实验一-显微镜的使用及细菌的简单染色法

2011级微生物实验课程要求上课要求：在上课时间必须穿好白大褂，不迟到，不吃东西,桌面无杂物。实验结束后，每人将自己做实验的操作台整理干净。分组要求：根据学号分组，位置固定，不得私自调离。值日要求：根据学号分组。显微镜领取：实验1-5次，实验课开始前每人到二楼208室借一台显微镜。本课程课件放在公共邮箱里，请同学们自行下载

。

公共邮箱：shianshiyan2011@163.com

密码：2011shianshiyan6.实验报告由学习委员收齐后送到食品学院B2317.考试成绩按以下公式计算：

平时（30％）＋作业（30％）＋操作考试（40％）实验报告的撰写要求实验报告必须以实事求是、严肃认真的科学态度，按照指导书的要求按时完成。实验报告应该简明扼要、叙述准确、数据完整、绘图清晰且写实，应有讨论、有分析，结论明确。一般应包括以下一些内容：1．实验项目名称；2．实验目的；3．实验原理；4.实验材料；

5．实验步骤；6．实验结果与讨论。7.思考题

实验一

显微镜油镜的使用及

细菌的简单染色法

背景着色而细菌本身不着色用无毒性的染料实验内容实验目的实验原理实验材料实验方法和步骤实验结果记录思考题一、实验目的：1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术；2.学习微生物制片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法及无菌操作技术；3.观察细菌的基本形态。二、实验原理：1、显微镜油镜工作原理：油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时，因介质折光率不同，光线将发生散射现象，使射入镜筒的光线很少，物象不清。若在油镜与玻璃片之间加入与玻璃折射率相近的香柏油，则使通过的光线不至因折射而减弱，因此能清楚地看到物象。2、染色原理由于细菌细胞机体小而透明，与周围背景没有明显的反差,在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。碱性染料的离子带正电荷，能和负电荷物质结合。因细菌细胞等电点较低，当它在中性、碱性或偏酸性培养基中时带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，所以通常采用碱性染料使其着色（如美兰，结晶紫，碱性复红或孔雀绿）。

三、实验材料1、菌种：

大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌2、染色液和试剂：

草酸铵结晶紫、二甲苯、香柏油。3、器材：载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显微镜。四、实验方法与步骤：简单染色法:是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的染色法，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。1、涂片：

在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2

整个过程中要注意无菌操作。（示范无菌操作技术）

2、干燥：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方温火烘干，切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。

3、固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。4、染色：将固定过的涂片加适量草酸铵结晶紫染色1-2min。5、水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。6、干燥：涂片放在空气中晾干或用吸水纸轻轻吸干，。7、镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。8、绘图：9、实验完毕后的处理：

将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：

a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。各部分还原，将电源灯亮度调至最低后关闭，将最低放大倍数的物镜转到工作位置，同时将载物台降到最低位置

看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。五、实验结果记录菌名染色液名称菌体颜色高倍镜下菌体形态油镜下菌体形态六、思考题1、油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应注意些什么？

2、固定细胞的目的是什么？七、注意事项1、在粗调时，先从侧面注视小心调节物镜靠近标本，然后用目镜观察，慢慢调节物