2024年大学试题(医学)-分子诊断学笔试参考题库含答案

“人人文库”水印下载源文件后可一键去除，请放心下载！（图片大小可任意调节）2024年大学试题(医学)-分子诊断学笔试参考题库含答案“人人文库”水印下载源文件后可一键去除，请放心下载！第1卷一.参考题库(共75题)1.Klenow酶在（）情况下，呈现DNA聚合酶活性，在（）情况下呈现外切酶活性。2.简述黏性末端DNA重组体的构建过程。3.（）可用于中期及间期细胞，检测微缺失和微重复。A、着丝粒探针B、染色体涂抹探针C、基因座特异探针D、端粒重复序列探针4.下列有关重组DNA技术的叙述，正确的是（）A、重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B、所有的限制酶都只能识别一种特定的核苷酸序列C、选细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快D、只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达5.下列哪些属于染色体以外的遗传因子（）A、转座子B、病毒核酸C、细菌的质粒D、高等植物的叶绿体E、转位因子F、插入序列G、真核生物的线粒体6.具mRNA模板活性的病毒基因组是（）A、正链DNA病毒B、负链DNA病毒C、负链RNA病毒D、逆转录科的正链RNA病毒E、正链RNA病毒（逆转录科的正链RNA病毒除外）7.目前在蛋白质组学的研究中主要采用了哪些技术？8.囊性纤维化（CF）是由囊性纤维化穿膜传导调节因子（CFTR）基因突变所致，CFTR最常见的突变为（）A、错义突变B、移码突变C、密码子突变（ΔF508）D、无义突变E、剪切位点突变9.线粒体DNA与核DNA有哪些不同之处？10.下列不属于获取目的基因的方法是（）A、“鸟枪法”B、转录法C、反转录法D、根据已知氨基酸序列合成法11.有关R质粒叙述正确的是（）A、R质粒带有抗性转移因子B、R质粒又称耐药性质粒C、R质粒带有抗性决定因子D、R质粒能决定细菌的性别E、R质粒具有自我转移能力F、R质粒能进行自我复制12.酚抽提法可用于高分子量DNA的分离纯化，所用试剂分别有不同的功能，下列正确的是（）A、SDS为阳离子去污剂，主要引起细胞膜的降解并能乳化脂质和蛋白质B、EDTA为二价金属离子螯合剂，可促进DNase的活性C、蛋白酶K只可消化K类蛋白质D、酚可使蛋白质变性沉淀E、无RNase的DNase可有效地水解RNA13.临床基因扩增检验实验室应如何设置。14.如何保证临床基因扩增检验实验室的质量。15.基因工程疫苗研究开发应遵循的原则是什么？16.脆性X智力低下1号基因FMR-1）基因5端重复序列异常扩增，其全突变重复范围（n）是（）A、6～45B、45～55C、55～200D、0～6E、>20017.功能基因组学的主要特征。（）A、高精度B、高通量C、大规模D、计算机分析E、高分辩率18.简述原核生物的类核组成。19.真核生物基因是（）A、基因重叠现象B、类核结构C、断裂基因D、质粒E、可移动基因成分20.UNG防污染预防下列哪种污染（）A、产物B、靶核酸C、气溶胶D、标本间E、病原微生物21.PCR反应过程分为三个步骤，即（），（）和（）。22.苯丙酮尿症常用的分子诊断检测方法：（）A、PCR-STRB、PCR-SSCPC、PCR-DGGED、PCR-RFLPE、多重ASPCR23.线粒体DNA（mtDNA）与核DNA主要不同之处有（）A、非孟德尔的母系遗传B、低突变率C、异质性和复制分离D、阈值效应24.有关DNA序列自动化测定的不正确叙述是（）A、用荧光代替了同位素标记B、激光扫描分析代替人工读序C、基本原理与手工测序相同D、不需要引物E、需要与手工序列分析相同的模板25.试述载体构建一般方法。26.（）可用于中期及间期细胞，检测染色体的非整倍性。A、着丝粒探针B、染色体涂抹探针C、基因座特异探针D、端粒重复序列探针27.分离与纯化mRNA可采用下列哪种方法（）A、oligo（dT）-纤维素柱层析法B、oligo（dA）-纤维素液相结合离心法C、oligo（U）-滤纸法D、oligo（dC）-纤维素柱层析法E、oligo（dG）-纤维素液相结合离心法28.原核生物基因组的特征包括（）A、具有类核结构B、只有一个DNA复制起点C、有大量的基因重叠现象D、存在可移动基因成分E、基因组中有重复序列存在F、结构基因多数是多拷贝的G、广泛存在操纵子结构29.亨廷顿病IT15基因CAG常用的分子诊断方法（）A、限制性内切酶MstⅡ切割法B、长距离PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影E、Southern印迹杂交法30.遗传疾病分子诊断的策略（）A、直接诊断策略B、SSCPC、基因多态性连锁分析D、RFLPE、基因突变的定量（dosage）诊断31.识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（）。A、同工酶B、同尾酶C、同裂酶D、同位酶32.简述原位杂交在临床中的应用。33.细菌基因转移的方式有（）A、接合B、转化C、转染D、转导E、转座34.简述PFGE的基本原理。35.HBV基因组是（）A、完全双链DNA分子B、不完全双链DNA分子C、完全双链RNA分子D、不完全双链RNA分子E、单链DNA分子36.有关化学法的叙述，不正确的是（）A、所用化学试剂有一定危害性B、所需的DNA模板纯度要求较高C、测序前对待测DNA末端进行放射性标记D、便于自动化E、测序反应分为4组或5组相互独立的化学反应37.