2019版高考生物一轮复习 生物技术实践 第2讲 微生物的培养与应用学案

1、第二次微生物的培养和应用试验纲要全国卷五年的考试情况1 .微生物的分离和培养2017卷t39、2017卷t39、2017卷t39、2017卷t39、2017卷t39、2017卷t39、2017卷t392 .某种微生物数量的测定2016卷t39，2016卷t393 .培养基对微生物的选择作用2017卷t39、2017卷t39、2017卷t39、2017卷t39试验点1|微生物的实验室培养(对应学生用书236页)知识记录-基础整理1 .培养基(1)概念：人们根据微生物对营养物质的需要，为其生长繁殖制备营养基质。(2)营养构成：一般包括水、碳源、氮源和无机盐。 同时，还必须满足微生物生长对pH、氧及

2、特殊营养物质的要求。(3)种类：按物理性质分为液体培养基和固体培养基。下表为某微生物培养基的成分KH2PO4飞弹氢氧化钠MgSO47H2O机动战士葡萄糖尿素琼脂二氧化碳1.4克2.1克0.2克10.0 g克1.0克15.0 g克一千毫升该培养基中能够向微生物提供碳源的是葡萄糖，由于在该培养基中添加了琼脂，因此该培养基是固体培养基。2 .无菌技术(1)要点：防止外来杂菌入侵。(2)各对象无菌操作方法(接线)；回答-b-I-b-ii、-a-a-iii、iv-b3 .大肠菌群的精制培养(1)制备牛肉糊的蛋白酶固体培养基一点一点(2)精制大肠菌群的方法纯化培养的原理：在培养基中从一个细胞球中获得繁殖的

3、肉眼可见的菌落，即可得到比较纯粹的菌种。纯化大肠菌群的重要步骤：接种。接种方法：下图甲表示用平板划线法接种得到的平板，下图b表示用稀释涂布平板法接种得到的平板。纯化原理：上图甲细胞的分散由一系列连续划线操作实现，上图乙细胞的分散由一系列梯度稀释和涂布平板操作实现。4 .菌种的保存方法(1)临时保存法：对于频繁使用的菌种，首先在试管的固定斜面培养基中接种培养，然后在4 的冰箱中保存。(2)甘油管藏法：对于需要长期保存的菌种，将菌液转移到灭菌后的甘油中，混合后放在-20 冷冻库中保存。教材专栏知识1 P18选择“边条小资料”，微生物的接种方法只有平板划线法和稀释涂布平板法吗？ 微生物接种的核心是什

4、么？中国语，中国语，中国语。中国语，中国语，中国语。不过，微生物的接种技术还包括斜面接种、穿刺接种等方法，其核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。运用-考试对面练习考试一无菌技术1 .牛奶富含蛋白质，长期饮用有助于增强体质，而牛奶是云同步多种疾病的传播载体。 国家标准是每毫升牛奶的细菌计数不足30，000个。 牛奶消毒及细菌检验实验如下所示。 分析回答：(1)图中的步骤称为消毒法。 步骤是。(2)培养基中的蛋白酶可以为微生物提供。 进行步骤的操作时，应该选择以下哪一个工具？ 为了避免杂菌污染，这个步骤应该在附近进行。将与接种后的培养基对照的云同步放入37 恒温孵化机中培养36小时。 取出后，各

5、平板菌落数的修正结果如下表所示。 应选择稀释倍数为的平板进行修正，在消毒的牛奶中，细菌计数约为。牛奶稀释倍数102103104平板1的菌落数87101平板2的菌落数83121平板3的菌落数85100( (1)80 C恒温水浴15 min采用巴氏消毒法，步骤进行系列稀释(或梯度稀释)。(2)培养基中的蛋白胨可为微生物提供碳源、氮气源(和维生素)，因为是接种、需要订正数，所以需要稀释涂布平板法，而接种工具则因为要避免涂胶机、杂菌污染，故此程序应在酒精灯火焰附近进行。(3)计数各平板的菌落数时，应选择的菌落数为30300的计数，消毒过的牛奶中，细菌计数约为(878385 ) 3102=8 500个。

