艾滋病检测技术规范2009年版HIV抗体检测章节(2010年9月).ppt

1、艾滋病实验室检测技术规范、行业标准：艾滋病及艾滋病病毒感染诊断标准WS298-2008技术规范：国家艾滋病检测技术规范(2009年修订版)、艾滋病病毒抗体检测、艾滋病病毒抗体检测可用于监测、诊断和血液筛查；监测检测的目的是了解不同人群的艾滋病感染率及其变化趋势，包括各种高危人群、重点人群和一般人群。诊断性检测是确定个体的艾滋病病毒感染状况，包括临床检测、自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。血液筛查的目的是防止艾滋病毒通过输血传播，包括献血者筛查和原始血浆筛查。艾滋病病毒抗体检测的目的，1。根据目的选择检测方法和检测策略。2、严格遵守实验室的SOP。3.如果筛选试验呈阳性，必须进行

2、确认试验。4、筛选试验为阴性，不应做确认试验。5、筛查和确认试验阳性应做好咨询工作。一、艾滋病病毒抗体检测的要点，以诊断为目的的检测策略，常规艾滋病病毒抗体检测分为筛查试验(包括初筛和复检)和确证试验，筛查试剂必须经国家食品药品监督管理局注册和批准，在有效期内，其中酶联免疫吸附试验应通过批量检验。建议在临床质量评估中使用高灵敏度和特异性的试剂。筛查样本，艾滋病病毒抗体筛查可以使用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样本。筛选方法，酶联免疫吸附试验(酶联免疫吸附试验)，化学发光或免疫荧光试验，快速检测(RT)等检测试验，明胶颗粒凝集试验(PA)，免疫过滤试验，免疫层析试验，(1)酶联免疫吸附试验(

3、酶联免疫吸附试验)，可使用血液，唾液和尿液样本，而酶联免疫吸附试验大多是一种简单的艾滋病病毒抗体检测试剂。本发明的艾滋病毒抗原和抗体联合检测试剂可以同时检测血液中的艾滋病毒-1P24抗原和HIV-1/2抗体。将艾滋病毒抗原或抗体包被在固体载体上，加入待测样品和酶标记的艾滋病毒抗原或抗体，加入显色底物，用酶标仪测定结果。有效检测的阴性和阳性质控品必须符合试剂盒的规定。酶联免疫吸附试验(ELISA)具有准确度高、价格低、结果判断标准客观、结果易于记录和保存的优点。应用：流行病学监测和大量临床标本的检测，(2)化学发光或免疫荧光试验，使用发光或荧光底物，可检测抗体和抗原及抗体。将艾滋病病毒抗原或抗体

4、包被在固体载体上，加入待测样品和酶或荧光标记的艾滋病病毒抗原或抗体，加入发光或荧光底物，用发光或荧光仪器测量结果。有效检测的阴性和阳性质控品必须符合试剂盒的规定。(3)快速检测(RT)和其他检测试验，明胶颗粒凝集试验(PA):这是一种检测艾滋病血清抗体的简单方法。被艾滋病毒抗原致敏的明胶颗粒用作载体，与待检测的样品相互作用。当待测样品中含有艾滋病病毒抗体时，明胶颗粒和抗体将发生凝集反应，结果将根据凝集反应进行解释。PA试剂有两种：同时检测HIV-1和HIV-2抗体和分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效的检测必须有阴性和阳性的质量控制。免疫渗滤试验：斑点酶联免疫吸附试验和斑点免疫胶体金(或胶

5、体硒)快速试验：均以硝酸纤维素膜为载体，将艾滋病病毒抗原斑点固定在膜上，加入待测样品。阳性结果显示膜抗原部位有彩色斑点。反应时间少于10分钟。有效测试的质量控制点必须着色。免疫层析试验：以硝酸纤维素膜为载体，将艾滋病病毒抗原线性固定在膜上，待测样品(血液或唾液)沿固体载体迁移。阳性结果显示膜上抗原部位有有色条带。有效测试的质量控制带必须着色。优势：，将50ul全血样品加入到样品垫中，指血法，静脉血法，加入一滴缓冲液，15分钟内读取结果，硒标记法，筛查程序，初筛试验，根据检测目的选择符合要求的筛查试剂对样品进行初筛试验，对阴性反应的样品出具艾滋病病毒抗体阴性(-)报告；对于阳性反应的样品，需要进

6、一步复检和确认试验。筛选程序、复检试验对于初筛呈阳性反应的样品，复检试验应使用原试剂和另一种不同原理的试剂(或制造商)，或另外两种不同原理或制造商的试剂进行。如果抗原-抗体组合试剂用于初步筛选试验，复检必须包括抗原-抗体组合试剂。如果抗原抗体联合试剂试验为阳性，但抗体试剂试验为阴性，则应考虑HIV-1 p24抗原或核酸试验，必要时应进行随访。艾滋病检测筛查实验室对判断为阳性的样本进行复检，确认实验室可以直接进行确认试验。一、艾滋病病毒抗体初筛试验流程图、初筛程序、初筛试验结果报告与附表1一致，且阴性反应报告为“艾滋病病毒抗体阴性(-)”;阳性反应报告为“待复查的艾滋病病毒抗体”。艾滋病病毒抗体

