大肠杆菌感受态细胞的

大肠杆菌感受态细胞的Tag内容描述：<p>1、大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 作者：孙群 来源：上海交大生命学院 时间：2008-5-18 实验原理（供参考，试剂盒的Solution SS成分未知）细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是：在0下的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形。转化缓冲液中的DNA形成不易被DNA酶所降解的羟基钙磷酸复合物，此复合物粘附于细菌细胞表面。42短时间热处理（热休克），可以促进细胞吸收DNA复合物。将处理后的细菌放置在非选择性培养液中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型(如Am。</p><p>2、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）测定蛋白质分子量,一. 实验目的,学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理。 掌握垂直板电泳的操作方法。 运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定。,二 .实验原理,带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动，这种现象称为电泳。 电泳分类：移动界面电泳、区带电泳、稳态电泳。 区带电泳是在半固相或胶状介质上加一个点或一薄层样品溶液，然后加电场，分子在支持介质上或支持介质中迁移。支持介质的作用主要是为了防止机械干扰和由于温度变化以及大分子溶液的高密度而产生的对流。 区带电泳使用不同的支持介质。</p><p>3、大肠杆菌感受态细胞的制备与转化,一. 实验目的 通过本实验，学习大肠杆菌感受态细胞制备和转化的原理与技术方法。,二. 实验原理 感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能使许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。,转化（transformation）： 是将异源DNA分子引入受体细胞，使其获得新的遗传性状的一种技术方法。 进入细胞的DNA分子通过复制表达，才能实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。,大肠杆菌转化的方法： 化学法：使用化学试剂（如CaCl2）。</p><p>4、大肠杆菌感受态细胞的制备、 重组DNA的转化、克隆筛选,1. 实验目的和要求 通过本实验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。,2. 相关知识及原理 感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。,转化（transformation）： 是将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞获得新的遗传性。</p><p>5、大肠杆菌感受态细胞的制备与转化,一. 实验目的 通过本实验，学习大肠杆菌感受态细胞制备和转化的原理与技术方法。,二. 实验原理 感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能使许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。,转化（transformation）： 是将异源DNA分子引入受体细胞，使其获得新的遗传性状的一种技术方法。 进入细胞的DNA分子通过复制表达，才能实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。,大肠杆菌转化的方法： 化学法：使用化学试剂（如CaCl2）。</p><p>6、实验二,大肠杆菌感受态细胞的制备及转化,1,内容一：大肠杆菌感受态细胞的制备,实验目的,实验原理,实验仪器、材料、试剂,实验步骤,1,2,3,4,注意事项,思考题,5,6,2,实验目的,掌握感受态细胞的概念及其意义。掌握感受态。</p><p>7、a,1,大肠杆菌感受态细胞的制备,a,2,实验目的,1. 熟悉感受态细胞制备原理。 2. 掌握大肠杆菌感受态细胞制备的方法。,a,3,a,4,实验原理,在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源D。</p>