核酸原位杂交是（）A、核酸分子杂交技术与组织细胞化学和免疫组织化学结合起来的一种杂交方法B、基本原理及探针的标记方法与传统核酸分子杂交技术相同C、不能确定与探针互补的核酸序列在细胞内的空间位置D、不需要将核酸从细胞中提取出来38.下列哪项与短串联重复序列（STR）位点的不稳定性相关（）A、脆性X综合症、重症肌无力和Huntington 舞蹈症B、脆性X综合症、重症肌无力和Kearns-sayre综合症C、Kearns-sayre综合症、慢性进行性眼外肌瘫痪和Huntington 舞蹈症D、Kearns-sayre综合症、慢性进行性眼外肌瘫痪和Kearns-sayre综合症39.黏粒（cosmid）是质粒－噬菌体杂合载体，它的复制子来自（）、cos位点序列来自（），最大的克隆片段达到45kb。40.只含蛋白质而不含核酸的的病毒称（）A、类病毒（Viroids）B、卫星（Satellites）C、类病毒（viroid）D、朊病毒（Prions）E、拟病毒（virusoid）41.下面哪些方法属于基因芯片原位合成技术（）A、原位光刻合成B、合成点样C、压电打印D、分子印章42.简述基因的特点和鉴别标准。43.能对未知序列进行扩增的PCR是（）A、多重PCRB、巢式PCRC、原位PCRD、反向PCRE、不对称PCR44.有关煮沸裂解法提取质粒DNA的正确叙述是（）A、该法是一种条件比较温和的物理方法B、煮沸能完全灭活核酸内酶AC、不适用于大多数Ecoli菌株D、适用于HB101菌株E、适用于45.通过凝胶电泳法可对RNA分子完整性进行鉴定，提示无RNA的降解时应（）A、28S RNA的荧光强度约为18S的2倍B、18S RNA的荧光强度约为28S的2倍C、5S RNA的荧光强度约为18S的2倍D、5S RNA的荧光强度约为28S的2倍E、28S RNA的荧光强度约为5S的2倍46.从高温嗜热细菌中发现高温DNApolymerase后，使得PCR技术得以广泛应用，在高温下有活性的DNApolymerase有（）、（）、（）、（）。其中具有3’-5’外切活性的高温DNApolymerase有（）和（）。47.试述5′RACE技术原理和方法。48.作为基因的运输工具-运载体，必须具备的条件之一及理由是（）A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C、具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选49.HIV基因组编码的附加基因和调节基因（）A、vifB、vprC、nefD、tatE、rev50.分段基因组（segmentedgenome）是指病毒基因组（）A、由数条不同的核酸分子组成B、由数条相同的核酸分子组成C、由数条互补的核酸分子组成D、由可分成不同功能区段的一个核酸分子组成E、以上都不对51.变形聚丙烯酰胺凝胶电泳能分离的单链寡核苷酸片段，一般为（）A、100～200个核苷酸B、200～300个核苷酸C、300～500个核苷酸D、500～700个核苷酸E、任意长度均可52.影响PCR反应的因素有哪些？53.人的二倍体细胞DNA大约由多少碱基对（）组成。A、1.0×109bpB、2.0×109bpC、3.0×109bpD、4.0×109bpE、5.0×109bp54.基因治疗是把健康的外源基因导入（）A、有基因缺陷的DNA分子中B、有基因缺陷的染色体中C、有基因缺陷的细胞器中D、有基因缺陷的细胞中55.Western印迹56.能够引起遗传性视神经病的线粒体病遗传学分类类型是（）A、点突变B、mt DNA的大规模缺失C、mt DNA的大规模插入D、源于核DNA缺陷引起mtDNA缺失57.国际病毒分类委员会（ICTV）将病毒分成哪几类？58.（）影响核酸分子杂交的因素。A、DNA的浓度B、DNA的大小和复杂性C、温度D、离子强度59.T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是（）。A、2’-OH和5’-PB、2’-OH和3’-PC、3’-OH和5’-PD、5’-OH和3’-P60.肌营养不良症分子诊断的常用方法（）A、限制性内切酶MstⅡ切割法B、长距离PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影E、Southern印迹杂交法61.DNA在细胞核内通常与下列哪种物质结合（）A、蛋白质B、糖类C、脂类D、无机盐E、水62.PCR检测技术有何临床应用。63.α珠蛋白基因由α类基因或假基因组成，以下那一个不是假基因（）A、ψζB、ψα1C、ψα2D、ζE、以上均不是64.HIV-1（）A、引起AIDSB、主要攻击辅助性T淋巴细胞C、导致免疫系统紊乱和免疫缺陷D、属逆转录病毒E、使被感染的细胞丧失功能但不会死亡65.SARS-CoV的分子诊断主要是（）A、根据基因组序列设计特异性引物作PCRB、根据基因组序列设计特异性引物作RT-PCRC、根据病毒膜蛋白作ELISAD、根据病毒核衣壳蛋白作ELISAE、根据病毒滴度66.一个典型的基因不包括（）A、增强子B、5′非编码区C、3′非编码区D、启始密码子E、终止密码子67.可以自我转移的质粒，其分子量一般在（）A、1.5×107以上B、1.5×107以下C、1.5×107与2.5×107之间D、2.5×107以下E、2.5×107以上68.细菌的移动基因存在着三种类型的转位因子包括（）、（）、（）。69.真核生物染色体DNA主要以下列哪种形式存在（）A、环状单链分子B、线性单链分子C、环状双链分子D、线性双链分子E、线性或环状双链分子70.