PCR技术在医学检验中应用PPT课件_第1页
PCR技术在医学检验中应用PPT课件_第2页
PCR技术在医学检验中应用PPT课件_第3页
PCR技术在医学检验中应用PPT课件_第4页
PCR技术在医学检验中应用PPT课件_第5页
已阅读5页，还剩8页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

PCR技术在医学检验中应用,主要内容： 1.PCR的定义； 2.PCR的基本原理； 3.,一、PCR的定义：,PCR（polymerase chain reaction) ：聚合酶链式反应，又称体外DNA扩增技术。是近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的新技术。,PCR技术：1985年由美国的Kary Mullis 首创，可以将微量目的DNA片段扩增一百万倍以上。 优点：敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等，广泛应用于微生物学、考古学、法医学及体育等领域，并已普及到许多普通实验室，大大简化了传统的分子克隆技术，从而比较容易地对目的基因进行分析、鉴定。,二、PCR的原理：,用于扩增位于两段已知序列之间的DNA片段，类似于天然DNA的复制过程。 以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5末端和3末端互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，即可使目的DNA片段得到扩增。,扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异性结合，一个典型的PCR反应包括，“变性-退火-延伸”的多个循环,其一般反应过程为： 1. 变性 (Denaturation)： 将体系加热至(95， 30)使模板DNA互补双链间的氢键断而解离成为两条单链DNA，以便他与引物结合，为下轮反应做准备。,2. 退火 (复性) (Annealling): 将体系温度突然将温度降至（55 左右）后寡核苷酸引物与模板DNA单链上的互补序列杂交（按碱基互补配对原则结合）。同时，体系中的部分DNA聚合酶被激活，一旦引物与模板杂交，DNA聚合酶就结合到杂交序列上使引物开始沿着模板DNA延伸。这一步对扩增产物特异性有重要的决定作用；,3. 延伸 (Extension): 将反应体系温度升至DNA聚合酶的最佳扩增温度（72 ），与模板DNA结合的引物在DNA聚合酶的作用下，以 dNTP作为反应原料，以引物的 3 端开始，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条与模板DNA链互补的新DNA链。,上述 3 步为一个循环，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，重复以上3步，根据需要的量，经过2540个循环，DNA可扩增106 109 倍。 在PCR反应中，每一个循环都以前一循环完成后的所有产物为模板，因此，扩增产物是以指数方式增长的（2n）。,25-40个循环,三 PCR反应体系的组
人人文库> 全部分类> 专业文献 > 医学资料

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论