固载β-环糊精磁性材料的制备及其应用于脱除蛋黄胆固醇的研究

固载环糊精磁性材料的制备及其应用于脱除蛋黄胆固醇的研究/PAPEREDUCN1中国科技论文在线固载环糊精磁性材料的制备及其应用于脱除蛋黄胆固醇的研究邱雁，苏宇杰，杨严俊基金项目国家高技术研究发展计划863（2013AA102207）作者简介邱雁，女，硕士，蛋品加工与蛋品分析方向通信联系人杨严俊，男，教授，蛋品加工与蛋品分析方向（江南大学食品学院，江苏无锡214122）5摘要制备固载环糊精磁性纳米材料（FE3O4CYCLODEXTRIN），将该材料应用于降低蛋黄胆固醇的含量。采用傅里叶红外光谱仪、扫描电镜、纳米粒度分析仪和热分析系统表征材料。探究蛋黄稀释度、蛋黄体系PH、磷脂酶A2酶解预处理等条件对蛋黄胆固醇脱除率的影响。结果表明FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料的粒径分布范围为150NM300NM，四氧化三10铁含量为642，在乙醇中有良好的分散性。在标准胆固醇溶液中，材料的吸附平衡时间为45MIN，胆固醇吸附载量为210MG/G。当蛋黄与水比例为110（W/V）,体系PH为30或90条件下，材料具有较高的胆固醇脱除率，为51。磷脂酶A2酶解处理蛋黄液40MIN后，材料对蛋黄胆固醇脱除率可提高至58。FE3O4CYCLODEXTRIN材料作用于蛋黄液制备得低胆固醇蛋黄液，在不同PH条件下，蛋黄蛋白损失率为7581。FE3O4CYCLODEXTRIN15磁材料重复利用24次后仍具有良好的胆固醇吸附性。关键词环糊精；磁性纳米颗粒；胆固醇；蛋黄中图分类号TS2CHOLESTEROLREMOVALFROMYOLKUSINGCYCLODEXTRINGRAFTED20MAGNETICNANOPARTICLESQIUYAN,SUYUJIE,YANGYANJUNSCHOOLOFFOODSCIENCEANDTECHNOLOGY,JIANGNANUNIVERSITY,JIANGSUWUXI214122ABSTRACTINTHISPAPER,STRATEGYWASUTILIZEDTOCOATMAGNETICNANOPARTICLESUSINGORDINARYRADICALPOLYMERIZATIONPROCESSANDTHENCYCLODEXTRINWASLINKEDONTOTHESURFACEOFNANOPARTICLES25FE3O4CYCLODEXTRININSTRUMENTSASFTIR,ZETASIZERNANOZS,SCANNINGELECTRONMICROSCOPEANDTGAWEREUSEDTOANALYZETHESIZE,MORPHOLOGYANDMAGNETICPROPERTIESOFFUNCTIONEDNANOPARTICLESINOURSTUDYITWASFOUNDTHATTHESIZEOFNANOPARTICLESDISTRIBUTEDBETWEEN150NMTO300NMANDTHEMAGNETICNANOPARTICLESSHOWSPHEREMORPHOLOGYWITHGOODMAGNETICPROPERTIES,DISPERSITYANDHIGHSTABILITYMAGNETICCONTENTOFFE3O4CYCLODEXTRINWASABOUT642WITH30THESEMODIFIEDNANOPARTICLESGRAFTEDWITHCYCLODEXTRIN,PROCESSOFADSORPTIONOFCHOLESTEROLWASCONDUCTEDINSTANDARDCHOLESTEROLSOLUTIONANDEGGYOLKFE3O4CYCLODEXTRINNANOPARTICLESSHOWEXCELLENTABILITYTOADSORBCHOLESTEROLASTHEADSORPTIONEQUILIBRIUMWASWITHIN45MINANDTHEMAXIMUMADSORPTIONAMOUNTWAS210MG/GINFLUENCEOFSEVERALFACTORSONCHOLESTEROLREMOVALEFFICIENCYWEREDISCUSSEDSUCHASDILUTIONFOLDS,PHADJUSTMENT,ANDENZYMATICPRETREATMENT35PROTEINLOSSOFYOLKWAS7581DURINGTHEPROCESATDIFFERENTPHFE3O4CYCLODEXTRINLMAGNETICNANOPARTICLESSHOWEDGOODCHOLESTEROLADSORPTIONPROPERTIESAFTER24RECYCLINGTIMESKEYWORDSCYCLODEXTRINMAGNETICNANOPARTICLESCHOLESTEROLYOLK0引言40鸡蛋营养丰富，蛋白质含量高，其氨基酸组成与人体蛋白相似。