原位杂交的基本原理。71.原核细胞和真核细胞转录的mRNA均具有与rRNA结合的SD序列，以利于进行有效的转录。72.下列哪项不符合转位因子的含义（）A、转位因子是DNA重组的一种形式B、可在质粒与染色体之间移动的DNA片段C、转座子是转位因子的一个类型D、可移动的基因成分E、能在一个DNA分子内部或两个DNA分子之间移动的DNA片段73.蛋白质截短测试法与其它分子检测方法最大的不同在于（）A、只检测单位点突变B、只检测已知突变C、只检测与疾病相关的突变D、可检测未知突变E、可检测多位点突变74.外标定量方法最大的缺点是（）A、不能测定原始模板的绝对量B、测定的重复性和精密性有问题C、标准品制备困难D、不能排除样本间的测定差异E、测定必须在扩增的指数期进行75.大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？第2卷一.参考题库(共75题)1.固相杂交不包括（）。A、Northern印迹杂交B、原位杂交C、吸附杂交D、Southern印迹杂交2.病毒基因组存在（）A、基因重叠现象B、类核结构C、断裂基因D、质粒E、可移动基因成分3.真核表达调控的顺式作用元件有哪些？其作用特点是什么？4.下列哪种不是基因扩增检验技术（）A、PCRB、LCRC、NASBAD、bDNAE、SDA5.在LacZ标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显（）色，为（）性克隆，未插入基因的克隆显（）色，为（）性克隆。6.原核生物具有（）A、基因重叠现象B、类核结构C、断裂基因D、质粒E、可移动基因成分7.Sanger双脱氧链终止法采用DNA引物引导新生DNA的合成，采用的模板是（）A、单链DNAB、双链DNAC、单链RNAD、双链RNAE、蛋白质8.变性高效液相色谱法9.基因组最大的生物（）A、人B、某些藻类C、某些细菌D、某些显花植物和两栖类动物E、某些哺乳动物10.PCR扩增阻碍突变系统检测突变的原理是基于（）A、由于突变，限制性内切酶识别位点变化，不能被切开B、由于突变，电泳迁移率发生变化C、连接酶不能连接与靶序列错配的两个DNA片段D、Taq酶不能延伸3’末端与靶序列错配的引物E、以上都不是11.质粒的结构特点有（）A、以环状双链DNA分子存在B、质粒DNA有超螺旋结构C、以环状单链DNA分子存在D、质粒DNA有半开环结构E、以环状双链RNA分子存在F、质粒DNA有线性结构G、以线性双链DNA分子存在12.Southern印迹13.下列哪种不是对核酸分子完整性进行鉴定的方法（）A、凝胶电泳法B、Northern杂交C、ELISAD、Western blottingE、生物芯片技术14.应用重组DNA技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是指（）A、用于检测疾病的医疗器械B、用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C、合成β-球蛋白的DNAD、合成苯丙羟化酶的DNA片段15.A260/A28016.核酸操作的基本技术有哪些？17.组蛋白家族中核小体组蛋白组蛋白包括（）A、H1、H2A、H2B、H3B、H1、H2A、H2B、H3AC、H2A、H2B、H3、H4D、H2A、H2B、H3A、H418.后基因组计划的主要目标（）A、基因功能比较B、基因功能鉴定C、基因组测序D、基因数据分析E、基因结构19.基因序列中保守性最高的序列（）A、内含子B、外显子C、整个基因D、5′非编码区E、3′非编码区20.简述假基因的分类及其发生机理。21.下列哪一种酶作用时需要引物？（）A、限制酶B、末端转移酶C、反转录酶D、DNA连接酶22.简述哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有哪几种？23.耐热连接酶的使用，可增加寡核苷酸连接实验的（）A、灵敏度B、重现性C、特异性D、假阳性E、假阴性24.限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（）。A、修复自身的遗传缺陷B、促进自身的基因重组C、强化自身的核酸代谢D、提高自身的防御能力25.黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）。A、产生新切点B、易于回收外源片段C、载体不易环化D、影响外源基因的表达26.简述从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的主要方法有哪几种？27.通过转座可引起哪些遗传效应？28.质谱分析技术主要是用来检测蛋白质的（）。A、分子量B、分子组成C、分子构像D、分子大小29.液相分子杂交包括（）A、吸附杂交B、发光液相杂交C、液相夹心杂交D、复性速率液相分子杂交30.人工染色体载体必须具有的元件是（）。A、染色体端粒B、着丝粒C、自主复制序列D、以上三项全部31.试证明Ct值与模板DNA的起始拷贝数成反比。32.操纵子结构不存在（）A、细菌基因组中B、病毒基因组中C、真核生物基因组中D、大肠杆菌基因组中E、原核生物基因组中33.蛋白质之间相互作用的形式主要包括（）。A、分子和亚基的聚合B、分子识别C、分子自我装配D、多酶复合体E、分子杂交34.下列哪些技术属于分子影像技术（）A、UltrasoundB、SPECTC、MRID、CTE、PET35.COS位点，COS质粒，COS细胞它们均含有用于自身环化的12个碱基的互补粘性末端。