分子生物学基本技术介绍.ppt_第1页
分子生物学基本技术介绍.ppt_第2页
分子生物学基本技术介绍.ppt_第3页
分子生物学基本技术介绍.ppt_第4页
分子生物学基本技术介绍.ppt_第5页
已阅读5页，还剩17页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验基本技术,分子生物学部分,存在问题,1. 基本的实验技能 2. 实验习惯 3. 责任感和安全性,态度决定一切!,核酸纯化技术 离心分离技术 凝胶电泳技术 核酸定量技术 分子杂交技术 序列分析技术 ,一 核酸纯化技术,原理,1. 核酸混合物成分: 结构类-细胞碎片，细胞器，其他 大分子-DNA，RNA，Protein，糖类，脂类等 小分子-氨基酸，小分子糖类和脂类，水，无机物等 2. 关键: DNA，RNAProtein 3. 方案： Protein变性 苯酚：强变性 25 氯仿：弱变性 24 异戊醇：消泡 1,4. 苯酚的处理：重蒸-饱和-pH 重蒸：去除醌类氧化物 饱和：防止核酸损耗 pH： pH7.0-8.0-核酸最适合 方法：蒸馏（183）-收集（棕色瓶）-饱和与调pH（Tris-HCl pH8.0）-0.1%8羟基喹啉- 4 或-20 保存,方法,样品+等体积饱和苯酚 10kb以上轻柔混匀；10kb以下振荡 离心（12000*g） 取上清,核酸相 Protein变性相 有机相,二 离心技术,原理,离心力：F= 2rm RCF=F/G= 2r/g =（2 * rpm）2r/g =1.119*10-5(rpm)2r 浮力密度：K=m-mp0/p 沉降阻力：f*(dx/dt) RCF=k+ f*(dx/dt) 差速离心密度梯度离心,操作,离心机分类：普通 6000rpm 高速 20000-25000rpm 超速 30000-80000rpm 平衡 温度-离心力-转速 转头：角转，平转，垂直转,三 凝胶电泳技术,原理,等电点：DNA pI=6.0-7.0 琼脂糖-PAG：支持介质 U=V/E=（d/t）/（v/l） =Q/(6 r),电泳影响因素,1. DNA物理性质 质粒： CCL OC 线形：10M 正比 1/m 2. 介质性质 10U= 10U0-KrT 分离范围：agrose：100bp-60kb PAG：5-500bp 3. 电压：5v/cm 4. 缓冲液：TAE，TBE，TPE,四 核酸定量技术,原理,A= 10（1/T） = abc 浓度：稀溶液（A-0.05-1.0）+ b=1cm DNA：1OD260=0.05ug/ul RNA：1OD260=0.04ug/ul dsDNA：1OD260=0.033ug/ul 纯度：OD260/OD280=1.6-1.8,五 分子杂交技术,六 序列分析技术,作业,1. 市售苯酚为什么要饱和与重蒸？ 2. 离心操作应该注意哪些问题？ 3. 如果要分离470bp和5kb DNA 应该选择什么凝胶？ 4. 在核DNA定量时，取10uL DNA待测液，用TE buffer 稀释到100uL 后，加入到0.5cm的石英比色皿中。OD260测定为0.21，问DNA待测液的浓度是多少？ 5. 简述DNA序列分析的基本原理。,任 务,采
人人文库> 全部分类> 教育资料 > 课件下载

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论