家畜的人工授精

关于家畜的人工授精第一节概述第2页,共132页，2024年2月25日，星期天概念人工授精是利用器械采集雄性动物的精液。经检查和处理后，再用器械将精液输入到发情雌性动物的生殖道内，以代替自然交配而繁殖后代的一种技术。

第四章人工授精第一节概述第3页,共132页，2024年2月25日，星期天一、人工授精的发展概况人工授精的发展经历下列三个阶段：1.试验阶段：1780年，意大利生理学家Spallanzani，第一次成功地用狗进行了人工授精试验。

2.实用阶段：上世纪40-60年代，人工授精的应用蓬勃发展成为繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，发展最快，技术水平较高。

3．冷冻精液阶段：50年代英国的Smith和Polge研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。

第四章人工授精第一节概述第4页,共132页，2024年2月25日，星期天二、人工授精的优越性1.提高了优良种公畜的配种效能和种用价值

2.加速家畜品种改良，促进育种工作

3.降低了饲养管理费用

4.防止各种疾病，特别是生殖道传染病的传播

5.有利于提高母畜的受胎率

6.可以进行精液的长期保存

7.这开展科学研究提供了有效手段

第四章人工授精第一节概述第5页,共132页，2024年2月25日，星期天三、人工授精的限制1、通过人工授精可能使不良的公畜影响范围更大2、必须投入一定资金，进行房舍建设和设备购置3、必须进行人员的技术培训，不良的操作会造成更严重的问题第四章人工授精第一节概述第6页,共132页，2024年2月25日，星期天采精的基本要求安全：对种公畜、对人员必须确保安全洁净：采集的精液不能受到任何生物和化学污染全部：能够采集到种公畜全部的精液第四章人工授精第二节采精目录第7页,共132页，2024年2月25日，星期天一、采精前的准备第四章人工授精第二节采精目录第8页,共132页，2024年2月25日，星期天（一）采精场地

采精要有一定的采精环境，以便雄性动物建立起巩固的条件反射，同时防止精液污染。采精场地应该宽敞、平坦、安静、清洁，场内设有采精架以保定台畜，或设立假台畜，供公畜爬跨进行采精，采精场应与人工授精操作室和公畜舍相连。室内采精场的面积一般为10×10平方米，并附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备。

第四章人工授精第二节采精目录第9页,共132页，2024年2月25日，星期天（二）台畜的准备

台畜有真假台畜之分真台畜是指使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜。真台畜应健康、体壮、大小适中、性情温顺。选发情的母畜比较理想，经过训练的公、母畜也可作台畜。假台畜即采精台，是模仿母畜体型高低大小，选用金属材料或木料做成的一个具有一定支撑力的支架。第四章人工授精第二节采精目录第10页,共132页，2024年2月25日，星期天（三）调教种公畜爬跨假台畜利用假台畜采精，要事先对种公畜进行调教，使其建立条件反射。调教的方法有如下几种：