鸡蛋具有良好的功能特性，例如与食品加工密切相关的起泡性、乳化性和凝胶性，广泛应用于各类食品中。但是蛋黄中的胆固醇含量较高，单个鸡蛋的胆固醇含量一般为200300MG，过多的胆固醇摄入会/PAPEREDUCN2中国科技论文在线增加高血脂症和冠心病等病症的产生1。同时,相关研究表明，胆固醇在氧气、光、热等条件下易氧化，可产生环氧胆固醇,过氧化胆固醇等60余种胆固醇氧化物，这些氧化物可致45癌并使有机体突变,有致畸、致癌的风险，因此需要降低蛋黄中胆固醇的含量来提高蛋黄液的应用性2。环糊精（CD）是常用于包埋胆固醇的一种环形化合物，能与多种物质形成包合物，包括蚊蝇醚、绿原酸以及氯霉素等35。但是纯CD粉末法包埋胆固醇的过程中存在环糊精残留问题，且纯CD粉末与胆固醇形成的包合物以类似微胶囊形式存在,难以将胆固醇从50环糊精中分离出来，使环糊精得以重复利用。因此将CD固载于特定载体上能够降低环糊精在蛋黄体系的残留率，增加环糊精的循环利用性6。磁性纳米颗粒为具有磁核功能壳体结构，在外加磁场下能够快速分离，同时磁性纳米颗粒粒径小，与目标物有较好的接触效率7。将CD固载于磁性纳米颗粒表面作为复合材料降低蛋黄中胆固醇的含量，可以提高CD的循环利用性，降低复合材料与食品体系的分55离难度。本文选择交联剂“己二酸二异腈脂”（HMDI）和催化剂“辛酸亚锡”，以“三步法”的方式制备固载CD磁性纳米颗粒（FE3O4CYCLODEXTRIN），反应条件温和，并研究FE3O4CYCLODEXTRIN纳米颗粒在蛋黄体系中降低蛋黄胆固醇含量的作用条件与影响因素。1实验部分11材料与仪器60胆固醇、CD、壳聚糖、乙酸、己二酸二异腈脂、辛酸亚锡、乙醇、七水合硫酸亚铁，六水三氯化铁，氨水、二甲亚砜（DMSO）、乙醚、石油醚、乙腈、异丙醇、磷脂酶A2、正庚烷、百里酚蓝、酚酞，以上试剂均为分析纯，购于国药集团化学有限公司。MICOLETNEXUS470傅里叶变换红外光谱仪，美国THERMOELECTRON公司；S3500激光粒度分析仪，英国马尔文公司；TGA/SDTA851E热分析系统，瑞士梅特勒托利多仪器有限公65司；WATERS1525高效液相色谱仪，美国WATERS公司；扫描电镜日立TM3030，日本日立公司；ZETASIZERNANOZS纳米粒度分析仪，英国马尔文公司；KQ400KDE型高功率数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；冷冻离心机，美国SIGMA公司；DHG9140A型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科学仪器有限公司。12FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料的制备70依据“化学共沉淀法”制备四氧化三铁磁性纳米颗粒，称取一定质量的硫酸亚铁和三氯化铁（摩尔比为13），溶解于无水乙醇与水的混合溶液中（体积比为14）。在氮气流保护下，60反应30MIN。加入氨水调节反应体系PH至10，继续反应30MIN。在磁场条件下迅速收集磁颗粒，乙醇和蒸馏水反复洗涤，冷冻干燥。将制备所得的磁性纳米颗粒在蒸馏水中超声分散30MIN，在60，氮气流的保护下高速搅拌20MIN。立即添加氨水即生成四氧75化三铁颗粒，继续反应15MIN，在外加磁场下分离，蒸馏水洗涤、冷冻干燥得FE3O4颗粒。将02G的壳聚糖溶解于50ML2的乙酸中形成壳聚糖溶液，将壳聚糖溶液以滴状方式匀速滴入磁性纳米颗粒分散液中,60下反应2H，得固定化壳聚糖磁性纳米颗粒（FE3O4CHITOSAN）。加入02ML交联剂HMDI，23滴辛酸亚锡，反应持续2H。在磁场条件下，收集磁性纳米颗粒，乙醇和水反复洗涤，冷冻干燥。制备得FE3O4CHITOSANHMDI80磁性纳米颗粒。称取2GCD，50溶解于50ML二甲亚砜（DMSO）中，将FE3O4CHITOSANHMDI纳米颗粒分散于CD/DMSO溶液中，加入催化剂辛酸亚锡。50/PAPEREDUCN3中国科技论文在线条件下反应2H，收集磁性纳米颗粒，无水乙醇反复洗涤，冷冻干燥，制备得FE3O4CYCLODEXTRIN纳米颗粒。