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文档简介
ICS07.080
A20/39
中华人民共和国国家标准
GB/TXXXXX—XXXX
生物产品降解有机磷农药功效评价
技术规范
Technicalspecificationsforefficacyevaluationofdegradationof
organophosphorouspesticidebybiologicalproducts
(征求意见稿)
201X-XX-XX发布201X-XX-XX实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准1化管理委员会
发布
2
生物产品降解拟有机磷农药功效评价技术规范
1范围
本标准规定了生物产品降解有机磷类农药的功效评价原理、试剂与材料、仪器设备与器
具、分析步骤和结果分析。
本标准适用于微生物和酶生物产品降解有机磷农药效果评价。
2规范性引用文件
本标准内容引用了下列文件和其中的条款,凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本
适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB23200.91有机磷农药的气相色谱测定方法
GB/T6682分析实验室用水
GB/T15818培养基配置方法
NY/T761-2008降解产物有机磷农药的提取方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文本。
3.1
生物产品biologicproducts
利用生物技术获得的产品。
3.2
有机磷农药organophosphoruspesticides
含磷元素的有机化合物农药。
3.3
降解效果degradationeffect
生物产品降解拟除虫菊酯类农药的能力。
4原理
用生物产品对有机磷农药进行处理,采用液液萃取法萃取反应体系中的有机磷农药,经
3
萃取、浓缩、净化、定容后,通过配有火焰光度检测器的气相色谱仪检测,外标法定量,计
算生物制品对有机磷农药的降解效率。
5仪器和设备
5.1气相色谱仪:配有火焰光度检测器(FPD磷滤光片)。
5.2旋转蒸发仪:转速20-280rpm。
5.3微量进样器:0.5-500ul。
5.4恒温振荡器:0-300r/min;温控范围,室温-100℃。
5.5分光光度计:波长330nm-800nm。
5.6pH计:精度0.1。
5.7高速冷冻离心机:转速可达10000rpm以上。
5.8分析天平:精度0.0001g。
6试剂和材料
所有试剂除另有说明外,均为分析纯,水为符合GB/T6682中规定的一级水。
6.1有机磷农药
有机磷农药纯度≥99%。
6.2基础液体培养基
按照GB/T15818中方法配制
6.30.01mol/L磷酸盐缓冲液,pH8.0
分别配制0.2mol/L的Na2HPO4和0.2mol/L的NaH2PO4,量取Na2HPO461mL,NaH2PO439
mL,用3mol/L的稀盐酸和1mol/L的氢氧化钠调节溶液pH备用。
7分析步骤
7.1试验设计
不同类型生物产品降解有机磷类农药效果试验设计应符合表1要求。
表1生物产品降解有机磷类农药效果试验设计
4
产品种类
项目
微生物产品酶产品
1.供测样品
处理设计2.失活样品
3.空白对照
按结构选择5种类型:一硫代磷酸酯,甲基对
有机磷农药选择硫磷;二硫代磷酸酯,甲拌磷;磷酸酯,敌敌畏;
膦酸酯,敌百虫;磷酰胺或硫代磷酰胺,甲胺磷
首先将有机磷农药标准物质用丙酮配制成储
农药处理备溶液,4℃保存备用,试验时稀释成一定浓度的
工作液,现用现配。
重复次数不少于3次
降解反应条件按正交试验结果确定
7.2供试微生物产品试验实施
7.2.1培养基制备
选择基础培养基,或根据微生物特殊生长需要对培养基进行改良。
7.2.2供试样品处理
块状固体产品应进行研磨处理。
7.2.3失活样品处理
取供试的固体或液体微生物样品进行121ºC,30min杀菌处理。
7.2.4最佳反应体系确定
设计正交试验,影响因素宜选取微生物添加量、反应温度、反应转速、反应时间、底物
浓度等,确定最佳反应体系条件。
7.2.5降解试验
取250mL三角瓶9个,空白样3个,供试样品瓶3个,失活样品瓶3个。按照最佳反
应体系确定的底物浓度,制备底物溶液,灭菌后备用。然后根据微生物添加量,制备成反应
体系为100mL的培养液,在最佳反应体系条件下进行降解反应。
7.3供测酶试验实施
7.3.1供试样品处理
5
固体酶产品应进行研磨处理,称取一定质量的供测固体酶粉,采用不同pH的磷酸盐缓冲
液按要求稀释为不同浓度(g/mL)备用;若供测样品为液体,用不同pH的磷酸盐缓冲液按要
求稀释为不同浓度(mL/mL)备用。
7.3.2失活样品处理
取供试的固体或液体酶样品在100ºC环境下进行30min的去酶活处理。
7.3.3最佳反应条件确定
设计正交实验,影响因素宜选择酶浓度、底物浓度、反应温度、反应时间、pH值等,
确定最佳反应体系条件。
7.3.4降解试验
取25mL离心管9个,空白样3个,供试样品瓶3个,失活样品瓶3个。按照最佳反
应体系确定的微生物添加量、底物浓度,制备成反应体系为10mL的反应液,在最佳反应
体系条件下进行降解反应。
7.4浓度测定
反应液按照NY/T761要求进行处理,然后按照GB23200.91要求进行测定。
8结果分析
8.1结果计算
将将诶率按照式(1)计算::
..............................(1)
(��−𝑋)−��−𝑋−(��−𝑋)
�=��×100%
式中:
R——降解率(%);
Xi——底物原始浓度(mg/L);
Xa——为供试样品降解反应终点底物浓度(mg/L);
Xb——为失活样品降解反应终点底物浓度(mg/L);
Xc——为空白样品降解反应终点底物浓度(mg/L)。
以平行样的平均值为最终的降解率值,计算结果保留到小数点后两位。
8.2结果判定
以降解率的大小评价被测试生物产品的降解功效:降解率大于等于80%,小于100%时,
降解效果为好;降解率大于等于60%,小于80%时,降解效果为良好;降解率大于等于40%,
小于60%时,降解效果为较好;降解率大于等于20%,小于40%时,降解
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