目的基因克隆

目的基因克隆Tag内容描述：<p>1、分子生物学大实验目的基因的克隆及表达第一节 基因操作概述2一、聚合酶链式反应(PCR)2二、质粒概述4三、凝胶电泳5四、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化6五、重组质粒的连接7六、限制性内切酶消化7七、SDS-PAGE蛋白质电泳7第二节 材料、设备及试剂7一、材料8二、设备8三、试剂：9第三节 操作步骤10一、目的基因的获得：10二、pET-21bT（pET-21bR、pET-21b）载体的获得：11三、pET-21b等与目的片段的连接作用12四、转化大肠杆菌DH5进行阳性克隆子筛选与鉴定13五、转化转化大肠杆菌BL21plyst，摇菌进行SDS-PAGE电泳。14六、融合蛋白的毒力测定。</p><p>2、分子生物学大实验目的基因的克隆及表达第一节 基因操作概述2一、聚合酶链式反应(PCR)2二、质粒概述4三、凝胶电泳5四、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化6五、重组质粒的连接7六、限制性内切酶消化7七、SDS-PAGE蛋白质电泳7第二节 材料、设备及试剂7一、材料8二、设备8三、试剂：9第三节 操作步骤10一、目的基因的获得：10二、pET-21bT（pET-21bR、pET-21b）载体的获得：11三、pET-21b等与目的片段的连接作用12四、转化大肠杆菌DH5进行阳性克隆子筛选与鉴定13五、转化转化大肠杆菌BL21plyst，摇菌进行SDS-PAGE电泳。14六、融合蛋白的毒力测定。</p><p>3、第五章 目的基因与载体的 体外重组,基因工程的操作过程,切,接,转,增,检,连接时考虑因素,实验步骤尽量简单易行 连接形成的节点序列应能被重新切割 对转录、转译中密码阅读不发生干扰,粘性末端连接 平末端连接 末端延伸连接：,连接方式,同聚物加尾 加人工接头 加DNA衔接物,粘性末端连接单酶切产生的粘性末端的连接（同种酶）,5,5,EcoRI,退火,G,CTTAA,AATTC,G,T4-DNA ligase,5,5,5,5,5,5,AATTC,G,5,5,5,EcoRI,粘性末端连接单酶切产生的粘性末端的连接（同尾酶）,BamHI,5,5,5,G,CCTAG,G。</p><p>4、实验 目的基因克隆 PCR技术 课前预习 PCR polymerase chain reaction 反应的基本原理 目的要求 1 学习和掌握 PCR 反应的基本原理与实验技术方法 2 认真完成每一步实验操作 详细记录实验现象和结果并加以分析和总结 基本原理 类似于 DNA 的天然复制过程 其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物 PCR 由变性 退火 延伸三个基本反应步骤构成 模板 DNA的。</p>