图1为FE3O4CYCLODEXTRIN磁性纳米颗粒的制备示意图。85图1FE3O4CYCLODEXTRIN磁性纳米材料制备示意图FIG1DEMONSTRATIONOFPREPARINGPROCESSOFFE3O4CYCLODEXTRINNANOPARTICLES13FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料表征FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料采用MICOLETNEXUS470傅里叶变换红外光谱仪经KBR固体压片后进行分析，扫描波段为300CM15000CM1；颗粒的形貌及分散状态采用日立90TM3030扫描电子显微镜进行表征，将制得的颗粒超声分散在无水乙醇中，取分散液滴在铝箔上，挥干后，测定颗粒的形貌、分散状态；通过纳米粒度分析仪ZETASIZERNANOZS分析材料的粒径大小；FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料置于TGA/SDTA851E热分析系统中进行测定，25900下进行扫描，升温速度为20/MIN，氮气流速度为50ML/MIN。14FE3O4CYCLODEXTRIN材料在胆固醇标准溶液中的吸附性研究95141胆固醇含量测定采用HPLC法测定胆固醇含量。HPLC测定条件为WATERS1525HPLC分析仪，C18反相色谱柱，柱温45，流动相为乙腈和异丙醇（体积比为41），检测器测定吸光波长为210NM。142FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在胆固醇标准溶液中的吸附性研究10050MGFE3O4CYCLODEXTRIN磁材料分散在胆固醇/乙醇溶液中（1MG/ML）进行胆固醇吸附实验，吸附温度为25。根据公式QVC0CE/M计算吸附在FE3O4CYCLODEXTRIN材料上胆固醇的量。其中Q为吸附在单位质量纳米颗粒上的胆固醇含量（MG/G）；V为溶液体积；C0为初始溶液中胆固醇浓度，CE为测定溶液中胆固醇的浓度；M为FE3O4CYCLODEXTRIN纳米颗粒质量。吸附过程中，每隔5MIN测定溶液中的胆固醇含量，计算吸附在105FE3O4CYCLODEXTRIN材料上胆固醇的含量。绘制FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料的吸附等温曲线，分析材料在标准胆固醇溶液中的吸附特性。15FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在蛋黄体系中对胆固醇的吸附性研究用蛋清分离器将蛋清蛋黄分离，纸巾吸去蛋黄表面多余的蛋清。戳破鸡蛋膜，取蛋黄流出液至烧杯中备用。固载材料在蛋黄体系的吸附性与蛋黄体系状态相关，主要探讨蛋黄体系110稀释度、PH、磷脂酶A2（PLA2）酶解预处理等条件对FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料脱除蛋黄胆固醇效率的影响。151蛋黄体系稀释度调节蛋黄原液与水的比例（W/V）为15,110,115,120，分别表示蛋黄稀释倍/PAPEREDUCN4中国科技论文在线数为5倍，10倍，15倍与20倍。调节蛋黄稀释液PH至60，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料添115加量为蛋黄原液质量的10。蛋黄稀释液置于固定摇床振摇2H，温度设定为25。测定FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料作用后蛋黄胆固醇的脱除率。152蛋黄体系PH氢氧化钠或盐酸调节蛋黄体系PH至30,40,50,60,70,80，90。蛋黄与水比例设定为110（W/V）,体系温度设定为25。蛋黄稀释液中加入FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料，120置于固定摇床振摇2H。测定在不同PH条件下，蛋黄中胆固醇的脱除率。153磷脂酶A2酶解预处理蛋黄液取5G蛋黄原液，添加蒸馏水50ML稀释蛋黄原液。PLA2添加量为1（V/W），50条件下分别酶解处理5MIN,10MIN,15MIN,20MIN,25MIN,30MIN,35MIN,40MIN,45MIN,50MIN。酶解预处理结束后在90条件下，搅拌灭酶10MIN。