36.下列有关连接反应的叙述，错误的是（）。A、连接反应的最佳温度为37℃B、连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10%C、连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mMD、接酶通常应过量2-5倍37.CsCl2-EB法中在过量EB存在的下，超速离心后密度最大沉于管底的是（）A、蛋白质B、带切口的环状或线性DNAC、RNAD、复合糖类E、闭环质粒DNA38.用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。A、Southem印迹杂交B、Northem印迹杂交C、Western印迹D、原位菌落杂交39.目前使用较为广泛的质粒DNA小量提取的方法是（）A、牙签少量制备法B、小量一步提取法C、SDS裂解法D、碱裂解法E、煮沸裂解法40.临床基因扩增中，弱阳性室内质控样本发生失控，其原因可能是（）A、核酸提取中的丢失B、标本中扩增抑制物残留C、扩增仪孔间温度不均一D、Taq酶和/或逆转录酶失后E、扩增产物污染41.试述质粒的类型有哪些？42.逆转录病毒编码的基本结构基因（）A、gag（编码核心蛋白）B、pol（编码逆转录酶等）C、rex（编码rex调节蛋白）D、tax（编码tax调节蛋白）E、env基因（编码包膜蛋白）43.用于核酸分子杂交的探针不能是放射性标记的（）。A、DNAB、RNAC、抗体D、寡核苷酸44.有哪几种反义核苷酸基因失活疗法？简述其原理。45.简述长病毒末端重复序列的特点和作用。46.病毒基因组末端重复序列结构有（）A、粘性末端B、末端插入序列C、末端反向重复序列D、末端正向重复序列E、长末端重复序列47.下列哪种不是从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法（）A、DEAE纤维素膜插片电泳法B、电泳洗脱法C、冷冻挤压法D、低熔点琼脂糖挖块回收法E、漂洗法48.简述变性高效液相色谱法检测基因变异的优点。49.简述重组DNA技术的原理及技术。50.（）影响DNA变性的因素。A、DNA的浓度B、DNA的大小和复杂性C、温度D、离子强度51.脉冲场凝胶电泳与传统凝胶电泳的不同点有（）A、采用的凝胶基质不同B、采用的电场类型不同C、采用的电泳仪装置不同D、分辨的DNA片段大小不同E、样品的制备不同52.紫外分光光度法可对核酸纯度进行鉴定，下列说法是正确的（）A、纯DNA的A270/A280比值为2.0B、纯DNA的A260/A280比值为1.8C、纯DNA的A260/A280比值为2.0D、纯DNA的A270/A280比值为1.8E、纯DNA的A230/A270比值为1.853.pBR322质粒作为基因克隆载体不具有下列何种调控元件（）。A、Ampr和TetrB、ori复制子C、LacZ标记D、多克隆位点54.某一重组DNA的载体部分有两个BamHI酶切位点。用BamHI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的BamHI酶切位点共有（）。A、4个B、3个C、1个D、2个55.下列说法正确的是（）A、质粒的主要成分是RNAB、质粒的复制依赖于宿主细胞C、宿主细胞离开了质粒就不能生存D、质粒的存在对宿主细胞没有任何影响E、不同类群的质粒不能共存于同一菌株56.镰状细胞贫血分子诊断（）A、限制性内切酶MstⅡ切割法B、长距离PCR法（LD-PCR）C、多重PCRD、扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影E、Southern印迹杂交法57.λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（）。A、小于λ噬菌体DNA的50%B、小于噬菌体DNA的75%C、大于λ噬菌体DNA的105%D、为λ噬菌体DNA的75%～105%58.蛋白酶K可有效地降解内源蛋白，能快速水解细胞裂解物中的DNA酶和RNA酶，以利于完整DNA和RNA的分离。59.真核细胞基因表达的特点为（）。A、单顺反子B、多顺反子C、转录和转译连续进行D、.转录和转译在同一时空进行60.人类单核苷酸的多态性（SNP）的特点及主要用途有哪几个方面？61.以下哪项描述是错误的（）A、细菌是单细胞生物B、细菌是原核生物C、细菌生长快个体小D、细菌以有丝分裂的方式增殖E、细菌无细胞核结构62.基因工程诞生的理论基础是什么？63.Northern印迹技术是（）A、检测RNA的核酸杂交技术B、是以发明者的名字命名的C、属于固相杂交的范畴D、与Southern印迹杂交的方法类似，只是变性剂不同64.适合从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段的标准方法是（）A、DEAE纤维素膜插片电泳法B、非透析袋电泳洗脱法C、透析袋电泳洗脱法D、压碎与浸泡法E、冷冻挤压法65.镰状血红蛋白（HbS）66.由一个细胞或者组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质，称为（）。67.脆性X智力低下1号基因（FMR-1）基因5端（）重复序列异常扩增。A、CGGB、CAGC、CGAD、CGCE、CAA68.PND和PGD的适应症（）A、有可能孕育出严重遗传性疾病和先天性畸形胎儿的孕妇B、夫妇一方有某种遗传病或曾生出过某种遗传病患儿，或孕妇有X伴性隐性遗传病家族史C、夫妇任何一方为染色体异常、染色体平衡移位和倒位携带者D、早孕阶段曾服用过致畸药物或曾有病毒感染史等致畸情况E、羊水过多或过少F、原因不明的多次流产、死胎、死产的孕妇G、胎儿发育迟缓H、未触到正常的胎儿I、年龄超过35岁的孕妇等等69.