植物性农产品中赤霉素残留量的测定 液相色谱-质谱质谱联用法

DB52贵州省地方标准DBS52/XXXXXXXXX食品安全地方标准植物性农产品中赤霉素残留量的测定液相色谱质谱/质谱联用法DETERMINATIONOFGIBBERELLININPLANTPRODUCTSHPLCMS/MS（征求意见稿）XXXXXXXX发布XXXXXXXX实施贵州省卫生与计划生育委员会发布DBS52/XXXXXXXXX目次前言II1范围12规范性引用文件13原理14试剂与材料15仪器与设备26分析步骤27精密度4附录A5附录B6DBS52/XXXXXXXXXI前言本标准按照GB/T112009标准化工作导则第1部分标准的结构和编写给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由贵州省农业委员会提出。本标准由贵州省农业委员会归口。本标准起草单位中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人金芬、王静、邵华、金茂俊、佘永新、郑鹭飞、王珊珊、史小梅、张鹏。本标准为首次发布。DBS52/XXXXXXXXX0食品安全地方标准植物性农产品中赤霉素残留量的测定液相色谱质谱/质谱联用法1范围本标准规定了蔬菜水果茶叶中赤霉素（GA3残留量的采用液相色谱质谱联用的测定方法。本标准适用于桔子、苹果、葡萄、黄瓜、油菜、番茄、西瓜、茶叶、茶青中赤霉素（GA3残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8855新鲜水果和蔬菜取样方法3原理试样中的赤霉素用乙腈乙酸溶液提取，经离心、C18基质分散萃取、微孔滤膜过滤，高效液相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂与材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，实验用水应符合GB/T6682规定的二级水要求。41乙酸（997）42乙酸铵（995）43乙腈（色谱纯）44甲醇（色谱纯）45C18填料（目）46无水硫酸镁47氯化钠48ENVICARB固相萃取柱49标准储备液称取100MG（精确到01MG）的赤霉素标准品（48），用甲醇（44）溶解并定容于50ML容量瓶中，该溶液浓度为2MG/ML，于20冰箱内贮存,有效期6个月。410标准工作溶液根据赤霉素在仪器上的响应强度，用空白样品提取液配成不同浓度（NG/ML）的混合标准工作溶液，于4条件下保存，有效期2周3周。DBS52/XXXXXXXXX1411022M有机微孔滤膜412乙腈01乙酸量取100ML乙腈（43），加入用移液枪吸取的01ML乙酸（41）。413乙腈05乙酸量取100ML乙腈（43），加入用移液枪吸取的05ML乙酸（41）。414500ML纯水（4）中加入1927MG乙酸铵（42）和25ML乙酸（41），即为流动相A；500ML甲醇（44）中加入1927MG乙酸铵（42）和25ML乙酸（41），即为流动相B。5仪器与设备51液相色谱质谱仪配有电喷雾离子源（ESI）52高速匀浆机53离心机转速不低于10000R/MIN54分析天平感量为1MG、001MG55超声波清洗器56涡旋混合器57具塞塑料离心管50ML58具塞塑料离心管10ML59样品粉碎机6分析步骤61试样制备取代表性的样品，经缩分后，将其切碎，充分混匀放入食品加工器粉碎（59），均匀分散，制成待测样，备用。62提取净化果蔬样品称取10G（精确至001G）蔬菜水果试样于50ML具塞塑料离心管（57）中，加入10ML乙腈01乙酸（411）提取液，加入无水硫酸镁（46）4G，高速匀浆1MIN后，于10000R/MIN下离心5MIN。静置片刻，吸取1ML上清液，于10ML具塞塑料离心管（58）中，加入30MGC18填料（45）后,高速匀浆1MIN后，于10000R/MIN下离心5MIN。过022M有机微孔滤膜（411），待测。茶叶样品称取2G（精确至001G）试样于50ML具塞塑料离心管（57）中，加入10ML水与10ML乙腈05乙酸（412）提取液，高速匀浆1MIN后，于10000R/MIN离心5MIN。静置片刻，移取上清液到50ML离心管（57）中，重复提取一次，合并上清液，在上清液中加入氯化钠（47）1G，无水硫酸镁（46）2G，高速匀浆1MIN后，于10000R/MIN离心5MIN，取1ML上样，过5ML乙腈活化的ENVICARB固相萃取柱（48），用5ML乙腈洗脱，收集洗脱液，1ML甲醇复溶，过022M有机滤膜（411），待测。