取PLA2处理的蛋黄稀释液，加125入05GFE3O4CYCLODEXTRIN磁材料进行蛋黄液中胆固醇的吸附性实验，测定蛋黄液中胆固醇的脱除率。PLA2作用于蛋黄中磷脂将其转化为溶血磷脂，1个单位物质的量的磷脂完全转化为溶血磷脂生成1个单位物质的量的脂肪酸。以脂肪酸生成量（FFA）作为指标，测定PLA2对蛋黄液的水解进度。脂肪酸生成量测定称取40G左右反应液，加25MLDOLE试剂异丙130醇正庚烷H2SO440101,V/V/V，剧烈震荡3MIN，加入正庚烷溶液和去离子水，剧烈震荡，4000RPM离心10MIN。吸取上清液，加3滴混合指示剂（百里酚蓝酚酞13），用标准氢氧化钠乙醇溶液滴定。16蛋黄液蛋白质含量变化称取蛋黄液5G，添加蒸馏水50ML稀释蛋黄原液。在蛋黄稀释液中加入135FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料进行蛋黄液中胆固醇的吸附性实验，按152方法调节蛋黄体系PH，温度设定为25，时间为2H。凯氏定氮法测定不同PH条件下，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料作用前后蛋黄液中蛋白质含量，计算蛋白质的损失率。17FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料重复利用性按图2进行蛋黄胆固醇的脱除实验，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料经乙醇洗脱后重复利用。140每进行3次吸附洗脱循环过程后，将固载材料置于胆固醇标准溶液中，25振荡吸附2H,测定FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料对胆固醇的吸附载量。/PAPEREDUCN5中国科技论文在线图2FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料吸附洗脱循环过程示意图145FIG2DEMONSTRATIONOFSEPARATIONANDRECYCLINGPROCESSOFFE3O4CYCLODEXTRINNANOPARTICLES2结果与讨论21FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料制备方法12所示为FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料的制备过程。本研究中采用的制备方式为“三150步式包覆法”，首先将壳聚糖修饰于磁性纳米颗粒表面，在交联剂与催化剂的作用下，通过CD与壳聚糖交联将CD包覆于磁性纳米颗粒表面。该制备过程所需时间短，效率高，反应条件温和。表1为本文研究所采用的制备方式以及制备所得FE3O4CYCLODEXTRIN纳米颗粒状态与已有文献数据的对比。表1FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料不同制备方式的比较155TAB1COMPARISONOFDIFFERENTMETHODSOFPREPARATIONOFFE3O4CYCLODEXTRINNANOPARTICLES材料制备反应总时间粒径CD固载率本实验10H150300NM28LULUFAN,201283天100NM未测定NIEJUNWANG,20145天1020NM20322FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料表征221红外测定160图3FE3O4、FE3O4CHITOSAN、FE3O4CHITOSANHMDI和FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料红外光谱图FIG3FTIRSPECTRUMOFAPUREFE3O4NANOPARTICLESBFE3O4CHITOSANNANOPARTICLESCFE3O4CHITOSANHMDINANOPARTICLESDFE3O4CYCLODEXTRINNANOPARTICLES固载环糊精磁性颗粒制备过程中，利用己二酸二异腈酯（HMDI）中的腈酯键165（NCO）与环糊精作用使环糊精包覆在壳聚糖修饰的磁性纳米颗粒上。