1.在假台畜的后躯涂抹发情母畜的阴道粘液或尿液，公畜则会受到剌激而引起性兴奋并爬跨假台畜，经过几次采精后即可调教成功；

2.在假台畜旁边牵一发情母畜，诱使公畜进行爬跨，但不让交配而把其拉下，反复多次，待公畜性冲动达到高峰时，迅速牵走母畜，令其爬跨假台畜采精；

3.将待调教的公畜拴系在假台畜附近，让其目睹另一头已调教好的公畜爬跨假台畜，然后再诱其爬跨；

第四章人工授精第二节采精目录第11页,共132页，2024年2月25日，星期天公畜调教时应注意的事项

1.调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿施用强迫、恐吓、抽打

等不良剌激，以防止性抑制而给调教造成困难；

2.调教时应注意公畜外生殖器的清洁卫生；

3.最好选择在早上调教，早上精力充沛，性欲盛；

4.调教时间、地点要固定，每次调教时间不宜长；

第四章人工授精第二节采精目录第12页,共132页，2024年2月25日，星期天(三)器械准备

采精所需要的器械要事先准备好，力求清洁无菌，在使用之前要严格消毒，每次使用后必须洗刷干净。

第四章人工授精第二节采精目录第13页,共132页，2024年2月25日，星期天(四)种公畜的准备

种公畜采精前的准备，包括体表的清洁消毒和诱情（性准备）两个方面。这和精液的质量和数量都有密切的关系。采精前应擦拭公畜下腹部，用0.1%高锰酸钾溶液等洗净其包皮外并抹干，挤出包皮腔内积尿和其他残留物并抹干。在采精前，需以不同诱情方法使公畜有充分的性兴奋和性欲，一般采取让公畜在台畜附近停留片刻，进行几次假爬跨。

第四章人工授精第二节采精目录第14页,共132页，2024年2月25日，星期天二、采精技术

第四章人工授精第二节采精目录第15页,共132页，2024年2月25日，星期天采精方法第四章人工授精第二节采精目录雄性动物的采精方法很多，主要有假阴道法、手握法、电剌激法、按摩法、海绵法等。

假阴道法适用于各种家畜和部分小动物，手握法是当前公猪采精普遍应用的方法，按摩法主要用于禽类和犬类，电剌激法主要用于野生动物的采精。

第16页,共132页，2024年2月25日，星期天（一）假阴道法原理：它是模拟母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。1.假阴道的结构

假阴道是一筒状结构，主要由外壳、内胎、集精杯及附件组成。外壳为一圆筒，由轻质铁皮或硬塑料制成，内胎为弹性强、薄而柔软无毒的橡胶筒，装在外壳内，构成假阴道内壁；集精杯由暗色玻璃或塑料制成，装在假阴道的一端。此外，还有固定内胎的胶圈，保定集精杯用的三角保定带，充气用的活塞和双联球等一些附件。各种家畜的假阴道结构基本相同，但形状和大小不一。第四章人工授精第二节采精目录第17页,共132页，2024年2月25日，星期天第18页,共132页，2024年2月25日，星期天2.假阴道的准备

假阴道应具备五个条件：

1)适宜温度：采精时假阴道内腔温度应保持在38-40℃，集精杯也应保持34-35℃。

2)适当压力：借助注入水和空气来调节假阴道的压力。

3)适当润滑度：涂抹润滑剂的部位是假阴道前段1/3-1/2处到外口周围，但涂布不可过长过多。。

4)无菌：凡接触精液的部分均须经消毒。

5)无破损漏洞：假阴道不得漏水或漏气。第四章人工授精第二节采精目录第19页,共132页，2024年2月25日，星期天牛羊假阴道安装充气后理想的状态不太理想的状态（但可以用）第20页,共132页，2024年2月25日，星期天牛的假阴道法采精第21页,共132页，2024年2月25日，星期天(二)手握法适用于猪的采精。是目前广泛使用的采集的一种方法。操作时，采精员要戴上灭菌胶手套，蹲在假台畜左侧，待公猪爬跨台畜后，当阴茎从包皮内开始伸出时，立即紧握龟头，待其抽送片刻后，锁定公猪的龟头。待阴茎充分勃起时，顺势牵引向前，就能导致公猪射精。另一只手持带有一次过滤网的的集精杯收集精子浓厚部分的精液，其它稀薄精液及颗粒状胶冻分泌物排出时可随时弃掉。分段采精：弃掉含副性腺分泌物多、精子较少、精液清亮白色的第一段和精液较稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液浓、精子多、呈乳白色的第二段。

第四章人工授精第二节采精目录第22页,共132页，2024年2月25日，星期天猪的拳握法采精第23页,共132页，2024年2月25日，星期天(三)电剌激法本法是通过电流剌激公畜引起射精而采集精液的一种方法。适用于各种动物。电剌激采精器由电子控制器和电极探棒两部分组成。电剌激采精应将公畜以站立或侧卧姿势保定。保定后，剪去包皮及其周围的被毛，并用生理盐水冲洗拭干，然后将电极探棒经肛门缓慢插入直肠，达到靠近输精管壶腹部的直肠底壁，大家畜插入深度约20-25厘米，羊10厘米，犬10-15厘米，兔5厘米。然后调节控制器，选择好频率，开通电源。调节电压时，由低开始，按一定时间通电及间歇，逐步增高剌激强度和电压，直至公畜伸出阴茎，勃起射精，将精液收集于附有保温装置的集精瓶内。

第四章人工授精第二节采精目录第24页,共132页，2024年2月25日，星期天三、采精频率采精频率是指第周对雄性动物的采精次数。为了既能最大限度地采集精液，又能维持其健康体况和正常生殖机能，必须合理安排采精频率。牛：每周2天采精，当日采2次猪：隔日一次，最好3天一次羊：每周3天，当日采2次。

犬：隔日一次

第四章人工授精第二节采精目录第25页,共132页，2024年2月25日，星期天第三节精液品质检查第26页,共132页，2024年2月25日，星期天目录一、目的二、项目三、方法第四章人工授精第三节精液品质检查第27页,共132页，2024年2月25日，星期天一、检查的目的1.检查种公畜的配种能力2.公畜的繁殖问题3.确定精液可稀释的倍数4.检查精液的处理方法是否正确5.检查精液产品的质量返回目录第四章人工授精第三节精液品质检查第28页,共132页，2024年2月25日，星期天二、检查的项目（一）直观项目

（二）微观项目返回目录第四章人工授精第三节精液品质检查第29页,共132页，2024年2月25日，星期天(一)直观检查项目射精量色泽气味云雾状PH值美兰退色试验返回项目第四章人工授精第三节精液品质检查第30页,共132页，2024年2月25日，星期天(二)微观检查项目精子活力估测精子活力计数密度测定:计数板计数、比色计测定畸形率：形态畸形率、顶体畸形率返回目录第四章人工授精第三节精液品质检查第31页,共132页，2024年2月25日，星期天三、主要项目检查方法（一）直观项目检查（二）微观项目检查第四章人工授精第三节精液品质检查第32页,共132页，2024年2月25日，星期天（一）直观项目检查1.射精量2.色泽3.气味4.云雾状第四章人工授精第三节精液品质检查第33页,共132页，2024年2月25日，星期天(1)射精量的测定方法(2)公畜的正常射精量(3)采精量不正常的原因1.射精量返回（一）第四章人工授精第三节精液品质检查第34页,共132页，2024年2月25日，星期天(1)射精量的测定方法概念:射精量是指每次射精的体积测定:以连续3次以上正常采集到的精液的平均值代表测定方法:可用体积测量容器如刻度试管或量筒,也可用电子秤称重近似代表体积返回1.第四章人工授精第三节精液品质检查第35页,共132页，2024年2月25日，星期天(2)公畜的正常射精量影响射精量的因素:种类、睾丸大小质地、季节、健康状况不同畜种的正常射精量：畜种奶牛水牛马猪绵羊山羊射精量ml5-103-630-100200-3000.8-1.20.5-1.5柱形图第四章人工授精第三节精液品质检查第36页,共132页，2024年2月25日，星期天不同畜种的射精量比较原因第四章人工授精第三节精液品质检查第37页,共132页，2024年2月25日，星期天（3）射精量不正常的原因现象原因过少采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发育不良过多副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留、采精操作不熟练返回1.第四章人工授精第三节精液品质检查第38页,共132页，2024年2月25日，星期天2.色泽色泽：是指精液的颜色及其浓厚程度，它某种程度反应精液是否正常，精子的浓度高低正常的精液：猪：浅灰白至白色牛羊：乳白色或乳黄色

