分析方法研究与验证思路

分析方法研究思路残留溶剂分析方法研究有关物质分析方法研究分析方法验证残留溶剂研究总原则：合成过程中使用到的有机溶剂，需建立分析方法，并予以测定。质量标准拟定原则：除第一类溶剂外，未检出的有机溶剂可以不拟定，仅拟定最后一步重结晶溶剂首选气相分析方法，部分可以使用液相等手段残留溶剂检测方法直接进样：产品的分解不干扰溶剂的检测，不容易污染进样器顶空进样：流行的做法。残留溶剂检测方法内标法：预先配制好内标溶液，采用该溶液配制对照品溶液和供试品溶液；内标物：选择与待测溶剂沸点相近的烷烃类化合物；外标法：流行的做法；残留溶剂检测方法对照品浓度：限度浓度溶剂选择：溶解产品和待测物质，例如：DMF,DMSO,H2O等检测器：FID可应用于大部分的溶剂检测；部分使用ECD.对于具有紫外吸收的溶剂，如吡啶，甲苯等可用HPLC方法。气相条件的建立进样器温度：大于沸点，小于分解温度柱温：必须低于进样器和检测器温度30-70；可以使用恒温或程序升温；检测器温度流速色谱柱：相似相溶原理有关物质分析方法药典方法国家标准参考文献建立方法有关物质分析方法1、杂质对照品进行定量测定不受杂质紫外吸收的影响但需要获得杂质标准品有关物质分析方法2、归一化法方法简单，但是做线性时需要从定量限做到供试品浓度的150%，相关系数不低于0.99；且需要满足自身对照法的条件。

有关物质分析方法3.杂质对照品定位，主成分自身稀释很难获得纯度较高，满足定量检测的杂质对照品时采用。但仍能提供纯度不高，可供定位的杂质对照品要求杂质与主成分的相对响应因子应在0.9-1.1范围之内有关物质分析方法4、加校正因子的自身对照法很难获得纯度较高，满足定量检测的杂质对照品时采用。但仍能提供纯度不高，可供定位的杂质对照品杂质与主成分的相对响应因子超出0.9-1.1范围各实验参数的建立过程波长：取主成分、合成中间体和降解产物对照品，配成一定浓度后进行紫外扫描。通过DAD/PDA检测器扫描各物质的紫外吸收图，确定各物质吸收相近的波长测定如采用主成分最大吸收波长，需进行各杂质校正因子的测定。各实验参数的建立过程供试品溶液浓度的确定首先确定LOD,向上推至少10000倍，即为供试品溶液浓度各实验参数的建立过程最小峰面积的设定一般设置为主峰峰面积的0.01%-0.05%测定方法中的浓度关系浓度进样量绝对量相对于供试品溶液有浓度倍数关系有关物质供试品溶液浓度0.1mg/ml10ul1ug100%10000倍含量测定浓度10ug/ml10ul100ng10%1000倍自身对照溶液浓度1.0ug/ml10ul10ng1%100倍最低检出限10ng/ml10ul0.1ng0.01%基准点流动相的选择和优化试验样品取主成分和各杂质对照品，配成主成分浓度100%，各杂质浓度为1%的溶液进行测定，验证色谱系统的适用性。同时需要将强制破坏试验供试品分析。流动相的选择和优化中性成分一般选择甲醇-水、乙腈-水两种系统。乙腈-水系统由于粘度小，通常可以得到良好的柱效。被测物为极性较大的中性成分时，系统中甲醇或乙腈的比例可适当小些。被测物为极性较小的中性成分时，可适当增大甲醇或乙腈的比例。流动相的选择和优化碱性成分向流动相中加入胺类扫尾剂。常用三乙胺、二乙胺、乙二胺等。加入反离子，常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠及十二烷基磺酸钠。高碳数离子对试剂使保留时间过长，可更换低碳数的离子对试剂。流动相的pH一般为3~5。流动相的选择和优化酸性成分向流动相中加入少量弱酸，常用甲酸、醋酸。适用于分离3≤pKa≤7的弱酸。加入反离子，常用的离子对试剂为四丁基季胺盐及四丁基磷酸盐等。流动相的pH一般为7~7.5。流动相的选择和优化流动相的要求被测物之间分离良好，分离度达到1.5以上。主成分保留时间以10分钟左右为宜。分析时间通常为主成分保留时间的2~3倍。分析时间过长的可考虑采用剃度洗脱。薄层色谱法测定有关物质正向色谱系统对照品溶液斑点建立梯度对照，如设定杂质斑点1.0%的自身稀释主斑点，需增加0.5%，0.2%，0.1%三个斑点。如0.1%的斑点不显示出，则增大点样量分析方法验证准确度对于有定量要求的杂质要通过回收率试验验证方法的准确度。例如某杂质的限度为0.2%，可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％的杂质溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%。分析方法验证线性适用与有定量要求的杂质检查。在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度