图3为磁性纳米颗粒的红外谱图，其中图3（A）为FE3O4磁性纳米颗粒红外色谱图，图3（B）为FE3O4CHITOSAN磁性纳米颗粒红外谱图，图3（C）为FE3O4CHITOSANHMDI磁性纳米颗粒/PAPEREDUCN6中国科技论文在线红外谱图图3（D）为FE3O4CYCLODEXTRIN纳米颗粒红外谱图。图3（A）中，562CM1处的吸收峰为FEO特征吸收峰；图3（B）中3420CM1处的吸收峰为壳聚糖中OH的伸缩振动；170图3（C）中2287CM1处的吸收峰为腈酯键（NCO）的特征吸收峰，表明交联剂HMDI作用于壳聚糖修饰的磁性纳米颗粒。在图3（D）中，腈酯键（NCO）的特征吸收峰强度的明显减弱,证明CD成功包覆于磁性纳米颗粒上，形成FE3O4CYCLODEXTRIN纳米颗粒。222颗粒形态及粒径分析图4为FE3O4CYCLODEXTRIN磁扫描电镜及粒径分布图，从图中可观测出纳米颗粒在乙醇175溶液中分散良好，颗粒呈球形。FE3O4CYCLODEXTRIN磁性纳米颗粒额粒径分布在150NM300NM之间。FE3O4磁性纳米颗粒的平均粒径为156NM，而FE3O4CYCLODEXTRIN磁性纳米颗粒的粒径集中分布于232NM。在磁性颗粒表面包覆上壳聚糖、环糊精等有机物会增加纳米颗粒的粒径，在本实验中，包覆壳聚糖、环糊精后颗粒粒径增加约80NM。180图4FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料扫描电镜及粒径分布图FIG4SCANNINGELECTRONMICROSCOPEANDSIZEDISTRIBUTIONOFFE3O4CYCLODEXTRINNANOPARTICLES223热重采用TGA/SDTA851E热分析系统在25800温度范围内测定FE3O4CYCLODEXTRIN磁185性材料的质量损失。从图5中得出，在25250的温度范围内，材料质量损失约为03，此部分的质量损失由纳米颗粒的表面结合水引起。在250800的温度范围内，FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料质量损失约为355，FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料质量的损失可能由较高包覆率的CD的热损失引起。通过减去结合水和聚合物的重量得出FE3O4CYCLODEXTRIN纳米颗粒中FE3O4的含量约为642。NIEJUNWANG采用SIO2交联CD190制备FE3O4CYCLODEXTRIN磁性纳米颗粒，其FE3O4的含量约为53439。/PAPEREDUCN7中国科技论文在线图5FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料热重分析图FIG5TGACURVEOFFE3O4CYCLODEXTRINNANOPARTICLES23FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在标准胆固醇溶液中的吸附性研究195从图6胆固醇吸附曲线中可以得出，FE3O4CYCLODEXTRIN纳米颗粒材料在45MIN中内可以达到对胆固醇的吸附平衡，最大吸附载量为210MG/G。作为对比，实验中同时测定了FE3O4CHITOSAN纳米颗粒的胆固醇吸附载量为30MG/G。因此，在FE3O4CHITOSAN纳米颗粒外层包覆CD之后，材料的吸附载量增加约180MG/G。分别以1/T与T作为横坐标，1/QT与T/QT作为纵坐标绘制曲线。如图7，吸附动力学数据显示，磁性纳米材料在胆固醇标准溶液200中的吸附过程符合二级动力学方程，反应常数K为027。图6时间对FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料的胆固醇吸附载量影响FIG6EFFECTOFREACTIONTIMEONTHEADSORBINGAMOUNTOFFE3O4CYCLODEXTRININITIALCONCENTRATION10MG/MLTEMPERATURE25205/PAPEREDUCN8中国科技论文在线图7FE3O4CYCLODEXTRIN材料在胆固醇标准溶液中的吸附动力学FIG7KINETICSOFTHEADSORPTIONOFCHOLESTEROLBYCYCLODEXTRINGRAFTEDNANOPARTICLESAPSEUDOFIRSTORDER210KINETICS,THELINEARPLOTOF1/QTVS1/TBPSEUDOSECONDORDERKINETICS,THELINEARPLOTOFT/QTVST24FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在蛋黄体系中对胆固醇的吸附性研究241蛋黄体系稀释度图8为不同蛋黄与水（W/V）的混合比例下，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在蛋黄体系中对胆固醇的吸附率。