第四章人工授精第三节精液品质检查第39页,共132页，2024年2月25日，星期天不正常精液原因分析正常精液特征依从浓到稀：乳黄-乳白-白色-灰白淡红（鲜红）生殖道下段出血或龟头出血淡红（暗红）副性腺或生殖道出血绿副性腺或尿生殖道化脓褐混有尿液第四章人工授精第三节精液品质检查第40页,共132页，2024年2月25日，星期天3.气味正常的精液：应没有很浓的气味，或略带动物特有的腥膻味腥味：有脓液臊味：有尿液或包皮液第四章人工授精第三节精液品质检查第41页,共132页，2024年2月25日，星期天4.云雾状是指新鲜精液在33-35℃温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精子活力的高低。第四章人工授精第三节精液品质检查第42页,共132页，2024年2月25日，星期天云雾状分级标准+++翻明显而且较快++翻明显但较慢+仔细看才能看到精液的移动-无精液移动第四章人工授精第三节精液品质检查第43页,共132页，2024年2月25日，星期天（二）微观项目检查1.活力估测2.密度测定3.畸形率测定第四章人工授精第三节精液品质检查第44页,共132页，2024年2月25日，星期天1.活力的估测(1)概念:37℃下,精液中前进运动精子占总精子数的百分率(2)主要测定方法:估测法第四章人工授精第三节精液品质检查第45页,共132页，2024年2月25日，星期天活力测定时精液的稀释用品第四章人工授精第三节精液品质检查第46页,共132页，2024年2月25日，星期天例：牛精子活力检查的程序载玻片预温精液稀释取样检查镜检活力估测活力记录将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片

将生理盐水与精液等温后，按1:10稀释取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片用100倍和400倍观察判断视野中前进运动精子占的百分率按10级制评分和记录第四章人工授精第三节精液品质检查第47页,共132页，2024年2月25日，星期天2.精子的密度检查第四章人工授精第三节精液品质检查第48页,共132页，2024年2月25日，星期天(1)密度的概念及表示方法单位体积精液中所含的精子数表示方法:个/ml或亿/ml第四章人工授精第三节精液品质检查第49页,共132页，2024年2月25日，星期天(2)各种家畜精液的精子密度畜种牛羊猪马鸡密度亿/ml8-1220-302-31.5-330-50第四章人工授精第三节精液品质检查第50页,共132页，2024年2月25日，星期天(3)各种家畜精子密度比较第四章人工授精第三节精液品质检查第51页,共132页，2024年2月25日，星期天(4)精子密度的测定方法精子密度计数板(器)简介精液的稀释精液注入计数室精子计数精子密度计算第四章人工授精第三节精液品质检查第52页,共132页，2024年2月25日，星期天精子密度计数板(器)简介精子计数室长宽各1mm,面积1mm2高度0.1mm,体积0.1mm3由双线或三线组成25个(5X5)中方格每个中方格内有16个小方格(4X4)共计400个小方格第四章人工授精第三节精液品质检查第53页,共132页，2024年2月25日，星期天精子计数室及一个中方格返回第四章人工授精第三节精液品质检查第54页,共132页，2024年2月25日，星期天精液的稀释将精液注入计数室前必须对精液进行稀释,以便于计数稀释的比例根据动物精液的密度范围确定稀释方法:用5-25ul移液器和100-1000移液器,在小试管中进行组合不同的稀释.如牛精液稀释100倍,为5ul原精+500ul稀释液稀释液:3%氯化钠溶液,用以杀死精子,便于计数第四章人工授精第三节精液品质检查第55页,共132页，2024年2月25日，星期天注入计数室前

各种家畜精液建议稀释比例畜种牛羊猪马鸡稀释倍数10020040404003%氯化钠ul原精液ul500510005200-55200-5520005返回第四章人工授精第三节精液品质检查第56页,共132页，2024年2月25日，星期天精液注入计数室将洁净的计数板放在载物台上固定好,盖上干净的盖玻片取25ul稀释后的精液,将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处缓慢注入精液,使精液依靠毛细作用吸入计数室第四章人工授精第三节精液品质检查第57页,共132页，2024年2月25日，星期天注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！用吸管稀释后精液注入计数室共有两个对称的计数室第四章人工授精第三节精液品质检查第58页,共132页，2024年2月25日，星期天用移液器注入精液返回第四章人工授精第三节精液品质检查第59页,共132页，2024年2月25日，星期天精子计数将计数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方格。计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。第四章人工授精第三节精液品质检查第60页,共132页，2024年2月25日，星期天进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格也可以是从左角到右下角五个中方格第四章人工授精第三节精液品质检查第61页,共132页，2024年2月25日，星期天以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数返回第四章人工授精第三节精液品质检查第62页,共132页，2024年2月25日，星期天计算精子密度精子密度=5个中方格总精子数×5×10×1000×稀释倍数第四章人工授精第三节精液品质检查第63页,共132页，2024年2月25日，星期天例：牛精子密度测定程序放计数板于载物台上取样稀释精液精液注入计数室镜检精子计数密度计算计数板和盖玻片一定要清洁取500ul3%氯化钠于小试管中,加入5ul原精液,混合均匀取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中用100倍和400倍观察计数五个中方格的总精子数,计数以头部为准,在格线上的数上不数下,数左不数右精子密度=5个中方格总精子数5×10×1000×100结束第四章人工授精第三节精液品质检查第64页,共132页，2024年2月25日，星期天（四）畸形率检查第四章人工授精第三节精液品质检查第65页,共132页，2024年2月25日，星期天1、染色剂0.5克龙胆紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，过滤至试剂瓶中备用。美兰、纯兰或红墨水第四章人工授精第三节精液品质检查第66页,共132页，2024年2月25日，星期天2、稀释稀释液0.9%NaCl牛：1:10

羊:1:20猪:1:2第四章人工授精第三节精液品质检查第67页,共132页，2024年2月25日，星期天3、抹片左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取10ul稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。抹片后，使其自然风干。第四章人工授精第三节精液品质检查第68页,共132页，2024年2月25日，星期天4、固定在抹片上滴95%的酒精数滴，固定4分钟，甩去多余的酒精第四章人工授精第三节精液品质检查第69页,共132页，2024年2月25日，星期天5、染色将载玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龙胆紫或其它染色剂5-10滴，5分钟后，用洗瓶或自来水轻轻冲去染色剂，甩去水分凉干。第四章人工授精第三节精液品质检查第70页,共132页，2024年2月25日，星期天6、检查畸形率将载玻片放在400或640倍的显微镜下进行观察，共记录若干个视野100-200个左右的精子。第四章人工授精第三节精液品质检查第71页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第三节精液品质检查第72页,共132页，2024年2月25日，星期天7、畸形率种类头部膨大、头部小于正常、双头、头部不完整尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾有近端原生质小滴第四章人工授精第三节精液品质检查第73页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第三节精液品质检查第74页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第三节精液品质检查第75页,共132页，2024年2月25日，星期天畸形精子第四章人工授精第三节精液品质检查第76页,共132页，2024年2月25日，星期天视野中的畸形精子第四章人工授精第三节精液品质检查第77页,共132页，2024年2月25日，星期天双头和双尾精子第四章人工授精第三节精液品质检查第78页,共132页，2024年2月25日，星期天第四节精液的稀释第79页,共132页，2024年2月25日，星期天一、精液稀释的目的

精液稀释是向精淮中加入适宜于精子存活的稀释液。其目的有两个：1.扩大精液容量，从而增加输精头数，提高公畜利用率；2.延长精子的保存时间及受精能力，便于精液的运输，使精液得以充分利