描述质粒DNA的结构特点。70.要探知细胞内某一蛋白质的表达水平，可以通过（）实现。A、Southern blotB、Northern blotC、Western blotD、原位分子杂交71.关于逆转录病毒叙述不正确的是（）A、迄今发现的RNA肿瘤病毒均属RNA逆转录病毒B、嗜肝DNA病毒科属DNA逆转录病毒C、逆转录病毒RNA为正链D、病毒颗粒均携带逆转录酶E、前病毒DNA可以整合到宿主细胞染色体DNA中72.用柱层析法纯化质粒DNA时DNA的何种残基与硅基质结合（）A、嘌呤B、磷酸盐残基C、嘧啶D、糖基E、氢离子73.试述举2种质粒DNA提取的方法及应用。74.电泳时EB加在琼脂糖凝胶中一般会降低DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率。75.关于cDNA的不正确的提法是（）。A、同mRNA互补的单链RNAB、同mRNA互补的含有内含子的DNAC、以mRNA为模板合成的双链RNAD、以上都不正确第1卷参考答案一.参考题库1.参考答案：有dNTP；没有dNTP2.参考答案：目的基因和载体可由同一种限制酶切割后产生，或由不同的限制酶切割形成互补黏性末端，经退火，彼此间很容易按碱基配对原则形成氢键。然后由DNA连接酶催化连接接头处的缺口，形成重组质粒。载体DNA在限制酶切割后，用碱性磷酸酶处理，除去5’端磷酸基，以避免载体DNA自身环化。3.参考答案：C4.参考答案：B5.参考答案：A,C,D,E,F,G6.参考答案：E7.参考答案： ①蛋白质的分离技术：二维凝胶电泳。 ②蛋白质的鉴定技术主要包括：质谱技术、Edman降解分析技术、蛋白质分子结构分析技术 。 ③蛋白质与核酸间相互作用的研究技术：凝胶滞后实验、DNase Ⅰ 足纹分析、核酸一蛋白质杂交实验。 ④蛋白质与蛋白质间相互作用的研究技术：酵母双杂交技术。8.参考答案：C9.参考答案： 非孟德尔的母系遗传：mtDNA 因位于细胞质中，表现为严格的母性遗传，不服从孟德尔遗传，绝大部分mtDNA 是通过卵细胞遗传。 高突变率：mt DNA突变率约为nDNA的10～100倍，此外mtDNA 与有毒物质的结合频率比核DNA 高数倍至数十倍。 异质性和复制分离：异质性即突变mtDNA与野生型mtDNA 以不同的比例共存于一个细胞内的现象。复制分离即在细胞分裂的复制过程中，突变的和野生型的mtDNA 随机进入子细胞的过程，复制分离的结果使突变mtDNA 杂合体向突变纯合或野生纯合方向转变，但因突变复制具有优势，故易产生突变积累，突变积累的程度不同，突变mtDNA 在群体中的多态性程度也不同。 阈值效应：每个细胞的mt DNA有多种拷贝，而一个细胞mt DNA编码基因的表现型依赖于一个细胞内突变型mt DNA和野生型mt DNA的相对比例，mtDNA 突变导致氧化磷酸化水平降低，当能量降低到维持组织正常功能所需能量的最低值时即达到了mtDNA表达的能量阈值，可引起某组织或器官的功能异常而出现临床症状，这就是阈值效应。 半自主复制与协同作用：mt DNA虽有自我复制、转录和编码功能，但该过程还需要数十种nDNA编码的酶参加，因此mt DNA基因的表达同时也受nDNA的制约，两者具有协同作用。10.参考答案：B11.参考答案：A,B,C,E,F12.参考答案：C13.参考答案：由于基因扩增检验是对靶核酸的指数倍扩增过程，因而有大量的扩增产物的出现，这种扩增产物极易对以后的新扩增反应产生“污染”，为防止这种污染的发生，就需要对基因扩增检验实验室进行严格的分区。临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域，即试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区以及扩增产物分析区。如果采用全自动扩增仪，后两个区域可以合并。应注意的是，各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。进入各工作区域必须严格按单一方向进行，即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。各区的仪器设备包括工作服、鞋子、实验记录本和笔等都必须专用，不得混淆。此外，上述四个工作区域内还应有固定于房顶的紫外灯，以便于工作后区域内的空气照射。14.参考答案：临床基因扩增检验实验室的常规测定由一系列步骤组成，包括样本收集、样本处理（核酸提取）、核酸扩增、产物检测结果报告及解释等。室内质量控制仅涉及样本处理、核酸扩增和产物分析等测定分析步骤，而室间质量评价则除了监测测定分析步骤外，还包括较大范围的实验室活动，诸如样本接收中的可靠性、结果报告及解释等。QA则是覆盖更广范围的活动，包括样本收集、结果报告和解释等。15.参考答案： （1）不能或难于培养的的病原体如乙型肝炎病毒（HBV），丙型肝炎病毒（HCV），戊型肝炎病毒（HEV），EB病毒（Epstein-Barr病毒，EBV），巨细胞病毒（CMV），人乳头瘤病毒（HPV），麻风杆菌，疾原虫、血吸虫等。 （2）有潜在致癌性或免疫病理作用的病原体，前者如1型嗜人T淋巴细胞病毒（HTLV-I），人免疫缺损病毒（HIV），单纯疱疹病毒（HSV），还有EBV、CMV、HPV等。后者如呼吸道合胞病毒（RSV），登革热病毒（DGV），肾综合征出血热病毒（HFRSV）。 （3）常规疫苗免疫效果差，如霍乱和痢疾菌苗；或者反应大，如百日咳和伤寒菌苗。 （4）能大大节约成本，简化免疫程序的多价疫苗，如以痘苗病毒，腺病毒，卡介苗或沙门氏菌为载体的多价活疫菌。16.参考答案：E17.参考答案：B,C,D18.参考答案：原核生物与真核生物的主要区别在细胞核上。原核生物没有典型的细胞核结构，基因组DNA位于细胞中央的核区，没有核膜将其与细胞质隔开，但能在蛋白质的协助下，以一定的组织形式盘曲、折叠包装起来，形成类核（nucleoid）也称拟核。类核的中央部分由RNA和支架蛋白（scaffoldingprotein）组成，外围是双链闭环的超螺旋DNA。在超螺旋结构的基础上，DNA分子再扭结成许多活结样或花瓣样的放射状结构的DNA环。每个环形的活结状结构代表一个结构域，在各结构域中DNA呈负超螺旋状态。每个DNA环是一个相对独立的功能区，可以独立完成不同区域的基因表达与调控。在类核中80﹪为DNA，其余为RNA和蛋白质。如果用DNA酶处理后可使基因组DNA链断裂；如果用RNA酶或蛋白酶处理类核，则类核变得松散，不能维持DNA链的折叠结构，这表明RNA和蛋白质对维持类核分子的折叠以及形成环状结构是必不可少的。19.参考答案：C20.参考答案：A21.参考答案：变性；退火；延伸22.参考答案：A,B,C,D,E23.参考答案：B24.参考答案：D25.参考答案： A.目的基因分析（1）ORF 分析（2）酶切位点分析。 B.载体选择与分析（1）多克隆位点分析（2）抗性标记分析（3）启动子与其他筛选标记分析。 C.连接体系与连接时间确定。26.参考答案：A27.参考答案：A28.参考答案：A,B,D,E,G29.参考答案：D30.参考答案：A,C,E31.参考答案：B32.参考答案：原位杂交技术可以通过标记的探针与分裂中期染色体DNA杂交来精确定位特定核苷酸序列在染色体上的位置；与细胞RNA杂交可观察组织细胞中特定基因的表达水平；还可用特异性的细菌或病毒的核酸序列作为探针与组织、细胞杂交，以确定有无病原体的感染等。原位杂交能在成分复杂的组织中对单一细胞进行研究，不受同一组织中其它成分的影响，因此对于那些细胞数量少且散在于其它组织中的细胞内DNA或RNA的研究更为方便。此外，原位杂交不需要从组织中提取核酸，有利于检测组织中含量极低的靶序列，并可完整地保持组织和细胞的形态，更能准确地反应出组织细胞的相互关系及功能状态。举例：原位杂交检测上皮细胞中人乳头状瘤病毒（HPV）DNA。33.参考答案：A,B,D,E34.参考答案：PFGE采用一种正交的交变脉冲电场，在进行琼脂糖凝胶电泳时，其方向、脉冲时间和电压大小可交替改变。在每次电场方向改变时，DNA分子就要有一定的时间改变形状和迁移方向，只有当DNA分子达到一定构型，沿新的泳动方面伸直后，才能向前迁移。DNA分子的转向时间与其大小关系极为密切，分子越大，分子构型转换所需时间就越长，转变迁移方向的时间也就越长。对于不同大小的DNA大分子，其改变泳动方向所需的时间不等，迁移速度的快慢也就不等，因此就可以按DNA分子量大小使其分离开来。根据欲分离的DNA分子大小适当调节电场方向的相交角度、电压及脉冲时间等参数，即可将各种分子量大小不同的分子分开。35.参考答案：B36.参考答案：D37.参考答案：A,B,D38.参考答案：A39.参考答案：质粒；噬菌体40.参考答案：D41.参考答案：A,C,D42.参考答案：对于数量很少的编码tRNA、rRNA和某些小分子RNA的基因，我们较易通过核酸序列加以判断。而对于数量极大的蛋白质编码基因，目前可根据其特点使用五项标准来鉴别：①开放阅读框（openreadingframe，ORF）；②序列特征和密码子偏爱；③序列保守性；④转录产物；⑤基因失活。但这些标准使用起来却往往会遇到一些困难。43.参考答案：D44.参考答案：E45.参考答案：A46.参考答案：TaqDNA聚合酶；TthDNA聚合酶；VentDNA聚合酶；PwoDNA聚合酶；DNA聚合酶；PwoDNA聚合酶；PfuDNA聚合酶47.参考答案：PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3′或5′末端之间区域的部分cDNA称为快速扩增cDNA末端技术（RACE）。如果已知mRNA的一片段链内短序列，据此或设计基因特异引物，用原先存在的poly（A）尾（3′末端）或附加的同聚尾（5′末端）互补的序列做末端引物，就可以获得从未知末端直到已知区域的部分cDNA序列。为获得5′末端部分cDNA克隆需用基因特异引物，产物第一链产物，可用末端脱氧核苷酸转移酶及dATP加poly（A）尾。通过QT引物和反转录使用的上游基因特异引物生成第二链cDNA。48.参考答案：A49.参考答案：A,B,C,D,E50.参考答案：A51.参考答案：C52.参考答案：PCR反应体系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需离子的反应缓冲液，这些因素都对PCR反应产生影响。53.参考答案：C54.参考答案：A55.参考答案：Western印迹又称免疫印迹（immunoblotting），是一种通过标记的抗体检测经SDS分离的特定蛋白质的技术。56.参考答案：A57.参考答案： 国际病毒分类委员会（ICTV）制定了《国际病毒分类与命名原则》。根据病毒的基因组组成及复制方式，可将病毒分为如下几类：DNA病毒（DNA Viruses） 第一组：双链DNA病毒（Group I：dsDNA Viruses） 第二组：单链DNA病毒（Group II：ssDNA Viruses） RNA病毒（RNA viruses） 第三组：双链RNA病毒（Group III：dsRNA Viruses） 第四组：正链RNA病毒（Group IV：（+）ssRNA Viruses） 第五组：负链RNA病毒（Group V：（-）ssRNA Viruses）DNA与RNA逆转录病毒（DNA and RNA Reverse Transcribing Viruses） 第六组：RNA逆转录病毒（Group VI：RNA Reverse Transcribing Viruses） 第七组：DNA逆转录病毒（Group VII：DNA Reverse Transcribing Viruses）亚病毒因子（Subviral Agents）卫星（Satellites）类病毒（Viroids）朊病毒（Prions）58.参考答案：A,B,C,D59.参考答案：C60.参考答案：C61.参考答案：A62.参考答案：（1）PCR在病原微生物的检测中的应用；（2）PCR在遗传病中的应用；（3）PCR在肿瘤中的应用；（4）其它方面的应用：PCR技术除用于临床诊断和治疗外，还可用于DNA指纹、个体识别、亲子关系识别、法医物证等。63.参考答案：D64.参考答案：A,B,C,D65.参考答案：B66.参考答案：A67.参考答案：E68.参考答案：插入序列；转位子；噬菌体Mu和D10869.参考答案：C70.参考答案：样本经适当处理后，使细胞通透性增加，让探针进入细胞内与组织、细胞中待检测的核酸进行特异性结合形成杂交体，然后通过组织化学或免疫组织化学方法在被检测的核酸原位形成的杂交信号，在显微镜或电子显微镜下对待测核酸进行细胞内定位的方法。71.参考答案：错误72.参考答案：A73.参考答案：C74.参考答案：B75.参考答案： 优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。 缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。第2卷参考答案一.参考题库1.参考答案：C2.参考答案：A3.参考答案： 顺式作用元件为一些能与DBP结合的特定序列的DNA片段，决定转录起始位点和RNA聚合酶的转录效应，按功能可分为启动子、增强子、沉默子、衰减子和终止子等DNA序列片段。 启动子：真核基因启动子是基因表达时与基因转录起始有关的5’端DNA序列，包括在-30bp区富含有AT的典型TATA盒（框）（TATA box）和在-70～-80bp区域（在TATA box上游）启动元件。前者是引导RNA聚合酶Ⅱ在正确起始位点转录mRNA所必需的DNA序列，即保证转录的精确起始。后者UPE是调节转录起始频率和提高转录效率的调控序列，后者的序列常为GGTCAAT和GGGCCC序列，称为GC box，它们经协同作用，以调控基因的转录效率。 增强子：增强子是使启动子的基因转录效率显著提高（增强转录活性）的一类顺式作用元件，其本身不具有启动子活性，是由多个独立的，具有特征性的核苷酸序列所组成。其基本的核心组件常由812bp组成，以单拷贝或多拷贝串联的形式存在。增强子一般有以下特性：⑴增强子能提高同一条DNA链上基因转录的速率；⑵增强子对同源或异源基因都有效 ⑶增强子的位置可在基因5’上游、3’下游或内部；⑷无方向性，增强子从5’→3’或是从3’→5’均可对启动子发挥作用；⑸增强子可远离转录起始点；⑹增强子一般无基因特异性，对各种基因启动子均有作用，但具有组织或细胞特异性。 典型的增强子首先发现于SV40的病毒中，为SV40的早期基因增强子，约200bp，含2个72bp的重复序列，位于早期启动子上游，增强子可促使病毒基因转录效率提高100倍，因此具有这一增强子的载体已得到了广泛的应用。些年来，来自于Rous肉瘤病毒基因长末端重复序列和人类巨细胞病毒（CMV）增强子也已被广泛用于真核细胞的基因表达。增强子能增强启动子的转录能力，有效的增强子能促进转录达10倍或100倍以上，在某些情况下，表达产物可能具有细胞毒效应。因此，最好使用一种可被外界刺激信号诱导表达外源基因的诱导型启动子，诱导型启动子有热休克启动子、金属硫蛋白启动子、糖皮质激和固醇类激素诱导的启动子，热休克启动子的诱导可通过提高细胞的培养温度使启动子转录水平提高，重金属离子可有效地促进金属硫蛋白启动子的转录活性。 R.NA剪接信号：多数高等的真核基因都含有内含子序列，在细胞核内转录产生的前体mRNA要经过剪接过程去掉内含子顺序后才成为成熟的mRNA分子。虽然许多基因的cDNA转入哺乳类动物细胞后，其表达不受有或无内含子的影响，但有些基因在真核细胞中表达需要有内含子的存在。一般来说，在哺乳动物细胞的表达载体中最好有一段内含子序列的剪接信号，以提供外源基因cDNA表达的需要。常用的内含子剪接序列有SV40的小t抗原的内含子序列等。 负调控元件：沉默子和衰减子是抑制基因转录的DNA序列，称为负调控元件，它们与反式作用因子相互结合而起作用。这些负调控元件不受距离和方向的限制，并可对异源基因表达起作用。 终止子和polyA信号：核基因转录的确切终止信号和终止机制，目前尚不清楚，终止过程不是在RNA聚合酶指导下完成的，在不明机制下发生转录终止。现在已发现模板DNA分子的3’端有转录终止信号序列，称终止子。通常由转录产生的具有polyA尾的基因终止信号是在多聚腺苷酸化位点下游的一段长度为数百个碱基的DNA区域内的G/T簇，例如在SV40中的AGGTTTTTT的DNA序列为终止转录调控元件。一般转录终止子为发夹结构的反向重复序列。现在基因工程表达载体上所使用的转录终止子都是病毒基因或细胞基因的3’端的一段序列，其中也包括3’端不翻译区。