当蛋黄原液稀释倍数分别为5倍，10倍，15倍与20倍时，蛋黄胆固醇的215脱除率分别为27，42，64，71。当蛋黄稀释度增加时，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在蛋黄体系中对胆固醇的脱除率增加。当稀释度增加时，由于蛋黄体系粘度降低，材料在蛋黄体系中分散的传质阻力降低，因此FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料更易与目标分子接触进行作用10。但是在工业上，过高的蛋黄稀释度降低蛋黄原料利用的经济性，因此，蛋黄与水的比例宜控制在110（W/V）。220图8不同稀释度下蛋黄胆固醇脱除率FIG8CHOLESTEROLREMOVALEFFICIENCYFROMEGGYOLKATDIFFERENTDILUTIONFOLD/PAPEREDUCN9中国科技论文在线242蛋黄体系PH225图9PH3090条件下蛋黄胆固醇脱除率FIG9CHOLESTEROLREMOVALEFFICIENCYFROMEGGYOLKINTHERANGEOFPH3090图9为蛋黄体系在PH3090下磁性纳米颗粒对胆固醇的吸附性。在PH30与PH90条件下，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料具有更高的吸附率为51。在PH60与PH70条件下，230材料在蛋黄体系中对胆固醇的吸附率较低，分别为42与43。蛋黄体系中存在难溶性蛋白，其中大部分难溶性蛋白存在于蛋黄颗粒中11。蛋黄颗粒包裹蛋白质及脂类物质，利用SEM测定蛋黄颗粒粒径，约为100NM8M12。当蛋黄体系处于PH30与PH90时，部分难溶性蛋白质溶解率较高，蛋黄颗粒状态发生变化，影响FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在蛋黄体系中对胆固醇的吸附性能13。235243PLA2酶解预处理蛋黄液图10不同PLA2酶解预处理时间下蛋黄中胆固醇的脱除效率FIG10INFLUENCEOFTREATINGTIMEWITHPLA2ONTHECHOLESTEROLREMOVALEFFICIENCY240/PAPEREDUCN10中国科技论文在线图11时间对蛋黄中游离脂肪酸生成量的影响FIG11INFLUENCEOFTIMEONTHEAMOUNTOFFFAPRODUCEDPLA2酶解预处理蛋黄稀释液，酶解时间为550MIN，制备得不同酶解时间的预处理蛋245黄液。图10为在FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料作用下，不同酶解时间的蛋黄预处理液的胆固醇脱除率。PLA2酶解时间为535MIN时，蛋黄胆固醇脱除率从42升高至58，当酶解时间为40MIN之后，蛋黄胆固醇脱除率维持稳定，为58。磷脂酶A2的酶解底物为蛋黄中的磷脂，将磷脂转化为溶血磷脂，在PLA2的作用过程中，蛋黄液中蛋白质的溶解度会增高，蛋黄液中颗粒粒径会降低，增加了FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料与胆固醇的接触性14。同250时，磷脂酶A2的作用可能会引起蛋黄颗粒内蛋白质、脂类、胆固醇结合状态的变化，释放部分结合态胆固醇，提高胆固醇脱除率。PLA2作用蛋黄液后，能提高蛋黄液的乳化性，对蛋黄液的应用性影响较小。因此可采用PLA2预处理蛋黄液提高蛋黄胆固醇脱除率。图11显示，PLA2酶解处理蛋黄液过程中，在酶解时间60MIN内，脂肪酸的生成量随时间变化而升高，蛋黄磷脂在不断转化为溶血磷脂。图10与图11对比显示，在PLA2酶解蛋黄液进程255前期，蛋黄颗粒状态的变化影响FE3O4CHITOSAN磁材料对蛋黄胆固醇脱除率。酶解40MIN后，PLA2继续作用于蛋黄磷脂，蛋黄胆固醇脱除率却维持稳定。25蛋黄液蛋白质含量变化环糊精粉末包埋法、超临界CO2萃取法、化学吸附法等方式脱除蛋黄体系胆固醇时，会引起蛋黄蛋白质含量的降低。