用。

第四章人工授精第四节精液的稀释目录第80页,共132页，2024年2月25日，星期天二、精液稀释液的成分及作用

1．营养物质

2．保护性物质

1)缓冲剂

2)防冷抗冻物质

3)抗菌物质

4)稀释剂

5)其它添加剂

6)酶类

7)激素类

8)维生素类

第四章人工授精第四节精液的稀释目录第81页,共132页，2024年2月25日，星期天三、稀释液配制

1.所用用品必须彻底洗涤干净，严格消毒2.所用蒸馏水要新鲜，药品要求用分析纯，配制的稀释液要严格消毒

3.使用的鲜奶需经过滤后在水浴（92-95℃）中灭菌10分钟，卵黄要取自新鲜鸡蛋，搅拌要充分

4.药物称量要准确，要用分析天平

5.抗生素、酶类、激素类、维生素等添加剂必须在稀释液冷却至室温时，方可加入。6．稀释要求现配现用，保持新鲜

第四章人工授精第四节精液的稀释目录第82页,共132页，2024年2月25日，星期天四、稀释倍数和稀释方法

第四章人工授精第四节精液的稀释目录第83页,共132页，2024年2月25日，星期天1．稀释倍数确定

精液适宜稀释倍数与家畜种类和稀释液种类有关。确定稀释倍数应根据原精液的质量，尤其是精子的活率和密度、每次输精所需的精子数、稀释液的种类和保存方法。一般牛4-6倍，猪1-3倍，免3-5倍。

第四章人工授精第四节精液的稀释目录第84页,共132页，2024年2月25日，星期天2．稀释方法

1）精液经检查合格后应立即进行稀释，越快越好；2）稀释时，稀释液的温度和精液的温度必须调整一致，以30-35℃为宜；3）稀释时，将稀释液沿精液瓶或插入的灭菌玻璃棒缓慢倒入，防止剧烈震荡；4）若作高倍稀释，应先低倍后高倍，分次进行稀释；5）稀释后立即镜检，活力应和稀释前一样；6）稀释后精液立即进行分装（一般按一头母畜的输精量）保存。

