《全血血清全氟辛酸（PFOA）测定液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）》

ICSCCS点击此处添加CCS号IDBXX/TXXXX—XXXX前言 II 2规范性引用文件 4试剂和材料 5仪器设备 6分析步骤 7检出限、回收率和精密度 附录A（资料性）PFOA标准物质多反应监测（MRM）色谱图 IIDBXX/TXXXX—XXXX本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。为指导全血/血清样本中全氟辛酸（PFOA）检测，特制定本文件。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由江苏省卫生健康委员会提出。本文件由江苏省卫生标准化技术委员会归口。本文件起草单位：南京医科大学、苏州市疾病预防控制中心、生态环境部南京环境科学研究所。本文件主要起草人：顾爱华、徐进、刘倩、徐诚、胡佳、吉贵祥、郭文慧、翁振坤。1DBXX/TXXXX—XXXX全血/血清全氟辛酸（PFOA）测定液相色谱-串联质谱法本文件规定了全血/血清中全氟辛酸（PFOA）液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于人、啮齿类动物（大鼠、小鼠）全血/血清样本中全氟辛酸（PFOA）的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1全氟辛酸Perfluorooctanoicacid又名十五氟辛酸，是一种有机化合物，化学式为C8HF15O2。4原理以甲醇作为溶剂，萃取全血/血清样本中PFOA，萃取液经固相萃取柱净化后，用液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）测定，用选择离子确5试剂和材料除非另有规定，本文件中所用的试剂，均指分析纯试剂。本文件中所使用的水，应符合GB/T6682中一级水的规定。5.1试剂2DBXX/TXXXX—XXXX5.1.5乙酸铵，优级纯。5.2溶液配制）：用0.22μm滤膜过滤（现配现用）。5.2.2乙腈-乙酸铵混合溶液：根据需要取适量乙腈和乙酸铵溶液（见4.7）按体积比2∶3进行混匀（现配现用）。5.2.31%氨水-甲醇溶液：取1mL氨水，加入100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀（现配现5.2.42%甲酸溶液：取2mL甲酸，加入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀（现配现用）。5.2.5PFOA标准物质，纯度≥99%。5.2.7混合标准溶液：取PFOA标准储备溶液（见5.2.6）0.5mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释6仪器设备6.2涡旋混合器。6.3氮吹仪。6.5超声仪。6.6固相萃取装置。6.8聚酰胺过滤膜，0.22μm。6.9液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS），配有电喷雾离子源（ESI）。7分析步骤7.1取样全血/血清样本按照WS/T661的规定进行获取，取样过程中应避免溶血。7.2提取操作，将两次上清溶液混合。7.3净化3DBXX/TXXXX—XXXX分别用2mL甲醇和2mL水活化固相萃取柱（见5.7向活化后的固相萃取柱中逐渐加入6.2中的样水-甲醇溶液（见4.9）洗脱，收集洗脱液，45℃氮吹浓缩至近干。用200μL乙腈-乙酸铵混合溶液（见7.4液相色谱-串联质谱（LC/MS/MS）参考条件参考条件如下：7.4.1液相色谱参考条件d)进样量5μL。表1液相色谱流动相及梯度洗脱条件7.4.2质谱参考条件b)扫描方式：负离子扫描。c)检测方式：多反应监测。d)雾化气、锥孔气为高纯氮气，碰撞气为高纯氩气。使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；喷雾电压、去簇电压、碰撞能等电压值应优化至最优灵敏度。7.5标准曲线绘制取2μL、10μL、20μL、100μL、200μL、400μL和500μL混合标准溶液（见5.2.7用乙腈-乙酸铵混合溶液（见5.2.2）进行稀释（现配现用配制全氟辛酸标准系列溶液，浓度分别为0.001测定其峰面积（n=3）,以浓度对峰面积均值绘制标准曲线。7.6定性4DBXX/TXXXX—XXXX按照上述分析条件（见7.4）对PFOA含量进行测定。若样品中待测物的色谱峰保留时间与相应标准工作溶液相近(±2.5%且样品中待测物定性离子的相对丰度与浓度接近的标准工作溶液的定性离子的相对丰度偏差不超过如下条件（表3），可判定为样品中存在PFOA。表2相对离子丰度的最大允许偏差7.7全血/血清样本中PFOA含量计算按照如下公式计算全血/血清样本中PFOA含量，结果保留小数点后两位：式中：ρ----样品中PFOA含量,单位为毫克每升（mg/Lc----标准工作曲线得到的PFOA浓度，单位为毫克每升（mg/Lf----样本稀释倍数。8回收率和精密度8.1回收率8.2精