7、复检试验见附表2，两项试验均为阳性或一项阴性，一项阳性报告为“待确认的艾滋病病毒抗体”；两项检测均为阴性，并报告为“艾滋病毒抗体阴性(-)”。筛选程序、转移具有阳性筛选试验的样本如果您需要将它们送至更高级别的实验室进行复检，您需要检查您的身份并补充您的个人信息(如姓名和身份证号码)。如有必要，采集第二份血样，持艾滋病病毒抗体筛查报告，送至当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送至确认实验室复检。艾滋病病毒抗体复检试验见附表2，两项试验均为阳性或一项阴性，一项阳性报告为“待确认的艾滋病病毒抗体”；两项检测均为阴性，并报告为“艾滋病毒抗体阴性(-)”。艾滋病病毒抗体复检报告应由一名检验员和一名审核员签字

8、。艾滋病病毒抗体确认试验、确认试剂：必须经国家食品药品监督管理局注册并在有效期内。确认样本：血清、血浆和滤纸可用于确认血斑，包括蛋白质印迹试验(WB)、LIATEK艾滋病毒试验、RIPA试验和IFA试验。中国常用的验证性测试方法是WB。确认过程中，使用HIV-1/2混合试剂进行检测，如果是阴性，则报告艾滋病病毒抗体阴性()；如果是阳性，报告HIV-1抗体阳性()；如果不是阴性反应，但不符合阳性判断标准，则该艾滋病毒抗体被报告为不确定()。结合流行病学资料，可在4周后随访。如果条带模式没有进展或为阴性，将被报告为阴性；如果在随访期间有积极的反应，报告是积极的；如果在随访期间条带模式有所进展，但不

9、符合阳性标准，则应随访8周。8周后，如果显带模式没有进展或显示阴性反应，则报告为阴性；如果符合艾滋病病毒抗体阳性诊断标准，则报告为阳性，如果不符合阳性判断标准，则可决定是否继续随访。在随访期间，可以检测病毒核酸或P24抗原作为辅助诊断。在HIV-2特异性指示带的情况下，有必要根据实际情况使用HIV-2蛋白印迹试剂进行HIV-2抗体确认试验或HIV-2核酸试验，以进一步明确HIV-2感染状况，并将困难样本送至国家艾滋病参考实验室进行进一步分析。艾滋病病毒抗体确认试验流程图、确认试剂、确定艾滋病病毒抗体确认试验结果，注：HIV-1抗体特异性条带包括：env条带：gp160/gp120、gp41；G

10、ag带：p55，p24，p17(或p18)。Pol波段：p66(或p65)、p51、p31。HIV-2抗体特异性带包括：env带：gp140/gp105，gp36；Gag带：p56，p26，p16。Pol带：p68，p53，p34。(由于使用的菌株不同，HIV-2的环境带也可以是gp125/gp80和gp36)。(1)如果符合以下两个标准，则可以判断HIV-1抗体阳性：至少出现两条env带(gp41和gp160/gp120 ),或者至少同时出现一条env带和p24带；符合试剂盒提供的阳性判断标准。试剂盒提供的阳性标准是两个env(Gp160/gp41gp120)和pol(p66，p51，p31

11、)或gag(p55，p24，P17)gp 160 gp 120 p 66/p51/p31/p55/p24/P17或Gp41gp120p66/p51/p31/p55/p24/。P17 gp160gp120p24，艾滋病病毒抗体确认试验结果的测定，(2)HIV-2抗体阳性时HIV-2特异性指示带样本：如果HIV-1抗体同时阳性，则报告HIV-1抗体阳性，不建议进一步进行HIV-2抗体确认试验；如果HIV-1抗体不确定或同时为阴性，应使用HIV-2确认试剂进行HIV-2抗体确认试验。同时，它满足以下两个标准，即至少有两个env带(gp36和gp140/gp105)，试剂盒提供的阳性标准可判断为HIV

12、-2抗体阳性。艾滋病病毒抗体确证试验结果的确定，3)艾滋病病毒抗体特异性带不确定，但不足以确定阳性。(4)当艾滋病病毒抗体为阴性时，未出现艾滋病病毒抗体特异性条带。艾滋病病毒抗体确认试验结果的判断、艾滋病病毒抗体确认试验结果的报告、艾滋病病毒抗体确认试验结果的报告见附表3。(1)符合HIV-1 /HIV-2抗体阳性判定标准，报告“HIV-1/HIV-2抗体阳性()”，并按规定做好检测后的咨询、保密和疫情报告工作。(2)符合艾滋病病毒抗体阴性标准，并报告“艾滋病病毒抗体阴性()”。如有疑似“窗口期”感染，建议进一步做艾滋病病毒核酸检测，以尽快做出明确诊断。(3)符合艾滋病病毒抗体不确定度的判定标准，报告“艾滋病病毒抗体不确定度()”，并在备注中注明“4周后复查”。确认报告发布后，应同时进行测试后咨询。艾滋病病毒抗体确认报告由检测人员、审核人员和签发人签字后，按照原检验程序(确认实验室一份，检验单位一份，患者一份)一式三份反馈。如果确认对象账户不属于本地区，应将确认报告抄送感染者账户所在地的省级艾滋病确认中心实验室。经系统确认的其他当地人员也应及时向当地卫生行政部门和省级艾滋病确认中心实验室报告。省级艾滋病确认中心实验室难以确认的样本送至国家艾滋病参考实验室进行确认。当同一受试者的样本在不同实验室得到的确认结果不一致时，国家艾滋病参考实验室将进行