6、(1)巴氏系列稀释(或梯度稀释) (2)碳源、氮源(和维生素) b酒精灯炎(3)未接种培养基102 8 500个1 .考虑无菌技术效果：灭菌效果好于消毒。2 .考虑操作对象的容错技术：生物材料、操作者的手等只能消毒，不能灭菌。(2018湖北省七市高三一调)中国规定每公升自来水中的大肠菌群超过3个为要不得。 培养基中加入伊红美蓝，大肠菌群菌落变成深紫色，带有金属光泽。 有关部门在此基础上检测自来水中的大肠菌群。 具体步骤如下：(1)水龙头用火焰烧3分钟后，打开水龙头放水5分钟，用无菌三角瓶接受1，000毫升的水样，关好瓶塞。(二)固定漏斗和吸引瓶，用大头针定径套夹住过滤烟嘴边缘，将水倒入漏斗，边

7、吸引边加水。(3)用大头针定径套取出过滤烟嘴膜，置于无菌平板上培养，观察并记录实验结果。回答以下问题(1)用于实验的醋酸纤维素过滤烟嘴、漏斗、吸引瓶、大头针定径套等实验器材和培养基都必须先用_ _ _ _ _ _ _ _ _ _法灭菌。 为了检查培养基的灭菌是否彻底，最常用的方法是：中国语，中国语，中国语。(2)为了制作本实验使用的无菌平板，需要加入水、无机盐等大肠菌群所必需的营养成分，将容易排出集落外的培养基的pH值调整为 大肠菌群的菌落为了鉴别有木有，必须在培养基中放入(3)按照上述步骤制作的3个样品平板上的全部菌落数分别为49、51、47。 由此可以得出每升水样的大肠菌群数约为49的结论

8、吗？ 原因是什么，原因是什么？中国语，中国语，中国语。(1)培养基中常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法，检查培养基的灭菌是否彻底，在适当的条件下对灭菌后的培养基进行有会儿培养，观察培养基是否发生菌落的方法。(2)培养微生物的培养基需要碳源、氮源、水和无机盐。 计算微生物数量时使用固定培养基，因此需要在培养基中加入琼脂。 最适合大肠菌群生长的pH为中性或微碱性，伊红美蓝是特异性鉴定大肠菌群的指示剂，可利用伊红美蓝培养基来鉴定大肠菌群。(3)该培养基为鉴别培养基，在平板上生长的菌落仅一部分是由大肠菌群引起的菌落，因此大肠菌群数的实际值应小于49。(1)在适当的条件下对经高压蒸汽灭菌灭菌的培养基进行有会

9、儿培养，观察培养基是否产生菌落(2)碳源和氮源琼脂中性或微碱伊红美青(3)培养基表面不能生长的菌落，只有一部分是大肠菌群的菌落试验2微生物的精制培养2.(2018贵州模拟)生活饮用水已经经过沉淀、过滤、添加氯元素消毒等处理，含有微生物的情况较少，但水源污染或不要求处理时，仍含有相当量的微生物，含有致病性微生物。 供水管道的破损和二次供水等环节也有可能导致生活饮用水的污染。 因此，生活饮用水的微生物安全性日常检查很重要。 我国生活饮用水水质标准(GB5749-85 )规定的生活饮用水细菌总数不得超过100个/mL，总大肠菌群组不得超过3个/L。(1)检测细菌含量时，对水样进行一系列梯度稀释，用涂

10、布机将稀释度不同的水样分别涂布在琼脂固体培养基表面进行培养，记录菌落数，再计算样品中菌株数。 用该微生物的修正数方法得到的菌落数一般是生菌的实际数量，生菌的数量为_ _ _ _ _ _ _ (“小于”、“大于”或“等于”)。(2)用这种方法修订微生物时，为什么需要设置对照组？ _中国语，中国语，中国语。(3)将稀释后的102倍的水样分别各0.1 mL涂布在3个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基在大肠菌群的菌落数分别记录为155、158、170时，每1升原水样的大肠菌群数为(4)有必要对大肠菌群进行精制以供进一步研究。 下图为采用精制微生物培养的2种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体

