分子生物学基本技术

分子生物学基本技术Tag内容描述：<p>1、目 录 第二十二章第二十二章 常用分子生物学技术 的原理及应用 The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application 目 录 第 一 节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization & Blotting Technology 目 录 核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex) 。 一、分子杂交与印迹技术的原理 目 录 复性 RNADNA 目 录 （一）。</p><p>2、分子生物学 常用技术及其应用 主要内容 n基 因 工 程 n重组DNA技术-基因工程 n核酸分子杂交技术 nPCR 技术 n基因诊断与基因治疗 第一节 基 因 工 程 n基因工程的基本概念 n工具酶 n载体 n重组DNA技术的基本原理 n重组DNA技术的基本过程 n基因工程在医学中的应用 一、基因工程的基本概念 nDNA重组：不同来源的DNA分子可以通 过末端共价连接而形成重新组合的DNA 分子的过程。 n基因工程：将基因进行克隆，并利用克 隆的基因表达、制备特定的蛋白或多肽 产物，或定向改造细胞乃至生物个体的 特性所用的方法及相关的工作。 二、工具酶 n限制性。</p><p>3、分子生物学常用技术,第一节 凝胶电泳,带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳（electrophoresis）。 电泳技术主要用于分离各种有机物（如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、脂类、核苷、核苷酸、核酸等）和无机盐，也可用于分析某种物质的纯度及分子量的测定等。 电泳技术在分子生物学领域应用非常广泛，特别是以琼脂糖和聚丙烯酰胺为支持介质的凝胶电泳，以操作简便、快速、灵敏、分离范围广等优点成为分离、纯化、分析和鉴定核酸的主要手段。,一、琼脂糖凝胶电泳,（一）原理 核酸分子是两性解离分子。在pH3.5时，碱基上的氨基基团解离，而三个。</p><p>4、实验基本技术,分子生物学部分,存在问题,1. 基本的实验技能 2. 实验习惯 3. 责任感和安全性,态度决定一切!,核酸纯化技术 离心分离技术 凝胶电泳技术 核酸定量技术 分子杂交技术 序列分析技术 ,一 核酸纯化技术,原理,1. 核酸混合物成分: 结构类-细胞碎片，细胞器，其他 大分子-DNA，RNA，Protein，糖类，脂类等 小分子-氨基酸，小分子糖类和脂类，水，无机物等 2. 关键: DNA，RNAProtein 3. 方案： Protein变性 苯酚：强变性 25 氯仿：弱变性 24 异戊醇：消泡 1,4. 苯酚的处理：重蒸-饱和-pH 重蒸：去除醌类氧化物 饱和：防止核酸损耗 pH： 。</p><p>5、质粒的提取(碱法),分子生物学基本技术（一）,三峡大学生物化学教研室,实验目的,了解碱法提取质粒的原理； 掌握碱法提取质粒的方法。,一实验背景,质粒是染色体外的DNA分子，大小可为1kb到200kb。 大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子，以超螺旋形式存在。它是细菌内的共生型遗传因子。 其复制和遗传独立于细菌染色体，但复制和转录依赖于宿主编码的蛋白和酶。,质粒特点,质粒能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞一些表型，是比病毒更简单的原始生命。 质粒通过细菌的结合作用，从雄性体转移到雌性体， 是细菌有性繁殖的性因子. 。</p><p>6、分子生物学基础及基因检测技术,基因的基本概念 人体-组织-器官-细胞-细胞核-染色体-DNA-基因 基因检测的基本原理和检测技术简介 基因芯片技术的优缺点分析和未来发展,主要内容,？,？,？,？,？,。,206块骨头、650条肌肉、100多个关节,3亿个肺泡，体积为米的十分之一,每昼夜跳动十万次，每天排出9000升血液，血管长约9000多公里,平均重1.2公斤，体积1.5立方分米，150亿。</p>