如SV40小t抗原和β-球蛋白的转录终止片段常用于构建真核基因表达载体。 在双启动子的表达载体中，启动子的转录方向为同向时，上游启动的转录由于会穿过下游启动子，这样就使得下游的转录受到极大的影响，造成下游转录水平的下降，但是如果在两个启动子间插入一个转录终止子后，上游启动子对下游启动子的影响就被消除了，这样下游启动子的表达量会有明显提高。当两个启动转录方向相反时，基因表达可能会被转录形成的反义RNA所抑制，这时插入转录终止子将会消除这种抑制作用。4.参考答案：D5.参考答案：白；阳；蓝；阴6.参考答案：B7.参考答案：A,B8.参考答案： DHPLC的填料由一个具有惰性物化性质的固定相和PS-DVB微孔球共价连接而成，采用具有疏水性的又带正电荷的TEAA作为“桥分子”，使DNA片段能够被吸附在固定相上。DHPLC的流动相为有机溶剂乙氰，双链DNA分子被吸附在固定相上，通过改变流动相中乙氰的浓度，不同片段长度的DNA分子被逐步洗脱，从而实现DNA片段的分离。洗脱下来的DNA片段一般通过紫外检测，波长254nm，而不需要进行费时的凝胶电泳分析。 当柱温柱温>50℃时，根据双链分子的序列进行分离，这时可用于杂合双链分子与纯合双链分子的分离。当柱温>70℃时，依据单链DNA分子的碱基组成和片段长短进行分离。9.参考答案：D10.参考答案：D11.参考答案：C,D,E,F12.参考答案：将待检测的DNA样品固定在固相载体上（硝酸纤维素膜或尼龙膜），与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的位置上显示出杂交信号。通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。13.参考答案：D14.参考答案：B15.参考答案：指核酸溶液在260nm和280nm紫外波长下的吸光度的比值，根据比值来判断核酸样品有无蛋白质和酚等的污染。16.参考答案：①核酸提取与纯化②核酸的检测与保存③核酸的凝胶电泳④核酸分子杂交。17.参考答案：C18.参考答案：B19.参考答案：B20.参考答案： 与正常功能的基因序列相似，但无转录功能或转录产物无功能的基因称假基因（pseudogene）。根据是否保留相应功能基因的间隔序列（如内含子），假基因分两大类：一类保留了间隔序列，称为非加工假基因（non-processedpseudogene），通常因基因的复制修饰，如点突变、插入、缺失和移码突变而导致复制后的基因在转录和翻译时出现异常，丧失正常功能，它与功能基因一般在同一染色体上，也称复制型假基因（duplicatedpseudogene）。假基因中大多数则缺少间隔序列的称为已加工假基因（processedpseudogene），主要是转录过程中mRNA以cDNA的方式重新整合进入基因组（很可能发生在生殖细胞中），在长期进化选择过程中因为随机突变积累而丧失功能，通常这种假基因无内含子，两边有小的侧翼定向重复序列（flankingdirectrepeat），3’端多具多聚腺苷酸尾。21.参考答案：C22.参考答案： 哺乳动物细胞基因组DNA抽提的主要方法有：酚提取法、甲酰胺解聚法、玻棒缠绕法和异丙醇沉淀法、磁珠吸附法等。23.参考答案：A,C24.参考答案：D25.参考答案：C26.参考答案：从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法主要包括DEAE-纤维素膜插片电泳法、电泳洗脱法、低熔点琼脂糖凝胶挖块回收法、冷冻挤压法及现在有试剂盒供应的以硅为基础的纯化系统等。27.参考答案： ⑴.引起突变 转位可能引起多种基因突变。当转位因子插入一个基因内部，会引起这个基因的插入失活；当插入多顺反子前端的基因中时，可引起下游的所有基因停止转录，因为转位因子中含ρ依赖的转录终止信号；当插入染色体或质粒中时，常引起缺失和倒位突变。 ⑵.引入新的基因 在插入位点上引入新的基因，如含有抗药基因R质粒的转位因子，转位到染色体中时，可在该部位出现抗药性基因。若将带有Amp+R质粒的细菌与不含R质粒的带有Kan+转座子的细菌进行接合，结果产生了Amp+ Kan+的细菌，并且能够在含有氨苄青霉素及卡那霉素的培养板上生长。经过转位作用，在这种细菌内产生Amp+及Kan+的质粒，经过再次接合作用，即可产生含Amp+ Kan+R质粒细菌。 ⑶.引起生物进化 基因重排经常发生，转座作用是基因重排的重要机理之一，如通过转座，可将两个本来相隔遥远的基因靠拢，从而进行协调的控制作用，这两段基因顺序经过转座作用连接在一起有可能在进化过程中产生新的蛋白质。28.参考答案：A29.参考答案：A,B,C,D30.参考答案：D31.参考答案： 一般来说，第n次PCR循环的荧光信号强度（Rn）等于背景信号强度（RB）加上每个分子的荧光强度（即单位荧光强度RS与分子数目的乘积），用数学式表示如下：Rn=RB+XO（1+Ex）nRs式中：Rn代表荧光信号强度；RB代表背景信号强度；Xo代表起始模板拷贝数；Ex代表扩增效率；Rs代表单位荧光强度；N代表循环次数。 对每一个特定的PCR反应来说，Ex、RT、RB、和Rs都是常数，所发Ct值与lgXo成反比，也就是说，Ct值与起始模板DNA的拷贝数（Xo）的对数成反比，起始DNA浓度每增一倍，Ct值减小一个循环。因此，Ct值的引入确保了实时荧光PCR定量的精确和严格。32.参考答案：C33.参考答案：A,B,C,D,E34.参考答案：B,C,E35.参考答案：错误36.参考答案：A37.参考答案：C38.参考答案：C39.参考