第四章人工授精第四节精液的稀释目录第85页,共132页，2024年2月25日，星期天第五节精液保存

第四章人工授精第五节精液的保存目录第86页,共132页，2024年2月25日，星期天精液的保存方法现行精液保存的方法按保存的温度分：常温保存（15-25℃）低温保存（0-5℃）冷冻保存（-79--196℃）三种。按精液的状态分：液态保存：常温保存和低温保存温度都在0℃以上，故称液态精液保存冷冻保存：超低温保存精液以冻结形式作长期保存，故称冷冻精液保存。第四章人工授精第五节精液的保存目录第87页,共132页，2024年2月25日，星期天一、低温保存原理：低温能抑制精子的代谢和微生物的繁殖，但迅速降温会使精子遭受冷休克，加低温保护剂和缓慢降温并保持较低温度，可使精液保存数天。稀释液主要成分：抗生素、15-25%的卵黄、基础液保存方法：用纱布包数层于装冰块的保温瓶中或冰箱中保存。保存温度：2-5℃第四章人工授精第五节精液的保存目录第88页,共132页，2024年2月25日，星期天二、常温保存原理：精子自身所产生的酸性物质和稀释液中的酸性物质使精液的PH降低到一定的水平，能够抑制精子的代谢，从而延长精子的存活时间。抗生素能够抑制微生物的繁殖。稀释液成分：抗生素、单糖、缓冲剂保存温度：15-25℃第四章人工授精第五节精液的保存目录第89页,共132页，2024年2月25日，星期天第六节精液的冷冻保存第四章人工授精第六节精液的冷冻保存目录第90页,共132页，2024年2月25日，星期天精液冷冻概述第四章人工授精第六节精液的冷冻保存目录1950年英国科学家Polge和Smith采用卵黄和甘油作保护剂，用干冰作冷源进行精液的冷冻，解冻后授精成功，开创了世界人工授精的新世代。到90年代，发达国家的全部奶牛和绝大多数肉牛采用冻精输精。精液冷冻保存成为最可靠的保存方法。第91页,共132页，2024年2月25日，星期天精液冷冻的原理（一）第四章人工授精第六节精液的冷冻保存目录超低温使精子处于零代谢状态，升温后能使精子复苏并且不失去受精能力。但精子冷冻过程会由于形成冰晶使精子受到损害，这些损害包括：精子外的水分先形成冰晶，而形成精子内外的渗透压差，导致精子水分外渗，精子内渗透压增高，电解质浓度提高，酸碱失去平衡。冰晶的形成造成：产生机械压力，导致细胞表层破坏冰晶渗透入精子内部，破坏精子结构如果在冷冻过程只形成微小冰晶，即玻璃化状态，则精子就不容易受到损伤，解冻后能恢复活力。第92页,共132页，2024年2月25日，星期天精液冷冻的原理（二）第四章人工授精第六节精液的冷冻保存目录形成玻璃化状态的条件：防冻剂干扰晶格的排列形成“过冷溶液”快速降温，使水分子来不及移动和排列，就失去了能量，形成更“过冷溶液”快速降温使液体只能形成极微小的“微晶”保存和解冻过程的变化：冰晶很微小，所以表面能很高，微晶总是力图合并成大冰晶一旦吸收一定的能量，冰晶就会合并成大冰晶，从而使精子受到破坏。保存过程中，即使冻精温度只升高到-60℃，也可能使精子死亡冻精在解冻时也需要快速升温，才能保证防止微晶在解冻过程中形成大冰晶第93页,共132页，2024年2月25日，星期天精液冷冻的稀释液第四章人工授精第六节精液的冷冻保存目录低温保护剂：糖类：蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖卵黄、奶类冷冻保护剂甘油二甲基亚砜乙二醇抗生素类：庆大霉素、青霉素、链霉素等第94页,共132页，2024年2月25日，星期天冷冻精液稀释液的组成第四章人工授精第六节精液的冷冻保存目录基础液：由糖类和盐类、水配制的等渗液第一液：由基础液和卵黄（20%）组成的低温保存稀释液。用于在30℃下稀释和逐步降温。第二液：由第一液和甘油或其它防冻剂组成。甘油含量通常比稀释后浓度高一倍。第95页,共132页，2024年2月25日，星期天解冻液的配制第四章人工授精第六节精液的冷冻保存目录一般采用2.9%的柠檬酸钠作解冻液猪的冻精解冻液用常温保存稀释液BTS也可用VB12注射液作解冻液如果解冻液中加入2mmol的咖啡因有利于提高受胎率第96页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录冷冻精液的程序1、精液的采集：牛羊采精可采用一次采精两个射精量的方法2、品质检查：精液的密度和活力都必须符合要求3、稀释前处理：羊、猪的精液在稀释前进行离心或清洗（羊）有利于提高解冻后活力4、稀释：可采用一次稀释也可采用二次或三次稀释。最常用的是二次稀释第97页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录冷冻精液的程序稀释第一次稀释：在30℃温度下，根据计算的稀释倍数进行第一次稀释，放在500毫升的烧杯中与第二液一起缓慢降温至2-5℃。第二次稀释：在2-5℃下进行平衡：是精液与防冻剂（甘油）相互的时间。一般2-4小时。分装：冻精的剂型有细管（0.25ml、0.5ml），安瓿（2.5ml、5ml)、颗粒（0.1ml）、袋装等。第98页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录冷冻精液的程序冷冻：冷源：干冰（-79℃）、液氮（-196℃）冷冻用品：冷冻面：铜网、氟板（聚四氟乙烯）、铝板冷冻槽：广口液氮罐、液氮槽钢匙、镊子、低温温度计冷冻方法：干冰埋藏法液氮熏蒸法不同剂型冷冻方法：颗粒冻精细管冻精活力检查：活力0.3以上

第99页,共132页，2024年2月25日，星期天第100页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录冻精的解冻解冻温度：有冰水解冻，30-40℃解冻，高温（50-75℃）解冻，以第二种方法最常用解冻方法：湿解冻法：在试管中加入0.5-1ml解冻液，升温到30-40℃，投入一粒冻精，摇动并取出干解冻法：先将试管预热至30-40℃，投入冻精颗粒后，至融化一半时，取出加入20-30℃的解冻液细管冻精解冻：将细管从液氮罐或液氮槽中取出，投入30-40℃的水中至融化一半时取出用手搓至完全融化或用体温解冻解冻后温度：5-8℃解冻后保存：在2-5℃下或冰瓶中可保存12小时以上。第101页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录冷冻精液的保存冻精（颗粒）应进行标记：公畜名（号）、采精日期、容量保持液氮罐中液氮面高度接触冷冻精液的用品都要进行预冷在冻精进行转移时，应尽可能减少在空气中暴露的时间。如果是颗粒冻精应先移入液氮槽中再解冻。液氮罐应放在凉爽通风处，避免放在高温或通风不畅的地方液氮罐在运输中应防止暴晒和碰撞。第102页,共132页，2024年2月25日，星期天一、输精前的准备第103页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第七节输精目录使用过的器械应用清水冲洗后，用蒸馏水冲洗三遍，再放入灭菌锅或干燥箱中消毒。橡胶输精器不能使用洗涤剂或去污剂洗涤。可用常压蒸锅消毒或用酒精冲洗后，用蒸馏水冲洗一遍，再放入干燥箱中消毒。开膣器用前可放在新洁尔灭消毒剂中，使用前用生理盐水冲洗。输精器械准备第104页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第七节输精目录精液准备精液的剂量及有效精子数应用符合该种家畜的相关要求。冷冻精液使用前应在40℃水浴中升温3-5秒，至一半解冻后，取出。解冻后的精液温度应为5-8℃。猪马的精液输精前应升温到17-35℃。第105页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第七节输精目录各种家畜输精要求畜种输精量ml有效精子数(亿)适宜时间输精次数间隔时间输精部位牛0.2-10.1-0.2发情结束时1子宫体马驴15-302-5发情第二天开始或在卵泡第4、5期2-324-48子宫内猪50-10020-50静立反射后12小时2-312-24子宫内羊0.05-0.20.2-0.5发情开始后12小时1-26-12子宫外口兔0.2-0.50.15-0.2促排针后2-6小时1-28-10阴道内鸡0.05-0.115-7天输卵管口第106页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第七节输精目录母畜的准备牛:可在兽医保定架、采精架、输精架或奶牛颈夹内保定，尾部拉向一侧马（驴）：可在兽医保定架或用扁绳脚绊保定。尾根部用绷带或布包扎。羊：可在升高的配种架内保定，或降低配种员站立的位置，或两人将母羊后肢提起。猪：在圈舍或定位栏内保定各种家畜在输精前可用高锰酸钾水擦拭外阴及周围并用纸巾擦干。猪只有干纸巾擦拭。第107页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第七节输精目录人员准备输精员应将指甲剪短磨光，将手洗净擦干，必要时用75%酒精棉消毒。如果手臂伸入直肠或阴道内，应戴上长臂手套，并涂以石蜡油或稀释液。冬季应穿上棉坎保暖和方便操作。第108页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录二、输精操作第109页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录（一）牛的输精第110页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录牛的输精方法开膣器法直肠把握子宫颈深部输精法第111页,共132页，2024年2月25日，星期天子宫颈口尿道口膀胱第112页,共132页，2024年2月25日，星期天卵巢子宫颈子宫体第113页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录牛的输精对母牛进行发情鉴定，母牛发情结束，不再爬跨其它母牛，精神趋于稳定时输精。将母牛保定，尾部拉向一侧，外阴用高锰酸钾水棉球擦拭，并擦干。将冷冻精液解冻，剪去封口端，剪口端向前放外套管中，输精器通针向后拉出15厘米。将外套管套在输精器上。分开外阴，将套管连同外塑料膜向前上方伸入阴道10厘米，将输精器捅透外膜。第114页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录牛的输精左手（或右手）戴上长臂手套涂少量石蜡油伸入直肠，排出宿粪。手伸至直肠狭窄部后，将直肠向后移，向骨盆腔底下压，找到子宫颈（棒状，质地较硬有肉质感，长约10-20厘米。手移至子宫颈后端（子宫颈阴道部），使子宫颈呈水平方向，并用力将子宫颈向前推，使阴道壁拉直，方便输精器向前推进。右手将输精器前端伸到子宫颈外口附近，左手配合，使前端对准子宫颈外口。左右手配合，上下调整，使输精器前端进入子宫体内。第115页,共132页，2024年2月25日，星期天第四章人工授精第五节精液的冷冻保存目录牛的输精等确认输精器到达子宫体时（短距离前后移动时，没有明显阻力），不要再向前推送输精器。将精液缓慢注入，并