11、方法。得到图a效果的接种方法是，得到图b效果的接种方法是，某同学用a法精制土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连接在一起。 最能想到的原因是，为了防止杂菌的污染，有同学建议加入抗生素，你觉得好吗？(1)用这种方法计数时，由于两个以上的细胞球在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，所以得到的菌落数通常比活菌的实际数量小。(2)设立对照的目的是排除培养基是否被污染等非测试因子对实验结果的影响。(3)能够根据给定的数据，计算出每公升原水的大肠菌群数为(155158170 ) 310210103=1.61108。(4)阅读问题图可知，得到图a效果的接种方法为稀释涂布平板法，图b效果的接种方法为平板划线法。

12、 某同学用a法纯化土壤中的细菌，发现培养基上的菌落连在一起，但最可能的原因是菌液浓度过高。 抗生素不仅能杀菌，也能杀菌大肠菌群，所以在培养基中加入抗生素即可要不得。(1)小于(2)是因为需要判断培养基是否被污染，(3)1.61108 (4)稀释涂布平板法平板划线法菌液浓度不能过高(土壤溶液稀释不足)项目优点缺点平板划线法观察菌落的特点，可以分离出混合菌无法计数稀释涂布平板法可以数，可以观察蚁群的特征吸收量少，麻烦，平板不干燥效果差，容易扩散某课题组研究了不同浓度抗生素a对大肠菌群生长的影响，实验结果如图1所示。 回答以下问题(1)该培养基为大肠菌群提供的主要营养物质有碳源、水、无机盐、_种，但

13、配置该培养基时，通常加入_作为凝固剂(2)为了可靠地利用大肠菌群，在形成菌膜时，是相对于菌种的稀释倍数。 同时，培养接种大肠菌群的时候特别注意进行_操作。 实验结果显示，选择抑制大肠菌群作用最明显的抗生素a浓度的根据是中国语，中国语，中国语。(3)为了减少实验误差，还应准备不同浓度的抗生素a。(4)本课题组采用上述实验方法，还研究了相同浓度的a、b、c 3种不同抗生素对大肠菌群生长的影响。 此处理方案如图2所示(可以模仿图1进行必要的注释)。(1)微生物生长所需的4种主要营养物质是水、无机盐、碳源和氮源。 本实验使用的培养基为固体培养基，通常的凝固剂为琼脂。(2)图中接种大肠菌群时使用的接种方

14、法为稀释涂布平板法，为了得到菌膜，稀释倍数不能太大。 接种培养大肠菌群的关键是无菌操作。 图1分析显示号丸纸片抗菌环最大，该浓度的抗生素a对大肠菌群的抑制作用最显着。(3)为了减少实验误差，每种浓度的抗生素a准备了多个圆纸片，反复进行实验。(4)该方案的自变量为相同浓度的a、b、c三种不同抗生素，也需要空白对照，留心图中标记清楚，具体图解答案。(1)氮源琼脂(2)稀释涂布平板不能太大的无菌透明环越大，抑制效果越显着(3)多张圆纸片(4)的图如下图所示试验点2|微生物的分离和订正数(对应学生用书238页)知识记录-基础整理1 .修订蚁群数的方法(1)显微镜直接修正数法原理：用特定细菌校正数板或血

15、细胞校正数板，在显微镜下校正一定容积样品中的微生物数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌和活菌。(2)间接订正数法(活菌订正数法)原理：样品稀释度高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过计数平板上的菌落数，即可推测样品中含有多少活菌。修订公式：每克样品菌株数=(CV)M。 其中，c表示以一定稀释度在平板上生长的平均菌落数，v表示涂布平板时使用的稀释液的体积(mL )，m表示稀释倍数。操作：设置重复小组，提高实验的说服力和精准性。 另外，为了保证结果正确，一般选择蚁群数为30300的平板进行计数。2 .分离和订正分解土壤中尿素的细菌(1)分离原理土壤中的细菌之所以能够分解尿素，是因为它