图12为不同PH条件下，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料作用于260蛋黄体系后，蛋黄液中蛋白质成分的变化。当蛋黄体系处于酸性体系时，蛋黄蛋白质损失率为7581。当PH为3时，蛋白质的损失率较高，为81。而在中性或碱性条件下，蛋黄蛋白质的损失率较低，为75。在酸性条件下，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料中的壳聚糖中氨基带正电，易结合蛋白质引起蛋黄蛋白质含量的损失。采用其它方式降低蛋黄胆固醇含量，蛋黄液中蛋白质的损失率可达到152015。本研究中，蛋白质的损失率相对较265低。/PAPEREDUCN11中国科技论文在线图12PH3090条件下蛋黄蛋白质的损失率FIG12PROTEINLOSSOFYOLKATPH309026材料重复利用性270图13重复实验中FE3O4CYCLODEXTRIN磁性材料对胆固醇的最大吸附载量FIG13MAXIMUMADSORPTIONOFCHOLESTEROLONFE3O4CYCLODEXTRINNANOPARTICLESINREPEATEDEXPERIMENTS275按照图2所示方法进行蛋黄中胆固醇的脱除实验，测定FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料的重复利用性。在重复24次胆固醇脱除实验后，固载材料的最大吸附载量约为200MG/G，结果显示该材料有良好的重复利用性。3结论本文以壳聚糖作为中间体，在交联剂HMDI与催化剂辛酸亚锡的作用下，制备280FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料，该制备方法消耗时间短、效率高。同时探索了FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在标准胆固醇溶液和蛋黄体系中的实际应用性。实验结果显示，FE3O4CYCLODEXTRIN磁材料在蛋黄体系中可有效降低蛋黄中胆固醇含量，且该材料循环利用性高，易从食品体系中快速分离。该材料在降低蛋黄胆固醇含量的同时，对蛋黄蛋白质成分影响较低，其在低胆固醇蛋黄产品的制备领域有良好的应用前景。285/PAPEREDUCN12中国科技论文在线参考文献REFERENCES1VCONWAY,PCOUTURE,CRICHARDIMPACTOFBUTTERMILKCONSUMPTIONONPLASMALIPIDSANDSURROGATEMARKERSOFCHOLESTEROLHOMEOSTASISINMENANDWOMENJNUTRITION,METABOLISMCARDIOVASCULARDISEASES,2013,23125512622ZARDETTOS,BARBANTID,DALLAROSAMFORMATIONOFCHOLESTEROLOXIDATIONPRODUCTSCOPSANDLOSSOF290CHOLESTEROLINFRESHEGGPASTAASAFUNCTIONOFTHERMALTREATMENTPROCESSINGJFOODRESEARCHINTERNATIONAL,2014,621771823GURARSLANA,SHENJ,CAYDAMLIY,TONELLIAEPYRIPROXYFENCYCLODEXTRININCLUSIONCOMPOUNDSJJOURNALOFINCLUSIONPHENOMENAANDMACROCYCLICCHEMISTRY,30184RAMOSAI,BRAGATM,SILVAP,FERNANDESJA,RIBEIROCLAROPCYCLODEXTRININCLUSIONCOMPOUNDS295CODISSOLUTIONANDMECHANOCHEMICALPREPARATIONSANDANTIBACTERIALACTIONJCRYSTENGCOMM,2013,1515282228345BUDRYNG,NEBESNYE,PAECZB,RACHWAROSIAKD,HODUREKPINCLUSIONCOMPLEXESOFCYCLODEXTRINWITHCHLOROGENICACIDSCHASFROMCRUDEANDPURIFIEDAQUEOUSEXTRACTSOFGREENROBUSTACOFFEEBEANSCOFFEACANEPHORALJFOODRESEARCHINTERNATIONAL,2014,612022133006沈海民，纪红兵，武宏科环糊精的固载及其应用最新研究进展