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文档简介

1、第九次实验,肠道杆菌,学习要求,观察肠道杆菌的形态染色 观察肠道杆菌在SS培养基上的生长情况及菌落特征。 掌握鉴别肠道杆菌的主要生化反应,实验内容 1、肠道杆菌形态观察（革兰染色、油镜观察） 大肠杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 变形杆菌 2、 肠道杆菌的培养SS平板、双糖铁培养基（示教） 大肠杆菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 变形杆菌 3、 肠道杆菌的接种SS平板、双糖铁培养基 4、 肠道杆菌的生化反应 I M Vi C （示教）,痢疾杆菌,伤寒杆菌,大肠杆菌,大肠杆菌（非致病菌）在SS培养基上可形成相对较大，不透明，红色的菌落。,致病性肠道杆菌在SS培养基上形成相对较小，半透明，无色或淡黄色的菌落。,SS

2、平板：为强选择性培养基，内含胆盐、枸橼酸钠和煌绿，可抑制大肠杆菌和非肠道杆菌的生长；还含有乳糖和中性红，一般肠道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨，产生碱性物质，故菌落呈淡黄色。大肠杆菌发酵乳糖，产酸使指示剂变红，故菌落呈红色。,该培养基含葡萄糖、乳糖、硫酸亚铁。指示剂为酚红。葡萄糖与乳糖的比例为1:10。 若细菌分葡萄糖、乳糖产酸产气，使斜面与底层均呈不变色，且有气泡。 若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖,分解葡萄糖后所生成的少量酸可使底层pH降低；而上层少量酸因接触空气而氧化，并因细菌生长繁殖利用含氮物质生成碱性化合物，呈红色。 若细菌产生硫化氢时与培养基中硫酸亚铁作用,形成黑色的硫化铁呈黑色。

3、配合半固体培养基可观察肠道杆菌中的细菌动力。,I M Vi C :鉴别肠道杆菌的四种常用方法,例如 大肠杆菌的结果为：+ + - - 产气杆菌的结果为：- - + +,I 靛基质试验（吲哚试验）：某些细菌具有色氨酸酶，可以分解蛋白胨的色氨酸生成靛基质，也称吲哚，与对二甲基氨基苯甲醛作用生成红色的玫瑰吲哚（阳性）。,玫瑰吲哚,M 甲基红（MP）试验：细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的PH值下降到4.5以下时，加入甲基红呈红色为阳性。如细菌分解葡萄糖产酸量甚少，或产生的酸进一步转化为其他物质时，PH值到5.4以上，甲基红呈橘黄色为阴性。,Vi VP试验：一些细菌能使丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在碱性溶液中被氧化成二乙酰，二乙酰与含胍基化合物反应生成红色化合物，是为VP试验阳性，某些细菌不能产生乙酰甲基甲醇，是为VP试验阴性。,C 枸橼酸盐利用试验：某些细菌可以通过枸橼酸酶分解枸橼酸盐生成碱性碳酸盐和碳酸氢盐，使培养基变碱，则溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色，其他细菌不能分解枸橼酸盐，得不到碳源不能生长，指示剂也就不会变色。,小

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