革兰氏阳性球菌的分离与鉴定

革兰氏阳性球菌的分离与鉴定IdentifiedmethodforStaphylococciGram-stain

Isolationandculture

Pureculture

Direct

identification第2页,共27页，2024年2月25日，星期天StaphylococciareGram-positivecocci,typicallyarrangedinclumpsorGrape-likeclusters第3页,共27页，2024年2月25日，星期天第4页,共27页，2024年2月25日，星期天Direct

identification

Themannitolfermentationtest.

TheCoagulaseTest

TheDNaseTestNovobiocin(NB)disc第5页,共27页，2024年2月25日，星期天Themannitolfermentationtest.

Inoculatethebacteriaintoamannitolmicro-tube,incubateat370Cfor18h.S.aureuswillfermentmannitoltoproduceacid,whichcausesthemediumtoturnyellow.第6页,共27页，2024年2月25日，星期天TestStaphylococcusaureusStaphylococcusepidermidisStaphylococcussaprophyticusMannitolfermentationPositiveNegativeUsuallypositive第7页,共27页，2024年2月25日，星期天TheCoagulaseTestCoagulaseisanenzymeconvertingfibrinogenintofibrinpromotingbloodclotting.Itmightbeavirulencefactorwiththecoagulatedbloodaroundthebacteriaprotectingthemfromtheimmunesystem.Coagulase-negativestrainsareoftenaspathogenicascoagulase-positivestrains.第8页,共27页，2024年2月25日，星期天TheDNaseTestInoculateDNaseagarplateswithaloopsothatthegrowthisinplaquesabout1cmindiameter.Incubateat370Covernight.Floodtheplatewith1Nhydrochloricacid.ClearingaroundthecoloniesindicatesDNaseactivity.Thehydrochloricacidreactswithunchangeddeoxyribonucleicacidtogiveacloudyprecipitate.Afewotherbacteria,e.g.Serratia,maygiveapositivereaction.第9页,共27页，2024年2月25日，星期天StaphylococcusaureusGrowingonDNaseAgar

第10页,共27页，2024年2月25日，星期天Bloodagarwithanovobiocin(NB)disc

StaphylococcusaureusGrowingonBloodAgar

StaphylococcussaprophyticusGrowingonBloodAgar第11页,共27页，2024年2月25日，星期天IdentificationofGram-positivecocci第12页,共27页，2024年2月25日，星期天typesOfStreptococcus第13页,共27页，2024年2月25日，星期天βhaemolyticsteps:LancefieldgroupsHistoricallyA,B,C,FandGgroupspecificantigenscellwallpolysaccharidegroupDandEnterococcilipoteichoicacidmoietyNotalwaysβhaemolyticNow:18differentgroupsofstrep:fromA-H,andfromK-T第14页,共27页，2024年2月25日，星期天(β)HaemolyticStreptococcusgroupsS.pyogenesGroupA

S.agalactiaeGroupB(occasionallyαornone)

StreptococcusequismilisGroupC(occasionallyαornone)

StreptococcusbovisGroupD(αornone,occasionallyβ)

StreptococcusanginosusGroupF&G第15页,共27页，2024年2月25日，星期天GpAstrep:S.pyogenesLaboratoryIDGram+veCatalaseHaemolysissmall,round,greycoloniesβhaemolysiszoneislargeGpAantigen第16页,共27页，2024年2月25日，星期天IsolationandIdentificationofgroupAbetahemolytic(Streptococcuspyogenes)

onBloodagar.Streptococcuspyogenesproducesazoneofbetahemolysisaround2-3mmindiametersurroundingeachcolonySensitivitytotheantibioticbacitracinGroupAStrepissenstive,otherbhaemolyticstrepsareresistant.第17页,共27页，2024年2月25日，星期天Bacitracinsensitivity第18页,共27页，2024年2月25日，星期天GroupB:S.agalactiaeS.agalactiaeIdentificationCatalasenegativeAppearanceonBALargercoloniesthanGpASmallzoneofhemolysisLatexagglutinationGpBBacitracinresistantCAMPpositiveGrowthonMac(weak)第19页,共27页，2024年2月25日，星期天PresumptiveIDTests-CAMPThe“CAMP”test(acronymfordevelopers)isusedtodifferentiateS.agalactiae(GBS),whichispositive,fromotherbetahemolyticstrep,allofwhicharenegative“CAMPfactor”isasolublehemolysinproducedbyGBSthatcombinesinasynergisticwaywithasimilarhemolysinofS.aureustoformanarrowheadzoneofclearing.SeeimageThestaphisstreakedperpendicularlytotheunknownstrep.Afterappropriateincubationtimean“arrowhead-shaped”clearzoneofhemolysiswillappear.第20页,共27页，2024年2月25日，星期天S.agalactiaeSynergistichaemolysisobservedbetweenbetahemolyticStaphylococcusaureusandgroupBstreptococci.

Positivereaction:arrowheadhaemolysispattern第21页,共27页，2024年2月25日，星期天α–Haemolyticstreps:ViridansstrepsNotgroupablebyLancefieldgroupsNogroupspecificCHO

StreptococcuspneumoniaePrimaryhumanpathogenS.sanguis

S.mitis

S.mutans

S.salivarius第22页,共27页，2024年2月25日，星期天第23页,共27页，2024年2月25日，星期天ThePneumococcus(Streptococcuspneumoniae)

1:IsolationonBloodagar

PneumococcifrequentlyrequireenrichedmediaandincreasedCO2tensionforinitialisolation.TheyareusuallyisolatedonBloodagarandincubatedinacandlejar(aclosedcontainerinwhichalitcandleisplacedtoremoveO2andincreaseCO2)at37C.OnBloodagar,coloniesappearsmall,shiny,andtranslucent.Theyaresurroundedbyazoneofalphahemolysis

2:Optochinsensitivity

Pneumococciaretheonlystreptococcithataresensitivetothedrugoptochin(ethylhydrocupreinehydrochloride).3:Gramstain:

gram-positive,diplococci

第24页,共27页，2024年2月25日，星期天第25页,共27页，2024年2月25日，星期天TheGenusEnterococcus

Enterococciaregram-positivestreptococci,typicallyoccurringinpairsandshortchains,thatarenormalfloraoftheintestinaltract.Enterococciresponsibleforavarietyofopportunisticinfectionsinhumans,andserologicallybelongtoLancefieldgroupDstreptococci.OnBileEsculinaga