强种质鉴定和规范化栽培等相关研究。赵俊凌等对铁皮石斛和其他几种“枫斗类”石斛进行了多糖测定,为药用石斛的评价和开发利用提供了依据和参考。不同产地的紫皮石斛横切面显示出相似的显微结构特征,即横切面表皮细胞1列,扁平,外壁及侧壁稍增厚、微木化,外被黄色角质层。基本薄壁组织细胞多角形,有时可见淀粉粒。近表皮处薄壁组织细胞较小,常有草酸钙针晶和硅质块。内侧薄壁组织细胞较大,其间散在多数维管束,呈紫色,常排成4-5圈。维管束外韧型,外围有厚壁的纤维束,韧皮部呈新月形,木质部导管大小不一,微木化,如图1。铁皮石斛横切面大致结构与紫皮石斛相似,但是其维管束呈淡黄色,与紫皮石斛区别明显。不同产地的紫皮石斛枫斗横切面显示出相似的显微结构特征,即表皮细胞1列,扁平,外壁及侧壁稍增厚、微木化,外被黄色或紫色角质层。基本薄壁组织细胞多角形,其间散在多数维管束,排成4-5圈,呈紫色。维管束外韧型,外围有厚壁的纤维束,韧皮部呈新月形,木质部导管6-8个,木化。外侧小型薄壁细胞中常含有硅质块,见图2。铁皮枫斗横切面表皮细胞外被黄色角质层,不