茶青样品称取5G（精确至001G）试样，加入10ML乙腈05乙酸（412）提取液，高速匀浆1MIN后，于10000R/MIN离心5MIN。静置片刻，移取上清液到50ML离心管（57）中，重复提取一次，合并上清液，在上清液中加入氯化钠（47）1G，无水硫酸镁（46）2G，高速匀浆1MIN后，于10000R/MIN离心5MIN，取1ML上样，过5ML乙腈活化的ENVICARB固相萃取柱（48），用5ML乙腈洗脱，收集洗脱液，1ML甲醇复溶，过022M有机滤膜（411），待测。63高效液相色谱质谱测定DBS52/XXXXXXXXX2631液相色谱参考条件A色谱柱C18液相色谱柱5M，21MM150MM或相当。B流动相A5MMOL/L乙酸铵05乙酸水溶液；B5MMOL/L乙酸铵05乙酸甲醇溶液，梯度洗脱程序见表1。表1梯度洗脱程序表C柱温40。D流速02ML/MIN。E进样体积5L632质谱条件A离子源电喷雾ESI，正负离子切换模式。B扫描方式多反应监测MRM。C雾化气、气帘气及辅助气均为高纯氮气或其他合适气体；使用前应调解各气体流量以及离子源温度（TEM）使质谱灵敏度达到检测要求，雾化气压力（GS1）、气帘气压力（CUR）、辅助气流速（GS2）等详细条件参见附录A。D）电喷雾电压（IS）、碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）、碰撞室入口电压（EP）、碰撞室出口电压（CXP）应优化至最佳灵敏度，监测离子和定量离子等详细条件参见附录A。633定性通过样品总离子流色谱图上各色谱峰的保留时间和各色谱峰对应的特征离子与标准样品相应的保留时间和各色谱峰对应的特征离子进行对照定性。样品与标准品保留时间的相对偏差不大于25。样品中目标化合物的特征离子相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表1的规定，则可判断样品中存在目标化合物。表2定性离子相对丰度的最大允许偏差时间（MIN）5MMOL/L乙酸铵05乙酸水溶液（流动相A）5MMOL/L乙酸铵05乙酸甲醇溶液（流动相B）0851516040356040650501045551559520595238515288515DBS52/XXXXXXXXX3相对离子丰度5020至5010至2010允许的相对标准偏差20253050634标准曲线的绘制取空白样品按照62处理。用所得的样品溶液将赤霉素标准储备液（48）逐级稀释得到的浓度为05、1、25、5、10、100、200、500NG/ML的标准工作液（49），浓度由低到高进样检测，以定量离子峰面积浓度作图，得到标准曲线回归方程。本方法采用外标法定量。635空白试验不加试样，均按上述步骤进行操作。636结果计算试样中赤霉素残留量以质量分数W表示，单位以毫克每千克（MG/KG）计，按公式（1）计算WN（1）式中W样品中赤霉素含量，单位为毫克每千克（MG/KG）；A试样溶液对应的色谱峰面积响应值；AS赤霉素标准溶液对应的色谱峰面积响应值；CS赤霉素标准溶液的浓度，单位为微克每毫升（G/ML）；V样液最终定容体积，单位为毫升（ML）；M样品的质量，单位为克（G）；N稀释倍数。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15。ACSVASMDBS52/XXXXXXXXX4AA附录A（资料性附录）API5000四级杆质谱仪参数（）质谱仪参数A电喷雾电压IS正模式4500V；负模式4500V。B雾化气压力GS140PSI。C气帘气压力CUR5PSI。D辅助气流速GS240PSI。E离子源温度TEM450C。F监测离子对、碰撞电压（CE）、去簇电压（DP）、碰撞室入口电压（EP）、碰撞室出口电压（CXP）如表A1所示。表A1定性、定量离子对以及CE、DP、EP、CXP参数表化合物母离子Q1子离子Q3CEVDPVEPVCXPV143140901015赤霉素3452221230901015其中为定量离子对。1非商业性声明附录A所列参考质谱条件是在AGLIENT1200液相色谱仪，ABAPI5000质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅为